细菌的分离、接种和培养学习教案

1、会计学1细菌细菌(xjn)的分离、接种和培养的分离、接种和培养第一页，共34页。第2页/共34页第二页，共34页。 在自然界中，不同种类(zhngli)的微生物绝大多数都是混杂生活在一起的，为了生产和科学研究的需要，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离出它，以得到只含有这一种微生物的纯培养物，这种获得纯培养物的方法称为微生物的分离与纯化。 为了获得纯种的微生物，一般根据该微生物营养或培养特点(微生物对营养、酸碱度、氧等条件)，或对某种抑制剂的耐受性不同，或对某种环境条件要求不同，从而制作或设置一些选择性培养基，或选择性培养条件，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或划线法

2、分离，纯化该微生物，直至得到该纯种菌株。二、实验(shyn)原理第3页/共34页第三页，共34页。三、实验试剂与器材 土壤样品(yngpn)（环境样品(yngpn)） 牛肉膏蛋白胨培养基； 无菌试管、无菌三角瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿； 超净工作台第4页/共34页第四页，共34页。（一） 稀释(xsh)混合平板法四、实验(shyn)步骤第5页/共34页第五页，共34页。1. 土壤稀释液的制备 称取土样10g，放入盛90ml无菌水三角瓶中，振荡1520分钟，使微生物细胞(xbo)分散，静置约2030秒，即成10-1的土壤悬液。 另取装有9ml无菌水的试管，编号为10-2、10

3、-3、10-4、10-5、10-6，用无菌吸管吸取10-1土壤悬液l ml，加入编号10-2的无菌试管中，吹吸三次，使之混合均匀，即成10-2的土壤稀释液。再用另一支吸管吸取10-2试管中的土壤稀释液1ml，加入编号10-3的无菌试管中，轻轻摇动，使之混合均匀，即成10-3的土壤稀释液，一定要每次更换一支无菌吸管（连续稀释）。同法依次分别稀释成10-4、10-5和10-6等一系列稀释度菌悬液。 第6页/共34页第六页，共34页。2. 平板制作 将无菌培养皿编上10-3、10-4、10-5号码，每一号码设三个重复，用1ml无菌吸管按无菌操作(cozu)要求吸10-5稀释液各1ml，分别放入编号1

4、0-5的三个培养皿中。同法吸取10-5稀释液各1ml，分别放入编号10-4的三个培养皿中。再吸取10-3稀释液各1ml，分别放入编号10-3的三个培w1养皿中。然后在9个培养皿中分别倒入15ml已融化并且冷却至45左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，整个操作(cozu)过程应严格按照无菌操作(cozu)。 第7页/共34页第七页，共34页。3. 培养与移植 待平板完全冷凝后，将平板倒置37恒温箱中培养2448小时，检查分离结果。将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到牛肉膏蛋白胨培养基的斜面上，然后置于37恒温箱中培养，待菌苔长出后

5、，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其它(qt)杂菌混杂，就可再一次进行分离、纯化，直至获得纯培养。第8页/共34页第八页，共34页。（二）稀释涂布平板法 此法与稀释混合平板法基本相同，无菌操作也一样，所不同的是先将牛肉膏蛋白胨培养基融化，在火焰旁注入培养皿，摇匀后制成平板，然后用三支1ml无菌吸管分别由10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液中各吸取0.2ml对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，然后分别倒置于37温箱中培养后，再挑取单个菌落，直至(zhzh)获得纯培养。第9页/共34页第九页，共34页。（三）平板(pngb

6、n)划线分离法第10页/共34页第十页，共34页。制备(zhbi)土壤稀释液第11页/共34页第十一页，共34页。第12页/共34页第十二页，共34页。倾注(qngzh)平板第13页/共34页第十三页，共34页。培养(piyng) 第14页/共34页第十四页，共34页。 挑菌落(jnlu)接种和分离工具(gngj)1接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 第15页/共34页第十五页，共34页。第16页/共34页第十六页，共34页。第17页/共34页第十七页，共34页。移接斜面常用的接种方法划线(hu xin)接种点接种穿刺接种涂布接种液体接种注射

7、接种第18页/共34页第十八页，共34页。斜面接种(jizhng)时的无菌操作(1)接种(jizhng)灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种(jizhng) (6)塞好棉塞 第19页/共34页第十九页，共34页。纯化(chn hu)（平板划线法）倒平板划线培养挑菌落纯种（纯培养） 第20页/共34页第二十页，共34页。第21页/共34页第二十一页，共34页。平板划线分离的方法(fngf)1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法第22页/共34页第二十二页，共34页。（一）斜面接种(jizhng)无菌操作技术（二）倒平板及平板划线接种(jizhng)第23页/共34页第二十三页，共34页。第24页/共34页第二十四页，共34页。第25页/共34页第二十五页，共34页。第26页/共34页第二十六页，共34页。第27页/共34页第二十七页，共34页。第28页/共34页第二十八页，共34页。第29页/共34页第二十九页，共34页。（三）平板（三）平板(pngbn)(pngbn)划线接划线接种：种：第30页/共34页第三十页，共34页。第31页/共34页第三十一页，共34页。六、作六、作 业业1. 简述(jin sh)无菌操作过程中的注意点。2. 拟出从土壤中分离细菌的