急性缺血心肌脂肪酸代谢的变化

1、急性缺血心肌脂肪酸代谢的变化         10-09-13 10:15:00     编辑：studa20                      作者：王红艳 赵晓云 杨法中 邢邯英 张萍 李小慧【摘要】  目的 观察急性缺血心肌心脏型脂肪酸

2、结合蛋白（HFABP）表达及血清游离脂肪酸（FFA）含量的动态变化。方法 健康SD雄性大鼠随机分为对照组和5个实验组(实验1、2、 3、4、5组分别为心肌缺血1、2、4、6、12 h);HE染色观察各实验组心肌缺血后病理形态学改变，用Western印迹检测心肌HFABP表达的变化，用一步提取比色法测定血清FFA含量。结果 （1）缺血2、4 h组心肌细胞明显肿胀，有部分形成了“收缩带”；缺血6、12 h心肌细胞边界不清、局灶性凝集坏死，缺血12 h组有大量炎性细胞浸润。（2）Western印迹法检测： 实验2、3、4、5组与对照组比较心肌HFABPFABP表达明显下降，血清FFA含量明显升高，可

3、能导致心肌细胞代谢紊乱，促进心肌肥厚重构。 【关键词】  心肌缺血；脂肪酸结合蛋白;能量代谢；脂肪酸缺血性心脏病是世界范围内主要的致死和致残原因，仍需寻找更有效的治疗缺血心肌的方法1。事实上受损的能量供给是缺血性心脏病的中心环节2。心肌缺血时脂质代谢的改变，可引起膜的流动性、渗透性或信号级联的变化，对心脏的生理功能产生复杂影响。心脏型脂肪酸结合蛋白（hearttype fatty acidbinding protein，HFABP）富含于心肌细胞的胞浆内，参与了心肌脂肪酸的代谢过程，对心肌细胞有不同方面的保护作用3。目前急性缺血心肌组织HFABP 表达研究仅有急性心肌缺血后20、40

4、 min及1 d后的变化4，5。本研究观察急性心肌缺血后112 h心肌组织HFABP动态表达，以期揭示HFABP在急性心肌损伤中的改变，为临床防治急性心肌缺血提供新思路。    1  材料与方法    1.1  主要试剂  山羊抗大鼠HFABP抗体(Santa cruz,美国)，小鼠抗GAPDH抗体购自上海康成生物公司，HFABP引物、actin引物由上海生工公司合成。    1.2  动物模型及分组  SD大鼠60只，购于河北医科大学动物中心（动物中心许

5、可证：04064），雄性,体重250300 g，随机分为6组，每组10只。对照组：麻醉开胸穿线不结扎组;实验1组：心肌缺血1 h组(模型成功7只);实验2组：心肌缺血2 h组(模型成功8只);实验3组：心肌缺血4 h组(模型成功8只);实验4组：心肌缺血6 h组(模型成功7只);实验5组：心肌缺血12 h组(模型成功6只)。    实验组按Selye法6结扎大鼠左冠状动脉前降支复制急性心肌梗死动物模型：以3%戊巴比妥钠麻醉大鼠后，固定动物、皮肤消毒、气管插管、接动物呼吸机，于左锁骨中线第4、5肋间钝性分离肌层开胸，轻压胸廓及腹部，挤出心脏，以肺动脉圆锥和左心耳交接

6、处为标志，于左冠状动脉起始端，穿过心肌浅中层快速结扎，肉眼观察心脏左室前壁颜色变苍白，迅速还纳心脏入胸腔。观察心电图，以肢体导联ST段抬高0.1 mv或QRS波明显增宽持续30 min以上为结扎成功的客观指标。行TTC及Evans染色区分梗死区、缺血区和非缺血区。对照组开胸后即刻取心肌，实验组分别于左前降支闭塞后1、2、4、6、12 h麻醉后腹主动脉放血处死留取缺血区心肌组织，-80保存。    1.3  石蜡包埋HE染色心肌组织  取结扎线下心室组织，用4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋、切片后进行HE染色，封片后光学显微镜下观察心肌组织病理学

7、改变。    1.4  Western印迹法检测  （1）提取各组心肌组织总蛋白，用BCA法进行蛋白定量。每组各取100 g 蛋白经15%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，将蛋白转移至PVDF膜，再用一抗（HFABP多抗1100）4过夜，二抗（抗山羊13 000）室温孵育1 h， DAB显色，数码相机拍照，凝胶图像分析系统（GelPro Analyzer Version 3.0）分析结果。    1.5  血清游离脂肪酸的测定  根据游离脂肪酸（FFA）检测试剂盒（南京建成生物公司研究所）说明进行。用铜试

8、剂测定其中铜离子的含量，即可以推算出游离脂肪酸的含量。    1.6  统计学分析  数据均以x±s表示。采用SPSS 10.0统计软件,组间差异用单因素方差分析（one way ANOVA）,有显著差异者用最小显著差法（least significant difference，LSD）进行两两比较。    2  结  果    2.1  心肌组织病理学检查  对照组大鼠心肌细胞排列整齐，染色清晰，边界清楚，横纹清晰，无变性，间质无水肿

9、、出血;缺血1 h组的心肌细胞出现波纹状改变,但心肌细胞间质无水肿出血,未见心肌细胞肌浆凝集或肌溶性破坏及炎症反应；缺血2、4 h组与1 h组比较心肌细胞明显肿胀，嗜伊红性增强,仍有波纹状改变,并且缺血4 h组有部分心肌或肌节出现节段性凝聚或收缩，形成“收缩带”；缺血6、12 h组出现心肌细胞边界不清，肌纤维横纹模糊，细胞破碎，局灶性心肌细胞凝集坏死，缺血12 h组有大量炎性细胞(主要是嗜中性粒细胞)浸润（图1）。    2.2  各组缺血心肌组织中HFABP蛋白的表达  Western印迹法检测各组大鼠心肌GAPDH蛋白，均见明显的36 kD条带，各组IOD值与对照组相比均无统计学差异（P0.05）,证实各组蛋白上样量相同；对照组和实验1、2、3、4、5组大鼠缺血心肌组织HFABP/GAPDH的IOD比值分别为（58.62±12.28）%、（50.74±9.