肠道杆菌及检验课件

肠道杆菌及检验肠道杆菌及检验1肠道杆菌(entericbacilli)的概念:肠杆菌科(Enterobacteriaceae)共30个属,120个种,大多为肠道正常菌群,少数为致病菌,一局部在发生移位,或宿主免疫力低下时,可成为条件致病菌。第一节概述肠道杆菌(entericbacilli)的概念:2正常菌群致病菌埃稀菌属变形杆菌属克雷伯菌属肠杆菌属沙雷菌属枸橼酸菌属致病性大肠埃稀菌志贺菌属沙门菌属耶尔森菌属大肠杆菌肠外感染普通变形杆菌:肠外感染、食物中毒医院感染EPEC.ETECEIEC.EHECEAggEC肠内感染食物中毒A群痢疾志贺菌B群福氏志贺菌C群鲍氏志贺菌D群宋内氏志贺菌急性菌痢慢性菌痢中毒性菌痢伤寒沙门菌甲、乙、丙鼠伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌肠炎沙门菌肠热症食物中毒败血症小肠结肠炎耶尔森菌食物中毒鼠疫耶尔森菌鼠疫

肠道杆菌正常菌群致病菌埃稀菌属致病性大肠埃稀菌大肠杆菌3共性:1.形态染色:均为革兰阴性杆菌,无芽孢、有菌毛,局部有荚膜或包膜,大多有周鞭毛(除志贺菌、克雷伯、鼠疫耶尔森菌之外)。2.营养要求:需氧或兼性厌氧。3.生化反响:具丰富的酶,生化反响活泼,并各不相同,为鉴定的主要依据。致病性越强,生化反响能力越弱。非致病菌(除变形杆菌外)均分解乳糖产酸,致病菌不发酵乳糖。常用选择培养基:SS(Salmonella-shigella)。共性:4EMB(Eosin-methylene-blue)MAC(MacConkey)常用生化反响培养基:KIAMIU定科试验:革兰阴性杆菌、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐复原试验阳性4、抗原构造:有多种抗原菌体抗原(O抗原):脂多糖,耐热(100℃不被破坏),有属、种特异性,又有类属抗原和特异性抗原之分,类属抗原可引起交叉反响,凝集为颗粒状。H抗原鞭毛蛋白,不耐热(60℃30min即可破坏),特异性强,凝集为絮状。EMB(Eosin-methylene-blue5外表抗原:包绕于O抗原的外面的多糖(不耐热),不同细菌有不同的名称(如大肠杆菌及志贺菌的K抗原,沙门菌的Vi抗原)抗原是肠道杆菌血清学分群和分型的依据。5、遗传变异S-R变异H-O变异耐药性变异6、传播途径经消化道—以饮食、饮水为媒介体内感染(免疫力下降、移位),为医院感染主要病原菌群。外表抗原:包绕于O抗原的外面的多糖(不耐热),不同细67.致病物质:菌毛、内毒素、肠毒素8.检验方法标本:肠内标本:新鲜粪便肠外标本:血液、体液、尿液等

别离培养血液肉汤增菌血平板别离尿液、伤口分泌物MAC别离粪便:SS、EMB别离7.致病物质:菌毛、内毒素、肠毒素7鉴定依据:革兰染色触媒、氧化酶、硝酸盐复原KIA、MIU、IMViC,其他生化反响血清玻片凝集(鉴定到种、型或血清型)鉴定依据:8

第二节埃希菌属

埃希菌属(Escherichia)大肠埃希菌(E.coli)蟑螂埃希菌(E.blattae)格森埃希菌(E.fergusonii)赫尔曼埃希菌(E.hermannii)伤口埃希菌(E.vulneris)分布及种类:第二节埃希菌属埃希菌属(Escheric9一、生物学性状(一)形态染色:革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛,菌毛,少数有微荚膜。(二)培养特性普通平板:中等大小,圆形凸起,光滑灰白色。血平板:某些菌株呈β溶血SS、MAC平板:分解乳糖产酸呈粉红色菌落EBM:兰紫色菌落,有金属光泽液体培养基:混浊生长一、生物学性状(一)形态染色:革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛,10SS大肠埃希菌SS大肠埃希菌11中国蓝产气肠杆菌中国蓝产气肠杆菌12(三)生化反响分解葡、乳、麦、甘,产酸产气,蔗糖因株而易IMViC:++——,脲酶:—肠内感染菌株:不发酵/缓慢发酵乳糖,KIA,MAC中可产碱。(四)抗原构造:有O、H和K三种O抗原是血清学分型的根底,约170种。H抗原大于56种血清型的表示式:O:K:H,如:O111:K58:H2;O157:H7(三)生化反响13(五)抵抗力:自然界水中存活数周或数月。胆盐、煌绿可抑制其生长,对氯霉素、链、庆大酶素敏感。易产生耐药性:出现了产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase:ESBLs)菌株,那么对第三代头孢菌素(头孢噻肟、头孢他定、头孢哌酮、头孢曲松等)耐药。产ESBLs的革兰阴性菌除了大肠埃希菌之外,常见的还有阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜绿假单孢菌(五)抵抗力:14(一)致病物质:K抗原菌毛ETEC的菌毛称定植因子(CFA)毒素:括内毒素和外毒素(肠毒素)肠毒素不耐热肠毒素(heatlabiletoxin,LT),65℃30min可破坏耐热肠毒素(heatstabletoxin,ST)(二)所致疾病1、时机感染:移位到肠外组织、器官,引起化脓性感染,如泌尿系统感染、胆囊炎、腹膜炎等。2、肠内感染:腹泻(轻微腹泻—霍乱样腹泻)二、致病性(一)致病物质:不耐热肠毒素(heatlabileto15肠产毒型大肠埃希菌(entertoxigenicEcoli,ETEC)肠致病型大肠埃希菌(enteropathogenicE.coli,EPEC)肠侵袭型大肠埃希菌(enteroinvasiveE.coli,EIEC)肠出血型大肠埃希菌(enterohemorrhagicEHEC)肠聚集型大肠埃希菌(enteroaggrehativeEcoliEAggEC)致病性大肠杆菌:肠产毒型大肠埃希菌(entertoxigenicEc16引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征菌株侵袭部位疾病与病症致冰机制旅行者腹泻,婴幼儿腹泻,水样,伴恶心呕吐、腹痛、脱水、低热肠毒素致大量分泌液体、电解质婴幼儿腹泻,水样或粘液便,发热,恶心呕吐粘附、破坏上皮细胞志贺样腹泻,水样致脓血便,含红、白细胞、黏液,发热腹痛侵袭和破坏肠粘膜上皮细胞出血性结肠炎,水样便以血便,剧烈腹痛,低热,HUS等溶原性噬菌体编码SLT-I或II中断肠黏膜上皮细胞蛋白质合成婴儿腹泻,持续水样便,呕吐,低热,脱水聚集性黏附上皮细胞,阻断液体吸收小肠小肠结肠结肠小肠ETECEPECEIECEHECFAggEC引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征菌株侵袭部位17

三、微生物学检验

(一)标本采集(二)检验程序及方法三、微生物学检验18

麦康凯琼脂蛋白胨20g氯化钠5g琼脂20-25g蒸馏水1000ml乳糖10g1%中性红水溶液5ml胆盐5g(或牛胆酸钠4g与去氧胆酸钠1g)麦康凯琼脂19肉膏汤琼脂(pH7.4)100ml乳糖1g1%中国蓝水溶液(灭菌)

1%玫瑰红酸乙醇溶液1ml

[注]1.中国蓝与玫瑰红酸在酸碱溶液中的反响(见表);此培养基pH约为7.4,制好后应呈淡紫红色。过碱呈蓝色,均不适用。指示剂酸性碱性中国蓝蓝色微蓝至无色玫瑰红酸黄色红色2.玫瑰红酸能抑制革兰氏阳性细菌的生长,但对大肠杆菌没有抑制作用,故粪便标本接种量不宜太多。3.多数肠道致病菌不分解乳糖,其菌落为透明或半透明、淡红色;大肠杆菌分解乳糖产酸,形成大而浑浊的蓝色的菌落。4.中国蓝水溶液需煮沸或高压灭菌分钟后应用;玫瑰红酸是乙醇溶液,无需灭菌,但加热应避开火焰。中国蓝琼脂肉膏汤琼脂(pH7.4)1020MAC不长MAC不长21

伊红美蓝琼脂(EMB琼脂)肉膏汤琼脂(pH7.4)100ml乳糖1g2%伊红水溶液(灭菌)2ml0.5%美蓝水溶液(灭菌)1ml

伊红美蓝琼脂(EMB琼脂)22

配方一配方二配方三配方四牛肉膏5

5牛心浸液

1000

肉膏液

850

胨57.5（胨）

5乳糖10151010胆盐10（粗制）10（透析）150（ml）（牛胆汁）

8.5（混合）硫代硫酸钠125118.5枸橼酸钠1215118.5枸橼酸铁0.5

1枸橼酸铁铵

14

磷酸氢二钠

54

琼脂25182013.5煌绿0.33

0.331.0

0.33中性红22.5377025水1000

1000

SS琼脂(四种配方

)

配方一配方二配方三23

蛋白胨10g葡萄糖1g氯化钠5g乳糖10g牛肉膏3g硫代硫酸钠琼脂16g硫酸亚铁水1000ml0.4%酚红6ml

双糖铁培养基双糖铁培养基24肠道杆菌及检验课件25血液肉糖增菌血平板别离脓汁、痰、分泌物、尿粪便、直肠拭子MAC、EMB别离37℃18~24H可疑菌落涂、染、检肠道外感染肠道感染初步鉴定菌落特征、革兰染色KIA、MIU最终鉴定:系统生化反响报告ETEC生化反响肠毒素测定EPECEIECEHEC血清玻片凝集血液肉糖增菌血平板别离脓汁、痰、分泌物、尿粪便、直肠26大肠埃希菌的初步鉴定KIAMIU斜面底层产气H2S动力吲哚脲酶MVPC触媒氧化酶硝酸盐AA+/-—+/-+—+——+—+KA——++—+——+—+KA———+—+——+—+

KA+—+/-+—+——+—+

大肠埃希菌的初步鉴定KIA27肠道杆菌及检验课件28肠道杆菌及检验课件29肠道杆菌及检验课件30MACMAC31MACMAC32EMBEMB33肠道杆菌及检验课件34肠道杆菌及检验课件35

肠道杆菌及检验肠道杆菌及检验36肠道杆菌(entericbacilli)的概念:肠杆菌科(Enterobacteriaceae)共30个属,120个种,大多为肠道正常菌群,少数为致病菌,一局部在发生移位,或宿主免疫力低下时,可成为条件致病菌。第一节概述肠道杆菌(entericbacilli)的概念:37正常菌群致病菌埃稀菌属变形杆菌属克雷伯菌属肠杆菌属沙雷菌属枸橼酸菌属致病性大肠埃稀菌志贺菌属沙门菌属耶尔森菌属大肠杆菌肠外感染普通变形杆菌:肠外感染、食物中毒医院感染EPEC.ETECEIEC.EHECEAggEC肠内感染食物中毒A群痢疾志贺菌B群福氏志贺菌C群鲍氏志贺菌D群宋内氏志贺菌急性菌痢慢性菌痢中毒性菌痢伤寒沙门菌甲、乙、丙鼠伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌肠炎沙门菌肠热症食物中毒败血症小肠结肠炎耶尔森菌食物中毒鼠疫耶尔森菌鼠疫

肠道杆菌正常菌群致病菌埃稀菌属致病性大肠埃稀菌大肠杆菌38共性:1.形态染色:均为革兰阴性杆菌,无芽孢、有菌毛,局部有荚膜或包膜,大多有周鞭毛(除志贺菌、克雷伯、鼠疫耶尔森菌之外)。2.营养要求:需氧或兼性厌氧。3.生化反响:具丰富的酶,生化反响活泼,并各不相同,为鉴定的主要依据。致病性越强,生化反响能力越弱。非致病菌(除变形杆菌外)均分解乳糖产酸,致病菌不发酵乳糖。常用选择培养基:SS(Salmonella-shigella)。共性:39EMB(Eosin-methylene-blue)MAC(MacConkey)常用生化反响培养基:KIAMIU定科试验:革兰阴性杆菌、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐复原试验阳性4、抗原构造:有多种抗原菌体抗原(O抗原):脂多糖,耐热(100℃不被破坏),有属、种特异性,又有类属抗原和特异性抗原之分,类属抗原可引起交叉反响,凝集为颗粒状。H抗原鞭毛蛋白,不耐热(60℃30min即可破坏),特异性强,凝集为絮状。EMB(Eosin-methylene-blue40外表抗原:包绕于O抗原的外面的多糖(不耐热),不同细菌有不同的名称(如大肠杆菌及志贺菌的K抗原,沙门菌的Vi抗原)抗原是肠道杆菌血清学分群和分型的依据。5、遗传变异S-R变异H-O变异耐药性变异6、传播途径经消化道—以饮食、饮水为媒介体内感染(免疫力下降、移位),为医院感染主要病原菌群。外表抗原:包绕于O抗原的外面的多糖(不耐热),不同细417.致病物质:菌毛、内毒素、肠毒素8.检验方法标本:肠内标本:新鲜粪便肠外标本:血液、体液、尿液等

别离培养血液肉汤增菌血平板别离尿液、伤口分泌物MAC别离粪便:SS、EMB别离7.致病物质:菌毛、内毒素、肠毒素42鉴定依据:革兰染色触媒、氧化酶、硝酸盐复原KIA、MIU、IMViC,其他生化反响血清玻片凝集(鉴定到种、型或血清型)鉴定依据:43

第二节埃希菌属

埃希菌属(Escherichia)大肠埃希菌(E.coli)蟑螂埃希菌(E.blattae)格森埃希菌(E.fergusonii)赫尔曼埃希菌(E.hermannii)伤口埃希菌(E.vulneris)分布及种类:第二节埃希菌属埃希菌属(Escheric44一、生物学性状(一)形态染色:革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛,菌毛,少数有微荚膜。(二)培养特性普通平板:中等大小,圆形凸起,光滑灰白色。血平板:某些菌株呈β溶血SS、MAC平板:分解乳糖产酸呈粉红色菌落EBM:兰紫色菌落,有金属光泽液体培养基:混浊生长一、生物学性状(一)形态染色:革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛,45SS大肠埃希菌SS大肠埃希菌46中国蓝产气肠杆菌中国蓝产气肠杆菌47(三)生化反响分解葡、乳、麦、甘,产酸产气,蔗糖因株而易IMViC:++——,脲酶:—肠内感染菌株:不发酵/缓慢发酵乳糖,KIA,MAC中可产碱。(四)抗原构造:有O、H和K三种O抗原是血清学分型的根底,约170种。H抗原大于56种血清型的表示式:O:K:H,如:O111:K58:H2;O157:H7(三)生化反响48(五)抵抗力:自然界水中存活数周或数月。胆盐、煌绿可抑制其生长,对氯霉素、链、庆大酶素敏感。易产生耐药性:出现了产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase:ESBLs)菌株,那么对第三代头孢菌素(头孢噻肟、头孢他定、头孢哌酮、头孢曲松等)耐药。产ESBLs的革兰阴性菌除了大肠埃希菌之外,常见的还有阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜绿假单孢菌(五)抵抗力:49(一)致病物质:K抗原菌毛ETEC的菌毛称定植因子(CFA)毒素:括内毒素和外毒素(肠毒素)肠毒素不耐热肠毒素(heatlabiletoxin,LT),65℃30min可破坏耐热肠毒素(heatstabletoxin,ST)(二)所致疾病1、时机感染:移位到肠外组织、器官,引起化脓性感染,如泌尿系统感染、胆囊炎、腹膜炎等。2、肠内感染:腹泻(轻微腹泻—霍乱样腹泻)二、致病性(一)致病物质:不耐热肠毒素(heatlabileto50肠产毒型大肠埃希菌(entertoxigenicEcoli,ETEC)肠致病型大肠埃希菌(enteropathogenicE.coli,EPEC)肠侵袭型大肠埃希菌(enteroinvasiveE.coli,EIEC)肠出血型大肠埃希菌(enterohemorrhagicEHEC)肠聚集型大肠埃希菌(enteroaggrehativeEcoliEAggEC)致病性大肠杆菌:肠产毒型大肠埃希菌(entertoxigenicEc51引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征菌株侵袭部位疾病与病症致冰机制旅行者腹泻,婴幼儿腹泻,水样,伴恶心呕吐、腹痛、脱水、低热肠毒素致大量分泌液体、电解质婴幼儿腹泻,水样或粘液便,发热,恶心呕吐粘附、破坏上皮细胞志贺样腹泻,水样致脓血便,含红、白细胞、黏液,发热腹痛侵袭和破坏肠粘膜上皮细胞出血性结肠炎,水样便以血便,剧烈腹痛,低热,HUS等溶原性噬菌体编码SLT-I或II中断肠黏膜上皮细胞蛋白质合成婴儿腹泻,持续水样便,呕吐,低热,脱水聚集性黏附上皮细胞,阻断液体吸收小肠小肠结肠结肠小肠ETECEPECEIECEHECFAggEC引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征菌株侵袭部位52

三、微生物学检验

(一)标本采集(二)检验程序及方法三、微生物学检验53

麦康凯琼脂蛋白胨20g氯化钠5g琼脂20-25g蒸馏水1000ml乳糖10g1%中性红水溶液5ml胆盐5g(或牛胆酸钠4g与去氧胆酸钠1g)麦康凯琼脂54肉膏汤琼脂(pH7.4)100ml乳糖1g1%中国蓝水溶液(灭菌)

1%玫瑰红酸乙醇溶液1ml

[注]1.中国蓝与玫瑰红酸在酸碱溶液中的反响(见表);此培养基pH约为7.4,制好后应呈淡紫红色。过碱呈蓝色,均不适用。指示剂酸性碱性中国蓝蓝色微蓝至无色玫瑰红酸黄色红色2.玫瑰红酸能抑制革兰氏阳性细菌的生长,但对大肠杆菌没有抑制作用,故粪便标本接种量不宜太多。3.多数肠道致病菌不分解乳糖,其菌落为透明或半透明、淡红色;大肠杆菌分解乳糖产酸,形成大而浑浊的蓝色的菌落。4.中国蓝水溶液需煮沸或高压灭菌分钟后应用;玫瑰红酸是乙醇溶液,无需灭菌,但加热应避开火焰。中国蓝琼脂肉膏汤琼脂(pH7.4)1055MAC不长MAC不长56

伊红美蓝琼脂(EMB琼脂)肉膏汤琼脂(pH7.4)100ml乳糖1g2%伊红水溶液(灭菌)2ml0.5%美蓝水溶液(灭菌)1ml

伊红美蓝琼脂(EMB琼脂)57

配方一配方二配方三配方四牛肉膏5

5牛心浸液

1000

肉膏液

850

胨57.5（胨）

5乳糖10151010胆盐10（粗制）10（透析）150（ml）（牛胆汁）

8.5（混合）硫代硫酸钠125118.5枸橼酸钠1215118.5枸橼酸铁0.5

1枸橼酸铁铵

14

磷酸氢二钠

54

琼脂25182013.5煌绿0.33

0.331.0

0.33中