临床检验基础：直接凝集试验

1、二、抗原、抗体间的主要反应(一)凝集反应(二)沉淀反应（precipitation）（三）补体结合试验（CFT）（四）免疫标记技术（放射免疫测定法、酶免疫测定法、免疫荧光技术、化学发光免疫技术）直接凝集试验 试验原理 颗粒性抗原在试管内与相应抗体特异结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。试验中先将待测血清（抗体）进行系列倍比稀释，再加入已知定量抗原，根据每个血清稀释度的凝集情况，测定血清中有无相应 抗体及其相对含量 。试剂和器材1 抗体 待检伤寒沙门菌免疫血清，做20倍稀释。2 抗原 伤寒沙门菌体（O）抗原（7X10*8/ml）。3 生理盐水，试管，吸管，恒温水浴箱等。操作方法1 取干燥

2、洁净的小试管7支，依次编号并做好标记。2 加生理盐水，每支试管各加0.5ml。3 倍比稀释血清（1:20），取待测血清0.5ml加入到第一管，充分混匀，吸出0.5ml 加入到第2管，混匀后吸出0.5ml 加入第三管，如此连续稀释至第6管，混匀后，从第6管取出0.5ml弃去，第7管不加血清，作为抗原对照。至此，16管的血清稀释倍数依次是1：40，1：80，1：160，1：320，1：640，1：1280。4 加定量抗原，每管加入伤寒O菌液0.5ml，加入菌液后，各管的血清又稀释了一倍，故血清最终稀释度依次为1：80，1：160，1：3201：2560。见下表。5 摇匀，置37度水浴24h,取出观

3、察结果或室温放置过夜，次日观察结果。试管凝集法操作步骤试管号1234567生理盐水(ml)0.50.50.50.50.50.50.5待测血清(ml)0.50.50.50.50.50.5伤寒菌液(ml)0.50.50.50.50.50.50.5血清稀释度1:801:1601:3201:6401:12801:2560结果判断将试管置于有良好光源的黑暗背景下，观察管底凝集物和上清的浊度，记录凝集程度，判断凝集效价。1 先观察抗原对照管，应无凝集现象，管底沉淀物呈圆形，边缘整齐，轻轻摇动试管，细菌分散均匀混浊。2 凝集程度分五级。“+” 上清液澄清，细菌全部凝集，凝块全沉于管底。“+” 上清液稍微混浊

4、，大部分细菌凝集。“+” 上清液较混浊，约50%的细菌沉于管底。“+” 上清液混浊，仅少数细菌凝集。“-” 不凝集，液体混浊度与对照管相同。3 以出现”+”凝集的血清最高稀释倍数为该待检血清的抗体效价。注意事项凝集反应只有在抗原抗体比例适当时，才能出现肉眼可见的反应。一般情况下，随着血清浓度的逐渐稀释，凝集反应越来越弱，但在抗体浓度过高时，反而无凝集现象出现，此为前带现象。出现该情况时，须加大抗体倍数重新试验。试管凝集试验室半定量试验，操作简单，敏感性不高，特异性易受诊断菌影响，不稳定，易自凝；如果电解质浓度和PH值不适当，可产生非特异性凝集，出现假阳性。试验讨论早在1896年，Widal就利

5、用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。肥达试验（Widal test ）是用已知的伤寒，副伤寒沙门菌的O和H抗原，检测待测血清中有无相应的抗体的半定量试管凝集试验。肥达反应是诊断伤寒副伤寒的辅助诊断。其结果的解释必须结合临床变现和病程,病史,以及地区流行病学情况。1900年兰茨泰纳（Landsteriner）在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型，并于1930年获得了诺贝尔奖金。凝集试验灵敏度高，方法简便，广泛应用于临床检验。直接凝集临床上应用：伤寒、副伤寒的诊断血型鉴定、输血时受者与供者之间红细胞和血清的交互配血试验。诊断斑疹伤寒，羌虫病等立克次体病的外斐反应（Weil Felix reation）（变形杆菌属的X1