实验六血糖及血清胆固醇测定

一、酶法（GOD-POD）测血清葡萄糖含量目前一页\总数三十六页\编于十七点实验目的掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的原理和方法掌握测定血糖的临床意义目前二页\总数三十六页\编于十七点邻甲苯胺法酶法：

血糖的测定方法：准确度、灵敏度高，稳定性好葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法（GOD-POD）实验原理目前三页\总数三十六页\编于十七点偶联酶法测血糖葡萄糖﹢O2H2O2葡萄糖酸﹢葡萄糖氧化酶（GOD）H2O2﹢4-氨基安替比林H2O醌亚胺染料﹢过氧化物酶（POD）红色目前四页\总数三十六页\编于十七点

红色醌亚胺染料在500nm处具有吸收峰

采用标准对比法可计算得到样品中葡萄糖浓度

红色醌亚胺染料的生成量与葡萄糖含量成正比目前五页\总数三十六页\编于十七点实验器材试管1.5×5cm（×3）、试管架吸量管2mL（×1）、洗耳球微量加样器：20μl的Pipetman恒温水浴箱离心机、离心管10ml（×2）目前六页\总数三十六页\编于十七点实验试剂

葡萄糖测定试剂盒：原装试剂在2～8℃避光保存，有效期15个月。混合后2～8℃可稳定1个月，室温可稳定3天葡萄糖标准液：100mg/Dl(5.55mmol/L)实验样品：新鲜无溶血血清目前七页\总数三十六页\编于十七点实验操作1.酶工作液配置（直接用试剂盒）2.标本处理抽取全血3-5mL37℃保温15分钟3000转/min离心10min取上清液备用目前八页\总数三十六页\编于十七点3.取3支干净干燥的小试管按表加入试剂4.各管加好后混匀，置37℃水浴30min，0.5cm光径比色杯，以空白试剂调零，在500nm波长下比色先加体积少的，再加多的管号试剂空白管标准管待测管蒸馏水(μL）10————标准葡萄糖(μL）——10——待测血清(μL）————10酶工作液(mL）1.51.51.5目前九页\总数三十六页\编于十七点标准液吸取后应立即上盖，以防水分挥发工作液混浊或有絮状物视为失效本法特异性高，维生素C，谷胱甘肽，左旋多巴引起负偏差

10μl液体必须全部溶于1.5ml酶工作液中注意

10μL液体不易精确加入，实验时要仔细检查移液枪的密封性。此外，移液枪外壁不要沾有液体。目前十页\总数三十六页\编于十七点二、酶法（COD-PAP）

测血清总胆固醇(TC)目前十一页\总数三十六页\编于十七点实验目的掌握酶法测定血清总胆固醇含量的原理熟悉酶法测定血清总胆固醇含量的操作方法了解总胆固醇测定的临床意义目前十二页\总数三十六页\编于十七点胆固醇酯酶+FFA胆甾烯酮+H2O2胆固醇氧化酶COD实验原理+4-氨基安替比林+酚醌亚胺过氧化物酶H2O2PAP胆固醇酯

游离胆固醇目前十三页\总数三十六页\编于十七点红色的醌型化合物在510nm处有吸收峰，颜色深浅与总胆固醇的浓度成正比。采用标准对比法可计算其含量。总胆固醇含量正常参考值范围为目前十四页\总数三十六页\编于十七点实验器材小试管（×3）、试管架刻度吸量管2mL（×1）、洗耳球微量加样器(20μl)恒温水浴箱离心机、离心管10ml（×2）目前十五页\总数三十六页\编于十七点实验试剂R1液：磷酸盐缓冲液、对氯酚R2液：4-氨基安替比林、酶胆固醇标准液：5.2mmol/L目前十六页\总数三十六页\编于十七点实验步骤

1.工作试剂配制：R110ml+R21ml混合，可保存1周

2.

标本处理:抽取全血3~5ml37℃保温15分钟3000转/min离心10min取上清液备用最适样品为当日空腹采集无溶血无乳糜的血清。目前十七页\总数三十六页\编于十七点3.取3支小试管编号，按表加入试剂管号试剂空白管标准管待测管蒸馏水（μl）10——标准液（μl）—10—样品（μl）——10工作试剂（ml）0.60.60.6充分混合，37℃水浴15分钟蒸馏水（ml）1.01.01.00.5cm光径比色杯，以空白试剂调零，在510nm波长下比色目前十八页\总数三十六页\编于十七点注意事项

最后加酶工作试剂，各管反应时间应一致工作试剂防止葡萄糖和甘油三酯污染若需检测游离胆固醇含量，将酶试剂去掉胆固醇酯酶即可目前十九页\总数三十六页\编于十七点实验结果与讨论计算结果记录结果A标=标准管吸光度A待=待测管吸光度

C待=A待A标×C标C标=血液中葡萄糖或胆固醇浓度C标=标准液中葡萄糖或胆固醇浓度目前二十页\总数三十六页\编于十七点血清葡萄糖测定临床意义病理性高血糖：常见于糖尿病；颅内压升高，如颅内出血，颅外伤等；脱水引起的高血糖，如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖升高；胰岛α细胞瘤等

病理性低血糖：常见于胰岛素分泌异常、肝功能严重衰退等；严重肝病患者，肝脏不能有效地调节血糖；糖原累积症。目前二十一页\总数三十六页\编于十七点危险阈值：高胆固醇血症：＞6.2mmol/LTC增高：常见于动脉粥样硬化、高脂蛋白血症、梗阻性黄疸、肾病综合征、甲状腺功能低下、慢性肾功能衰竭、糖尿病等TC降低：常见于低脂蛋白血症、贫血、肝脏疾病、营养吸收不良、恶性肿瘤等。血清总胆固醇测定临床意义目前二十二页\总数三十六页\编于十七点思考题

正常人的血糖为什么能维持在一定水平?胰岛素和肾上腺素对血糖有何影响?

为什么?

测定血清总胆固醇的临床意义有哪些？返回目录目前二十三页\总数三十六页\编于十七点

722型分光光度计能在可见光谱区域内对样品物质作定量分析。广泛应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制，是生物化学实验室常用分析仪器之一。目前二十四页\总数三十六页\编于十七点原理不同的物质对光的吸收具有选择性，有其各自的吸收光谱。当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，能量减弱程度和物质浓度有一定关系目前二十五页\总数三十六页\编于十七点“MODE”键：用于设置测试方式“100%T”键：用于自动调整100.0%T(100.0透射比)或零吸光度

“0%T”键：用于自动调整零透射比“波长设置”旋钮：用于设置分析波长722E型目前二十六页\总数三十六页\编于十七点比色皿的使用方法拿比色皿时，只能拿毛玻璃面，不能碰透光面，以免污染

使用前，一般先用水冲洗，再用蒸馏水润洗，还要用所盛溶液润洗外壁的水用擦镜纸或吸水纸沾干，以保护透光面

所盛液体量约占总体积的3/4，即距管口1cm左右

目前二十七页\总数三十六页\编于十七点722E型分光光度计操作方法1.预热仪器（关盖，拉半档，T模式）

2.选定波长

5.调T=100％

(关盖，拉杆全推进，光路对着空白管）4.调T=

0%(关盖，拉半档，光路对着1、2格间的挡板）

3.放入样品（光面对着光路的方向）7.将模式调至“A”，拉动拉杆至标准管和样本管，分别测定A值并记录8.按回“T”模式，推回半档的位置，拿出比色皿，关机

6.重复4-5步至仪器显示数值稳定。目前二十八页\总数三十六页\编于十七点返回光路目前二十九页\总数三十六页\编于十七点返回光路目前三十页\总数三十六页\编于十七点返回目前三十一页\总数三十六页\编于十七点注意事项每更换一次波长，重新调“0”和“100%”；每次做完实验后，应立即洗净比色皿

为了防止光电管疲劳，不测定时必须将光路切断，以延长光电管使用寿命

当仪器停止工作时，切断电源，并用套子盖住仪器，做好使用登记

目前三十二页\总数三十六页\编于十七点朗伯比尔定律：A=εclε：摩尔吸光系数

c：溶液的浓度

l：液层的厚度

A：物质的吸光度

当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理---朗伯-比耳定律

目前三十三页\总数三十六页\编于十七点实验结果与讨论2.计算结果1.记录结果A标=标准管吸光度A待=待测管吸光度C待=A待A标×C标C标=血液中葡萄糖浓度C标=标准液中葡萄糖浓度目前三十四页\总数三十六页\编于十七点

C标

=5.55mmol