桂枝甘草汤方药半仿生提取等4种方法提取液的成分比较

1、桂枝甘草汤方药半仿生提取等4种方法提取液的成分比较         09-09-13 09:20:00     作者：徐萍    编辑：studa20【摘要】  目的优选桂枝甘草汤方药成分的提取工艺。方法以甘草次酸、肉桂酸、总黄酮、挥发油、干浸膏的含量为指标,在药材粒度、溶剂量、煎提温度、滤过、浓缩等条件相同的前提下,采用半仿生提取法(SBE法)、水提取法(WE法)、半仿生提取醇沉法(SBAE法)、水提取醇沉法(WAE法)进行

2、比较研究。结果5个指标综合评价Y值为:SBE法WE法SBAE法WAE法。结论 桂枝甘草汤方药成分的提取以用SBE法为佳。即3次煎提用水的pH值依次为：2.00，7.20，8.50，煎煮的时间依次为190，90，50 min。 【关键词】  桂枝甘草汤 半仿生提取法 综合指标Abstract：ObjectiveThe extraction technologies for the components of Guizhi Gancao Decoction were optimized.MethodsFour methods: the semi -bionicextraction(SBE

3、), the water extraction(WE), the semi-bionicextraction by precipitation with alcohol(SBAE) and the water extraction by precipitation with alcohol(WAE) were used to extract Guizhi Gancao Decoction,with glycyrrhetinic acid，cinnamic acid，total flavones，volatile oil and dry extract taken as the marker,u

4、nder the same conditions of druggranularity, solventamount, decocting temperature, filtration, concentration, etc., and then four methods were compared and studied.Results Through the comprehensive evaluation of seven markers, their comprehensive values Y decreased in the order of SBE, WE, SBAE and

5、WAE. ConclusionSBE is better than the other three methods in the extraction of the components of Guizhi Gancao Decoction, which is shown by the fact that the pH values of the water for the 1st, 2nd and 3rd decoctions are 2.00，7.20，8.50 and the extraction times are 190，90 min and 50  min respect

6、ively.Key words： Guizhi Gancao Decoction；  SBE method；  Comprehensive index       桂枝甘草汤由桂枝、炙甘草组成。具有补心助阳、升阳化气、补阳扶中的作用。根据SBE法理论16，在用均匀设计优选出桂枝甘草汤方药SBE法工艺条件和醇沉较佳浓度的基础上7，8，为进一步探讨该方药用SBE法提取是否较目前普遍适用的提取方法为佳,故以甘草次酸、肉桂酸、总黄酮、挥发油、干浸膏得率为指标,对该方药做了4种提取方法的平行对照实验。1  仪器与药品pHS3

7、C型精密pH计(上海雷磁仪器厂)；760双光束紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；MA110型电子分析天平(上海第二分析仪器厂)；LXJ型离心沉淀机(上海第三分析仪器厂) ；754紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；vp高效液相色谱仪 (SHIMADZU CORPORATION ASSEMBLED IN CHINA)，SPD10A检测器，LC10AT泵； KQ250E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；RE52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。     药材经张兆旺鉴定，桂枝为樟科植物肉桂Cinnamomum  c

8、assia  Presl的干燥嫩枝，甘草为豆科植物甘草GLycyrrhiza uraLensis Fisch的干燥根及根茎，炙甘草：取炼蜜，加适量冷开水稀释后，淋入净甘草片中拌匀，闷润，置炒制容器内，用文火加热，炒至老黄色，不粘手时取出，晾凉。（甘草片每100 kg，用炼蜜25 kg）。     甘草次酸、肉桂酸、柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）批号分别为723-200109，0786-9802，722-200107；甲醇（色谱纯）；重蒸馏水，其余试剂均为A，R。2  方法与结果2.1  提取液的制备2.1.1&#

9、160; SBE液将处方药材分别粉碎，按处方比例(桂枝：甘草=21)称取药材1020目粗粉120 g，采用桂枝与甘草混煎的方式，用SBE法工艺条件分别提取3次(双提法；第1煎用水用0.1 mol· L-1HCl调至pH为2.00，第2、3煎用水用0.1 mol·L-1NaOH调至pH为7.20，8.50；加水量依次为药材重量的10，8，8倍；煎煮时间依次为190，90，50 min；双提法提取的挥发油另器保存)，分别滤过，离心，合并上清液，水浴浓缩至400 ml（每毫升相当于原药材0.3 g）。2.1.2  SBAE液取SBE液100 ml，加入95%的乙醇调至醇

10、浓度为70%，冷藏放置24 h，离心，上清液回收乙醇至无醇味后，分别用蒸馏水定容至100 ml（每毫升相当于原药材0.3 g）。2.1.3  WE液按“2.1.1”项下方法，只改用中性水作为3煎用水，依法制得（每毫升相当于原药材0.3 g）。2.1.4  WAE液取WE液100 ml，按“2.1.2”项下方法，依法制得（每毫升相当于原药材0.3 g）。2.2   供试液的制备精取“2.1”项下提取液各10 ml，加水35 ml，缓缓加入盐酸4 ml，静置30 min， 待气泡消失后加盐酸1 ml，加氯仿30 ml，水浴加热回流1.5 h，放冷，移至分液漏

11、斗中，静置，分取氯仿层（下层），水层用氯仿萃取2次，20 ml/次，合并氯仿液，回收至干，用无水乙醇定容至25 ml，即得供试液A（每毫升相当于原药材0.12 g）。    精取“2.1”项下提取液各15 ml，置于蒸发皿中，拌硅藻土4 g，混匀，水浴蒸至近干， 105烘干，研匀，加入醋酸乙酯40 ml，超声提取20 min，滤过，回收醋酸乙酯，残渣用甲醇定容至5 ml，即得供试液B（每毫升相当于原药材0.9 g）。    取“2.1”项下提取液各25 ml，置于蒸发皿中，拌硅藻土4 g，混匀，水浴蒸至近干，105烘干，研匀，用甲醇1

12、00 ml索氏回流提取5 h（至无色），补足损失重量，滤过，用甲醇定容至100 ml，即得供试液C（每毫升相当于原药材0.075 g）。    精取“2.1”项下提取液各15 ml，分别置蒸发皿中，加硅藻土4 g，拌匀，水浴蒸至近干，105烘干，研细，用50%乙醇40 ml超声提取30 min，滤过，定容至100 ml，得供试液D(每毫升相当于原药材0.045 g)。2.3   HPLC指纹图谱定性比较2.3.1   色谱条件色谱柱Phenomenex，(5 m，4.6 mm×150 mm )；检测波长254 nm

13、；柱温：室温；灵敏度：1.0AUFS；流动相：甲醇-0.1%磷酸水，甲醇(5%28%)：04 min甲醇（2852%）：415 min 甲醇（52%84%）：1525 min 甲醇（84100%）：2545 min；流速：1 ml·min-1；进样量20 l。2.3.2  HPLC指纹图谱的比较取供试液D分别进样，进行色谱分析，对样品各主要特征峰进行比较，结果见图15及表1。 确定检测波长为244 nm，见图6。表1  4种方法提取液HPLC指纹图谱色谱峰积分值峰位 保留时间（略）2.4  甘草次酸的含量测定2.4.1  检测波长的选择精密称取甘草次酸对照品3.5 mg，加无水乙醇溶解并定容至10 ml，摇匀，以溶剂为空白对照，用760双光束紫外可见分光光度计在波长200 400 nm范围内扫描，结果甘草次酸在244 nm处有最大吸收，故2.4.2  色谱分析条件色谱柱Phenomenex，(5 m，4.6 mm×150 mm )；检测波长244 nm；灵敏度 1.0AUFS；柱温：室温；流动相：甲醇-0.1%磷酸水(8713)；流速：1 ml·min-1；进样量20 l。2.4.3  线性关系考察       精取