畜牧兽医哺乳动物胚胎与配子生物工程技术学习教案

1、会计学1畜牧兽医哺乳动物胚胎与配子畜牧兽医哺乳动物胚胎与配子(piz)生物工生物工程技术程技术第一页，共100页。一、概述(i sh)提供胚胎的母畜称为供体（Donor）接受胚胎的母畜称为受体（Recipient）第1页/共99页第二页，共100页。第2页/共99页第三页，共100页。第3页/共99页第四页，共100页。(一)生理学基础(jch)第4页/共99页第五页，共100页。第5页/共99页第六页，共100页。 不超过周期黄体的寿命。 通常是在供体发情配种(pi zhng)后3-8天内收集胚胎。第6页/共99页第七页，共100页。3、胚胎(piti)的质量0-2d1-3d2-3d3-5d

2、4-5d5-6d5-7d7-8d7-9d8-10d9-11d第7页/共99页第八页，共100页。第8页/共99页第九页，共100页。牛胚胎(piti)移植示意图第9页/共99页第十页，共100页。Boer胚胎(piti)移植示意图优良(yuling)公Boer羊供体母Boer羊超排手术(shush)取胚受体母山羊同期发情后代第10页/共99页第十一页，共100页。第11页/共99页第十二页，共100页。第12页/共99页第十三页，共100页。 （发情(fqng)911天）FSHPG法牛超数排卵早：； 晚：早：；晚：早：；晚：早：；晚：发情(fqng)后配种或输精两次，每隔6h输一次(为0d)第

3、67d冲洗子宫(zgng)：盐酸利多卡因尾椎麻醉桑椹胚早期囊胚第13页/共99页第十四页，共100页。PMSG法牛超数排卵发情(fqng)第1617d，注射PMSG15003000IU隔日( r)注射 hCG10001500IU2448h发情(fqng)，配种或输精（为第0d）第67d冲洗子宫，获得桑椹胚早期囊胚第14页/共99页第十五页，共100页。FSHPG法羊(f yn)超数排卵 早：FSH（国产(guchn)，瓶）；晚：FSH 早：FSH；晚：FSH早：FSH + PGF22ml ；晚：FSH2448h发情(fqng)，配种或输精两次（为第0d）发情周期第1213d（绵羊）、1618d

4、（山羊）第6d冲洗子宫，获得桑椹胚早期囊胚同时静脉注射LH100150IU*国产FSH总量为150300IU（一）第15页/共99页第十六页，共100页。PMSG法羊(f yn)超数排卵发情周期的 1213d（绵羊(minyng)）、 第1618d（山羊）注射PMSG8001500IU2448h发情(fqng)，配种或输精（为第0d）同时注射hCG500750IU第6d冲洗子宫，获得桑椹胚早期囊胚（二）第16页/共99页第十七页，共100页。PMSG法小鼠超数排卵注射(zhsh)PMSG1020IU48小时(xiosh)后注射hCG1020IU，公母合笼24小时后刺破输卵管，获得(hud)早期

5、受精卵第17页/共99页第十八页，共100页。第18页/共99页第十九页，共100页。第19页/共99页第二十页，共100页。同期发情同期发情(fqng)(fqng)与超排程与超排程序序放栓发情鉴定配种0-910111213141516171819207:00 FSH 4ml18:00 FSH 4 ml7:00 FSH 2.5ml18:00 FSH 2.5ml7:00 FSH 2ml14:00 PG6ml18:00 FSH 2ml7:00 FSH 1.5ml14:00 取栓取栓18:00 FSH 1.5ml配种配种检查黄体冲胚移胚第20页/共99页第二十一页，共100页。第21页/共99页第二

6、十二页，共100页。优点：冲卵比较彻底(chd)缺点：手术对动物剌激性大第22页/共99页第二十三页，共100页。从子宫(zgng)角顶端冲洗输卵管：牛、羊、兔胚胎(piti)在输卵管中第23页/共99页第二十四页，共100页。从输卵管伞处冲洗(chngx)输卵管：猪、马胚胎(piti)在输卵管中第24页/共99页第二十五页，共100页。胚胎(piti)在子宫角时从子宫角上端(shn dun)向基部冲洗第25页/共99页第二十六页，共100页。2、非手术法收集(shuj)胚胎优点：对动物损伤小， 缺点(qudin)：冲卵不彻底，需要冲卵液多第26页/共99页第二十七页，共100页。非手术法收集

7、(shuj)胚胎第27页/共99页第二十八页，共100页。第28页/共99页第二十九页，共100页。第29页/共99页第三十页，共100页。第第6 6天收集天收集(shuj)(shuj)的胚胎（未拣）的胚胎（未拣）1、检胚第30页/共99页第三十一页，共100页。二细胞二细胞(xbo)(xbo)至四细胞至四细胞(xbo)(xbo)胚胎胚胎 第31页/共99页第三十二页，共100页。2、胚胎(piti)鉴定 形态学法第32页/共99页第三十三页，共100页。原核(yun h)8细胞正常(zhngchng)胚胎第33页/共99页第三十四页，共100页。桑椹(sn zhn)胚早期囊胚第34页/共99

8、页第三十五页，共100页。异常(ychng)胚胎示意图未受精卵未受精卵胞质中有空泡第35页/共99页第三十六页，共100页。卵裂(lun li)球脱落卵裂(lun li)球分散卵裂(lun li)球不规则受精卵退化第36页/共99页第三十七页，共100页。透明(tumng)带破裂透明(tumng)带不规则卵圆形透明(tumng)带第37页/共99页第三十八页，共100页。第38页/共99页第三十九页，共100页。第39页/共99页第四十页，共100页。第40页/共99页第四十一页，共100页。(一) 问题(wnt)第41页/共99页第四十二页，共100页。结合起来。结合起来。第42页/共99页

9、第四十三页，共100页。一、胚胎(piti)冷冻第43页/共99页第四十四页，共100页。形成(xngchng)冰晶胞外水分(shufn)渗透压升高细胞脱水、蛋白质变性胞内水分形成大的冰晶细胞死亡胞外溶液效应抗冻保护剂胞内形成大的冰晶胞外溶液效应第44页/共99页第四十五页，共100页。第45页/共99页第四十六页，共100页。缺点：费时，需要特殊仪器缺点：费时，需要特殊仪器第46页/共99页第四十七页，共100页。胚胎采集(cij)洗涤加甘油(n yu)中平衡20装管0平衡10以1/分降至 - 6 -7并平衡10以0.3-0.5/min降至-35-38后投入液氮。投入37水中解冻1，然后用蔗

10、糖PBS液洗2次。第47页/共99页第四十八页，共100页。第48页/共99页第四十九页，共100页。第49页/共99页第五十页，共100页。第50页/共99页第五十一页，共100页。第51页/共99页第五十二页，共100页。10%FSC+半胱氨酸半胱氨酸69mg/L第52页/共99页第五十三页，共100页。培养(piyng)成熟牛卵母细胞第53页/共99页第五十四页，共100页。第54页/共99页第五十五页，共100页。第55页/共99页第五十六页，共100页。第56页/共99页第五十七页，共100页。液滴示意图第57页/共99页第五十八页，共100页。第58页/共99页第五十九页，共100

11、页。制片、固定、染色示意图 第59页/共99页第六十页，共100页。第60页/共99页第六十一页，共100页。卵质中；注射后的卵母细胞卵质中；注射后的卵母细胞体外培养。体外培养。第61页/共99页第六十二页，共100页。胞质内授精（ICSI）第62页/共99页第六十三页，共100页。带下授精第63页/共99页第六十四页，共100页。一、胚胎(piti)分割第64页/共99页第六十五页，共100页。胚胎(piti)分割第65页/共99页第六十六页，共100页。第66页/共99页第六十七页，共100页。第67页/共99页第六十八页，共100页。核移植的程序(chngx)图第68页/共99页第六十九

12、页，共100页。克隆技术路线图第69页/共99页第七十页，共100页。第70页/共99页第七十一页，共100页。“多莉”doly第71页/共99页第七十二页，共100页。显微(xin wi)注射仪第72页/共99页第七十三页，共100页。显微注射(zhsh)仪操作臂第73页/共99页第七十四页，共100页。显微注射(zhsh)仪操作臂第74页/共99页第七十五页，共100页。显微注射(zhsh)仪操作臂第75页/共99页第七十六页，共100页。拉针仪第76页/共99页第七十七页，共100页。煅烧(dunsho)仪第77页/共99页第七十八页，共100页。磨针仪第78页/共99页第七十九页，共1

13、00页。第79页/共99页第八十页，共100页。第80页/共99页第八十一页，共100页。第81页/共99页第八十二页，共100页。转基因动物(dngw)的制备第82页/共99页第八十三页，共100页。第83页/共99页第八十四页，共100页。转基因动物(dngw)制备过程第84页/共99页第八十五页，共100页。第85页/共99页第八十六页，共100页。转基因小鼠制备(zhbi)过程第86页/共99页第八十七页，共100页。逆转录病毒感染法胚胎干细胞介导法精子(jngz)载体法第87页/共99页第八十八页，共100页。第88页/共99页第八十九页，共100页。一、精子分离(fnl)方法第89

14、页/共99页第九十页，共100页。第90页/共99页第九十一页，共100页。流式细胞分类器第91页/共99页第九十二页，共100页。第92页/共99页第九十三页，共100页。有荧光素，若有为雄性。有荧光素，若有为雄性。第93页/共99页第九十四页，共100页。鉴定。鉴定。第94页/共99页第九十五页，共100页。营养丰富时多雌性后代营养丰富时多雌性后代第95页/共99页第九十六页，共100页。第96页/共99页第九十七页，共100页。第97页/共99页第九十八页，共100页。胚胎冷冻胚胎冷冻(lngdng)(lngdng)的原理。的原理。性别控制有哪些技术？性别控制有哪些技术？第98页/共99页第九十九页，共100页。NoImag