家用高压杀菌锅代高压杀菌锅消毒培养基的配制及效果

家用高压杀菌锅代高压杀菌锅消毒培养基的配制及效果

随着新课程标准的实施，生物实践课程的范围变得越来越广泛。初中教材和高中选修课本中,都出现了制备培养基,培养微生物的实验。实验用具、用材的无菌是微生物学实验成败的关键所在。在有条件的学校,一般都采用高压灭菌锅进行培养基灭菌。但在一些农村中学,由于缺乏相关设备,培养基的消毒灭菌就很难进行。于是,我们设想用家用高压锅代替高压灭菌锅来消毒培养基,并对其效果进行初步的探索。1试剂和材料1.1培养基选择微生物学实验中常用的马铃薯培养基(PDA)、牛奶培养基、玉米综合培养基和牛肉膏蛋白胨4种培养基进行尝试。1pda2mgso4.7hs2o玉米粉5g,酵母浸膏0.3g,葡萄糖1g,KH2PO40.3g,MgSO4.7H2O0.15g,水1000mL。配制时需先用冷水将玉米粉调匀,加热煮沸后再加入其他组分。牛肉膏3g,琼脂18g,蛋白胨10g,NaCl5g,水1000mL,pH7.0～7.2。1.2加入铁丝网、加入铁丝网在小24cm家用高压锅内放置一个铁制的三脚架(高约5cm),再放入高压锅屉板(或Φ23cm的铁丝网),使锅底能加入1500mL～1700mL水,同时液面不接触培养皿下底。2横向压力下的完成4种培养基配制过程,都可以用烧杯在常压下完成;将配制好的培养基倒入500mL三角烧瓶,也可直接倒入Φ100cm玻璃培养皿,准备灭菌。2.1消毒培养基的配置采用Φ24cm家用高压锅,进行灭菌处理。高压锅内1次可以放置4层培养皿,每层4个,对空放置。2.2加热、高压阀家用高压锅可以用电炉加热,也可以用其他热源加热,如蜂窝煤炉等。等水沸腾排气阀有大量气体排出后持续10min,再加上高压阀。再等到高压阀排气后,维持55min,即可使用。2.3结果2.3.1微生物的培养将倒好的PDA、牛奶培养基、玉米粉培养基、牛肉膏蛋白胨培养基平板的平板(共计63块),打开培养皿皿盖,在细菌比较多的地方放置20min。目的在于保证采集微生物的数量足够多。设立对照组和实验组进行实验,实验分4组,每组都包含4种培养基。灭菌结束后,将平板放入37℃的温箱中,培养48h后观察其灭菌效果。未经灭菌的4种培养基(对照组)上长出了大量的菌落,而在灭过菌的培养基(实验组)中全部没有长菌落。根据我们的经验以马铃薯培养基(PDA)最好,其取材方便,制作简易,无菌效果也是最好的。使用家用高压锅加热排气10min后,加上高压阀,再排气后,维持15min就可以达到一般灭菌的效果。2.3.2根据使用高压温度选择合适的微生物培养基为了检验家用高压锅制作培养基时的灭菌效果,我们选择具有抗热、抗化学药物和抗辐射的枯草芽孢杆菌进行实验。实验结果显示:对照组的4块平板上长出了大量的菌落或菌斑;而实验组情况是加阀排气后维持时间在40min～55min范围内的培养基被污染的极少,效果与高压灭菌锅接近;而加阀排气后维持时间不足40min,污染情况严重,时间越短污染率越高,不能作为微生物培养基使用。我们测定了家用高压锅在加热排气10min后,加上高压阀,再排气后,维持15min后锅内的温度可达119.9℃(本实验室在海拔约1900m处),压力约为1kg/cm2,非常接近高压消毒灭菌所要求的标准温度和标准压力(121℃,1.05kg/cm2)。只要适当延长灭菌时间,即可达到预期的效果。可以预见,该方法在低海拔地区的使用效果会更好。综上所述,可以得出以下结论:用家用高压锅对微生物培养基进行消毒灭菌,在高压锅加热排气10min后,加上高压阀,排气后再维持55min就可以达到较好的消毒灭菌效果。在教学设备欠缺的广大农村中学,可考虑选用家用高压锅进行微生物培养基的制备,这样既不影响教学进程又能取得较好的教学效果。马铃薯200g,蔗糖20g,琼脂18g,水1000mL,pH自然。马铃薯去皮,切成块状煮沸30min,然后用双层纱布过滤,再加入糖和琼脂,