毛细管电泳高频电导法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量

1、毛细管电泳高频电导法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量Keyrds:apillaryeletrphresis；highfrequenyndutivitydetetr；Prunellavulgaris；leanliaid；ursliaid夏枯草为中医临床常用中药，味辛、苦，性寒，具有消火、明目、散结、消肿的作用，用于目赤肿痛、目珠底痛、头痛眩晕、高血压等1。夏枯草中含有多种三萜类成分，以齐墩果酸leanliaid，A和熊果酸ursliaid，UA的含量较高，A和UA属于构造异构体，在别离时具有一定难度。目前有关的含量测定方法有薄层色谱法2、高效液相色谱法3,4、气相色谱法5、毛细管胶束电动色谱法

2、6等检测方法。本文采用毛细管区带电泳apillaryzneeletrphresis,ZE，高频电导highfrequenyndutivitydetetin检测的方法7，对不同产地夏枯草药材中A和UA的含量进展测定，为药材质量控制提供了可借鉴的根据。2实验局部2.1溶液的制备2.1.1内标溶液精细称取布洛芬对照品40.6g置50L量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标贮备液质量浓度为812g/L。2.1.2对照品溶液精细称取A对照品16.4g、UA对照品17.2g置50L量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液质量浓度分别为328g/L和344g/L。2.1.3供试品溶液取

3、本品粉末约1g，精细称定，置索氏提取器中，加甲醇80L，加热回流2h，放冷，提取液转移至100L量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45滤膜过滤，作为供试品溶液。2.3方法学考察2.3.1标准曲线制备分别汲取一定量的对照品贮备液、内标溶液，加甲醇稀释成含齐墩果酸质量浓度为4.1、8.2、16.4、32.8、49.2、82.0、114.8g/L，熊果酸质量浓度为4.3、8.6、17.2、34.4、51.6、86.0、120.4g/L与内标溶液质量浓度均为40.6g/L的系列溶液。依次重力进样10s，每个浓度测定3次以上。以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标Y，对照品溶液的质量浓度为横坐标进展线性回归

4、，分别得回归方程YA=0.012-0.0321r=0.9995；YUA=0.0119-0.0309r=0.9996。说明A质量浓度在4.1114.8g/L、UA质量浓度在4.3120.4g/L范围内与峰面积线性关系良好。1.齐墩果酸；2.熊果酸；3.布洛芬；4.水图1对照品A和样品B的毛细管电泳色谱图略Fig.1HPEhratgrasfthentrls(A)andsaples(B2.3.2精细度试验取质量浓度分别为82.0、86.0g/L的A与UA对照品溶液，重力进样10s，连续测定5次，记录峰面积并计算RSD。结果A的RSD=2.48%、UA的RSD=3.73%，说明仪器精细度良好。2.3.

5、3稳定性试验取供试品溶液批号1在0、2、4、8、24h，分别重力进样10s，记录峰面积。结果A的RSD=4.54%、UA的RSD=1.21%，说明供试品溶液在24h内根本稳定。2.3.4重复性试验取同一批号批号1样品6份，按“2.1.3项下方法提娶测定。结果A的平均含量为1.01gg-1，RSD=4.10%n=6；UA的平均含量为3.73gg-1，RSD=1.61%n=6。说明分析方法精细度良好。2.3.5加样回收试验精细称取同一批号批号1的夏枯草药材6份，参加相应量的A和UA对照品，按“2.1.3项下方法处理并测定，计算回收率。A的平均回收率为96.7%、RSD=2.48%；UA的平均回收率

6、为98.2%、RSD=3.10%。结果说明方法准确、可靠。结果见表1和表2。转贴于论文联盟.ll.2.4样品测定取不同产地的夏枯草，按“2.1.3项下方法处理后测定，记录峰面积，代入回归方程计算样品中齐墩果酸和熊果酸的含量，结果见表3。表1A回收率试验结果略Tab.1Reveryfleanliaid(n=6)表2UA回收率试验结果略Tab.2Reveryfursliaid(n=6)表3夏枯草样品中A和UA的含量测定结果略Tab.3ntentsfleanliaidandursliaidinthesaple3讨论图2环糊精浓度对别离度的影响略3.3别离电压和进样时间的影响别离电压决定了电场强度的大

7、小，影响电渗流和待测物质的迁移速度，也是影响别离的重要因素之一。在毛细管内径和长度固定的条件下，一定范围内，组分的迁移时间和别离电压成反比关系，随着别离电压增大，样品的迁移速度加快，别离度和灵敏度也越大。在722kV别离电压下进样分析，结果说明，高的别离电场令电渗流速度加快，出峰时间明显缩短，有利于加快分析速度。但别离电压过高，焦耳热增大，会导致噪音大幅度增加，当别离电压到达18kV时基线有明显的毛刺，并且可以听到高压放电的声音。选择别离电压为12.5kV。进样量同时受进样时间和进样高度的影响。在20高度下比拟了进样时间为2.020.0s的别离效果，结果说明，峰高随着进样时间延长而增加，但当进

8、样时间大于14.0s时，峰高增加幅度下降，区带展宽趋于明显，峰形受到影响；进样时间4.0s以下时，进样量太少，检测到的峰高较小，不利于检测。优化的进样时间为10.0s。在一样条件下考察了虹吸进样高度为10.030.0的别离检测效果。综合考虑，选择的进样高度为20。3.4供试品提取方法的选择实验比拟了甲醇、体积分数为95%的乙醇、乙醚、三氯甲烷4种提取溶剂，乙醚、三氯甲烷提取液的杂质较少，但提取率不高，甲醇与体积分数为95%的乙醇提取率相当，而甲醇提取液色谱图杂质峰少，对熊果酸与齐墩果酸测定无干扰，基线较平稳。选择甲醇作溶剂后，比照超声、索氏、加热回流3种提取方法，结果发现超声和加热回流提取均不如索氏提取的提取率，用索氏提取2h的样品基线稳定，提取完全，A和UA的