反相高效液相色谱法测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄樟醚含量

1、反相高效液相色谱法测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄樟醚含量【关键词】反相高效液相色谱细辛挥发油甲基丁香酚黄樟醚0引言细辛主要有效成分为挥发油，甲基丁香酚和黄樟醚是挥发油中的主要成分.甲基丁香酚有麻醉和镇痛作用，黄樟醚为广谱抗霉菌成分.但文献报道1-2，两者的代谢产物均可引起大鼠的癌变.为了控制细辛挥发油的质量，我们以陕西洛南产北细辛为研究对象，建立了HPL法同时测定细辛挥发油中甲基丁香酚和黄樟醚的含量.该法简便快速，结果准确可靠.1材料和方法1.2方法1.2.2对照品储藏液及供试品溶液的制备精细称量甲基丁香酚对照品约19.28g，黄樟醚对照品23.56g，分别置25L容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至

2、刻度，摇匀，制成对照品溶液，避光保存备用.精细量取细辛挥发油100.05g置25L的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精细量取2L置10L的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液.2结果2.1甲基丁香酚及黄樟醚含量测定方法建立2.1.1方法专属性分别取适当浓度的甲基丁香酚对照品溶液、黄樟醚对照品溶液、供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样，记录色谱图图1.从图中可以看出甲基丁香酚的保存时间为7.55in，黄樟醚的保存时间为11.65in，其他组分对测定无干扰.A：甲基丁香酚对照品；B：黄樟醚对照品；：细辛挥发油甲醇溶液.图1色谱图略2.1.2标准曲线制备与线性考察精细量取甲基丁香酚对照品储

3、藏液0.25，0.5，1，3和6L，分别置于10L的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀.分别汲取上述溶液20L注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积Y对浓度X作图，甲基丁香酚峰面积在19.28462.72g/L浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=46156.59X+32840.02(r=0.9999，n=5).精细量取黄樟醚对照品储藏液0.125，0.25，0.5，1，3和5L，分别置10L的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀.分别汲取上述溶液20L进样，记录峰面积，以峰面积Y对浓度X作图，黄樟醚峰面积在11.78471.20g/L浓度范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=29591.52X-

4、75017.20(r=0.9999，n=5).2.1.3精细度考察取混合对照品溶液含甲基丁香酚77.12g/L，黄樟醚94.24g/L同一天连续进样5次，进样量20L，测定峰面积，计算甲基丁香酚黄和樟醚的1d内RSD值分别为0.22%，0.28%.连续3d进样5次，进样量20L，测定峰面积，计算甲基丁香酚黄和樟醚的3d间RSD值分别为0.26%，0.34%.结果说明仪器与色谱条件具有良好的精细度.2.1.4稳定性试验取供试品溶液，在配制后0，4，8和24h于同一色谱条件下分别进样，甲基丁香酚、黄樟醚峰面积的RSD分别为0.32%，0.41%.结果说明样品溶液在室温下24h内稳定.2.1.5回收

5、率实验精细称量同一批(批号20220912)含量的挥发油10g平行6份，分成3组，每组2份，分别参加对照品溶液(甲基丁香酚308.48g/L，黄樟醚282.72g/L)0.25，0.5及1.0L.甲醇溶解定量至25L，摇匀，分别进样20L，记录色谱图，计算甲基丁香酚和黄樟醚的回收率表1，2.表1甲基丁香酚的加样回收率样品取样量略表2黄樟醚的加样回收率样品取样量略2.2挥发油的提取及含量测定2.2.1细辛挥发油的提取将1.0kg北细辛粉碎后装入挥发油提取器中，加适量水浸润2h，通入温度为120的水蒸汽，蒸汽压力0.02kPa，蒸馏3h，25冷凝回收油水混合液，过滤后经油水别离器别离，无水硫酸钠枯

6、燥后得挥发油.挥发油为淡黄色透明油状液体，具有特殊浓郁香味，得油率约2.4%.2.2.2挥发油中甲基丁香酚和黄樟醚的含量测定分别取对照品溶液和供试品溶液各20L，注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算含量表3.根据以上3批样品的检测结果，陕西洛南产北细辛地下局部的挥发油中甲基丁香酚和黄樟醚含量分别为529.92和5.55g/g.表3挥发油样品中甲基丁香酚和黄樟醚含量测定结果略3讨论细辛虽属常用中药，但因其毒性较大，中医早有细辛不过钱的说法，我国历版药典也均规定常用量为13g.目前对细辛的毒性大小存在很大争议，但普遍认为细辛的毒性来源于所含挥发油中的主要成分甲基丁香酚和黄樟醚3.现代药理学认为

7、甲基丁香酚是细辛镇咳祛痰、镇痛和麻醉的主要成分4；黄樟醚有良好的抗真菌作用5，并且至今也未见长期接触比方种植细辛的员工或使用细辛而导致癌症的流行病学的报道，因此平安而有效的使用细辛的前提是建立细辛及其制品的质量控制标准.细辛在传统的汤剂应用中因其用量小和以挥发油作为主要药效物质，一般在煎煮时后下，而在大剂量应用时为了减小毒性而长时间高温度煎煮以减小挥发性成分.在现代中药制药工业中，一般先提取挥发油，在制剂工艺的最后阶段再参加挥发油，这样既可节省资源又可以保证药物的疗效.此外，可入药的细辛品种和产地不同，总挥发油的含量差异较大，甲基丁香酚和黄樟醚的含量也有很大的差异6-7.细辛地上局部含用马兜铃酸，2022版药典开场规定不使用地上局部8，但是地上局部也含有挥发油，为了充分利用细辛资源，利用细辛地上局部提取的挥发油开场面市.因此建立HPL测定细辛挥发油中的主要成分甲基丁香酚和黄樟醚的含量很有必要.细辛挥发油中的主要成分甲基丁香酚和黄樟醚含量的测定主要采用气相色谱法6,9，我们首次采用反相高效液相色谱同时测定细辛挥