铁皮石斛离体培养研究

铁皮石斛离体培养研究

又名红景天科灰属、红景天科黑科、兰科附生兰科。这是一种稀有药物和珍贵的室内观赏植物。贝壳石斛的自然繁殖力很低，很难传统繁殖。多年来，生长量远高于贝壳石斛。野生红景天的自然繁殖已经消失。近年来，关于贝壳石斛的快速繁殖报道很多，但这些报道主要仅限于对培训过程中诱导、殖长、壮苗、根管理等方面的研究，而对整个铁砧栽培过程的研究很少。作者以无感染铁石斛无苗茎段为外植体，研究了基本培养基、天然固定物和植物生长调节的选择，提高了铁屑组织培养的诱导率、生殖率和生根率，为其进行了工艺育苗。1材料和方法1.1试验材料为云南野生铁皮石斛瓶栽苗,由广州市花卉研究中心惠赠.1.2生长性状观测(1)在MS、M6、KC和B5等4种基本培养基中分别添加NAA0.5mg/L、6-BA0.5mg/L、蔗糖20g/L,调pH至5.8.在超净工作台上,将铁皮石斛试管苗切成1～2cm的茎段,在以上培养基上接种进行芽诱导.每组各接种25瓶,随机抽取其中20瓶进行生长性状观测.培养时间均为1个月,培养温度(25±1)℃,光照强度1500～20001x,每天光照12h,下同.(2)在B5基本培养基中分别添加6-BA0.1、0.5、1.0、1.5mg/L和NAA0.5mg/L,接种培养茎段.(3)在B5基本培养基中分别加入椰子汁、香蕉泥、马铃薯泥(香蕉泥用新鲜果实打浆而成,马铃薯泥用新鲜块茎去皮打浆而成)各150mg/L.切取已分化的芽接种到继代培养基上进行继代培养.(4)在B5基本培养基中分别添加NAA1.0、1.5、2.0mg/L,接种茎段后进行培养.(5)在B5基本培养基中分别添加NAA0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mg/L和6-BA0.1mg/L,当继代培养的芽苗长到4～5cm后,分株接种,每瓶接5株,诱导生根时间为2个月.1.3数据分析的方法数据采用STATISTICA/w5.0软件进行统计分析,统计测验均为99%水平.2结果与分析2.1不同增殖类型互之间的增殖比较4种基本培养基对铁皮石斛芽诱导效果,相互之间的比较差异极显著(表1),其中以B5的增殖效果最好,增殖率达到498.90%,N6次之,MS较差,KC最差.2.2-ba浓度对增殖效果的影响不同浓度的6-BA对铁皮石斛不定芽的增殖率差异极显著(表2),其中以0.1mg/L的增殖效果最好,增殖率高达391.90%,健壮度也最好,随着6-BA浓度的增加,增殖效果呈下降趋势.2.3椰子汁添加量对铁皮石斛芽增殖的影响3种天然附加物对铁皮石斛芽增殖率的影响差异极显著(表3),其中以椰子汁对铁皮石斛芽的增殖促进作用最大,增殖率达到434.88%,而且苗粗壮,叶色浓绿,生长整齐.马铃薯泥和香蕉泥的增殖效果相近,但在培养中后期均会出现黄化现象,需要及时转瓶.2.4两种原球茎增殖增殖结果及比较不同浓度NAA对铁皮石斛原球茎的增殖均有促进作用,且差异极显著(表4),其中以1.0mg/L的增殖效果最好,增殖率为351.45%,原球茎健壮且颜色浓绿,而其它两种浓度处理效果相近,原球茎较纤弱,颜色也较浅黄.2.5不同浓度NAA对铁皮石斛单株生根数的影响差异极显著(表5),其中以NAA1.0mg/L处理的效果最明显,其单株生根数达3.05,而且根系粗壮,特别发达;NAA1.5和2.0mg/L处理组效果次之,其余各浓度处理组对生根效果较不理想.随着NAA浓度的递增,单株生根数呈抛物线分布,但高浓度的效果又优于低浓度.3植物生长调节剂对不断增殖铁皮石斛的影响用于石斛类植物组织培养的培养基有MS,Nitch,KnudsonC(KC),N6,B5,C17,SH,Kn,VacinWent(VW),Winber(W),1/2B5,1/2N6,1/2SH,1/2C17,1/2MS,1/2VW等[5,6,7,8,9,10,11,12],但使用最多的是MS.本试验比较了MS、N6、KC和B5等4种基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的效果,发现B5优于其他基本培养基.杨联河等用曲茎石斛的茎段和种子在附加适量NAA,6-BA的MS、B5和KC培养基中进行离体培养,结果也发现B5对芽增殖效果最好,与刘骅等报道一致.因此,我们认为,MS培养基可能是由于无机盐浓度偏高的缘故,不适合包括石斛兰在内的附生兰的组织培养,而B5和N6无机盐浓度适中,能满足其生长的要求,KC营养则偏低,不能满足铁皮石斛生长的需要.植物生长调节剂对铁皮石斛的组织培养起着重要的作用.6-BA对不定芽增殖的影响以低浓度较好,这与张明等的报道相似.但王春认为6-BA浓度以2.0mg/L的增殖效果好于0.5mg/L;黄萍萍等使用的6-BA浓度高达4mg/L,可能与石斛种类不同有关.NAA对石斛兰原球茎的增殖以低浓度(1.0mg/L)的效果为好.在附加BA0.1mg/L的情况下,NAA对铁皮石斛芽生根以1.0mg/L处理的效果最好,这与周华伟等的报道有差异,这可能是因为石斛兰种类不同或基本培养基不同的缘故.天然附加物对铁皮石斛增殖的影响差异很大,椰子汁对铁皮石斛增殖的效果优于香蕉泥和马铃薯泥,与张明等的结果相似.虽然香蕉泥可以促进石斛幼苗的生长与分化,但对原球茎的增殖与分化则有一定的抑制作用.在生产上,建议采用B5作基本培养基附加6-BA0.1mg