研究细胞的方法

1、电子显微技术中的常电子显微技术中的常用度量单位是埃（用度量单位是埃（）（ 1 1=10=10-1-1nm=10nm=10-4-4umum =10 =10-7-7mm=10mm=10-10-10m m ）此图中相邻两个原子此图中相邻两个原子之间的距离是之间的距离是2 2 19351935年年 法国法国的卡诺尔提出的卡诺尔提出扫描电镜的设扫描电镜的设计思想和工作计思想和工作原理。原理。19421942年年 剑桥大学的马剑桥大学的马伦首次制成世伦首次制成世界第一台扫描界第一台扫描电镜。电镜。可以用计算机将黑可以用计算机将黑白照片处理成彩色白照片处理成彩色肺细支气管粘肺细支气管粘膜杯状细胞和膜杯状细胞

2、和纤毛细胞扫描纤毛细胞扫描电镜照片电镜照片高的分辨率高的分辨率很强的立体感很强的立体感放大倍率范围广放大倍率范围广样品适应性大样品适应性大应用范围广应用范围广 SEM SEM所取得的迅速发展表明，仪器本身性所取得的迅速发展表明，仪器本身性能（如分辨力、多功能等）的不断提高固然重能（如分辨力、多功能等）的不断提高固然重要，但样品制备技术的改良和日趋完善，则对要，但样品制备技术的改良和日趋完善，则对SEMSEM的应用与发展确实起到了积极促进作用。的应用与发展确实起到了积极促进作用。同时，样品制备的质量如何，也是能否发挥同时，样品制备的质量如何，也是能否发挥SEMSEM仪器最佳性能、拍出理想图像照片

3、的关键仪器最佳性能、拍出理想图像照片的关键所在。因此，所在。因此，SEMSEM生物样品制备技术问题，一生物样品制备技术问题，一直是电镜工作者不断创新的一个重要领域。直是电镜工作者不断创新的一个重要领域。一、一、 SEMSEM生物样品制备的基本要求生物样品制备的基本要求 生物样品与金属、矿物等材料不同，它生物样品与金属、矿物等材料不同，它具有质地柔软、容易变形、导电性能差、二具有质地柔软、容易变形、导电性能差、二次电子发射率低以及含水量多（有的含水量次电子发射率低以及含水量多（有的含水量达达 80%80%以上）等特点。因此，在处于高真空以上）等特点。因此，在处于高真空状态下的扫描电镜内观察生物样

4、品时，必须状态下的扫描电镜内观察生物样品时，必须严格地遵循一定的原则和操作程序，对样品严格地遵循一定的原则和操作程序，对样品进行必要的预处理。进行必要的预处理。在进行在进行SEMSEM样品制备时，一般应掌握以下原则：样品制备时，一般应掌握以下原则： ( (一）每一处理步骤及操作过程中，都应注意防止对样品一）每一处理步骤及操作过程中，都应注意防止对样品 的污染和损伤，使被观察的样品尽可能地保持原有形貌的污染和损伤，使被观察的样品尽可能地保持原有形貌 及微细结构。及微细结构。（二）去除样品内的水分，以利于维持（二）去除样品内的水分，以利于维持SEMSEM的真空度和防止的真空度和防止 对镜筒的污染。

5、但在脱水和干燥处理时，要尽量避免和对镜筒的污染。但在脱水和干燥处理时，要尽量避免和 减少样品体积变小、表面收缩变形等人工损伤。减少样品体积变小、表面收缩变形等人工损伤。（三）降低样品表面的电阻率，增加样品的导电性能，以（三）降低样品表面的电阻率，增加样品的导电性能，以 提高二次电子发射率，建立适当的反差和减少样品的充提高二次电子发射率，建立适当的反差和减少样品的充 放电效应。放电效应。 （四）无论观察组织、细胞的表面或内部微细构造，都应（四）无论观察组织、细胞的表面或内部微细构造，都应 注意辨认和保护观察面。注意辨认和保护观察面。 临界点干燥，是根据物质存在着临界临界点干燥，是根据物质存在着临

6、界状态的物理特性而研制的。在温度和压力的状态的物理特性而研制的。在温度和压力的变动之下，任何物质存在的固态、液态和气态三变动之下，任何物质存在的固态、液态和气态三种形式都可以相互转化。实验证明，当温度、压种形式都可以相互转化。实验证明，当温度、压力达到一定的数值时，气体的密度可增大到与液力达到一定的数值时，气体的密度可增大到与液态一样，此时气相与液相的界面消失，液体的表态一样，此时气相与液相的界面消失，液体的表面张力亦会随之消失，物理学中，将上述情况称面张力亦会随之消失，物理学中，将上述情况称为临界状态，将此时的温度和压力，分别称为临为临界状态，将此时的温度和压力，分别称为临界温度和临界压力。

7、临界点干燥，就是利用物质界温度和临界压力。临界点干燥，就是利用物质在临界状态下液体表面张力被消除的特性，克服在临界状态下液体表面张力被消除的特性，克服样品干燥过程中的变形，保持样品原状，达到干样品干燥过程中的变形，保持样品原状，达到干燥的目的。燥的目的。 一般将临界干燥中起临界干燥作用的一般将临界干燥中起临界干燥作用的液体称为媒介液（又称过渡液），它的选液体称为媒介液（又称过渡液），它的选择条件是临界温度及压力较低、价格便宜择条件是临界温度及压力较低、价格便宜而已保存方便。而已保存方便。 液态液态COCO2 2的临界温度为的临界温度为31.4 31.4 ，临，临界压力为界压力为72kg/cm7

8、2kg/cm2 2，与其它媒介液相比更，与其它媒介液相比更符合选择条件。因此，在临界点干燥时，符合选择条件。因此，在临界点干燥时，液态液态COCO2 2已被普遍使用。已被普遍使用。1 1）样品预处理）样品预处理 2 2）放置样品）放置样品 3 3）注入液体）注入液体COCO2 2 4 4） COCO2 2 置换置换 5 5）临界处理）临界处理 6 6）放气取样）放气取样 生物样品尤其是经干燥处理的样品生物样品尤其是经干燥处理的样品, ,其其表面电阻率很高表面电阻率很高, ,导电性能很差导电性能很差, ,当接受电子当接受电子束照射时束照射时, ,易造成充电和放电效应易造成充电和放电效应, ,以至图像以至图像模糊不清。模糊不清。 此外生物样品元素成分原子