DB43T-箭叶淫羊藿组织培养技术规程

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"标准文件_一级条标题,2,标准文件_附录一级条标题,2,"15344前言 III171581范围 5274232规范性引用文件 5323123术语和定义 562634组培设施 5117835外植体及其处理 580626培养基配制 6176057组织培养 78炼苗 7141769移栽 71633510苗木出圃 81593611包装、标志、运输 81092712档案管理 814261附录A（资料性）MS培养基配制方法 1014261附录B（资料性）生产档案 10前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担专利识别的法律责任。本文件由湖南省林业局提出。本文件由湖南省林业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南环境生物职业技术学院、怀化市林业局、湖南省林业科学院、怀化众鑫科技农业有限公司、广州市名卉景观科技发展有限公司本文件主要起草人：梁忠厚、刘慧娟、李静纳、黄雯、陈乐谞、李桂芝、贺灵芝、李亚军、李翔、杨赛男、胡春梅、李有清、王旭军、戴龙东、周誉君。箭叶淫羊藿组织培养育苗技术规程范围本文件规定了箭叶淫羊藿（EpimediumSagittatum）组织培养的技术要求，包括组培设施、外植体及其处理、培养基配制、组织培养、炼苗、移栽、苗木出圃、包装标志运输、档案管理等内容。本文件适用于湖南省内箭叶淫羊藿的组织培养生产。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁生产技术规程NY/T1276农药安全使用规范总则GB/T8321农药合理使用准则术语和定义3.1箭叶淫羊藿（Epimediumsagittatum）一种多年生草本植物，属于小檗科淫羊藿属，具有药用价值。3.2组织培养在无菌条件下，利用植物的细胞、组织或器官在人工培养基上进行离体培养的技术。3.3外植体用于组织培养的植物组织或器官片段。3.4继代培养将培养物从原培养基转移到新鲜培养基上，以维持其生长和增殖的过程。3.5生根培养诱导培养物产生根系的过程。3.6炼苗将组培苗从无菌环境逐步过渡到自然环境的过程。组培设施按照NY/T2306-2013的规定执行。5外植体及其处理5.1外植体选取选取未萌发出新叶的越冬芽、约八成熟的果序、新抽出的枝条的三叉点分支处、新抽出的花序。5.2外植体处理5.2.1越冬芽流水冲洗1h～2h，转入超净工作台中，1mg/ml的二氧化氯消毒10min，无菌水冲洗2次～3次，75%酒精消毒30S～40S，无菌水冲洗2次～3次，0.1%氯化汞消毒15min，无菌水漂洗3次～4次。5.2.2未成熟果序将果序放入0℃～5℃环境中培养3周，用200倍84消毒液消毒30min～40min,清水冲洗1h～2h。在超净工作台中对清洗过的果序用75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗2次～3次，0.1%质量浓度的苯扎溴铵消毒8min～12min，取出无菌水漂洗3次～4次。5.2.3叶柄分支点截成约2cm～2.5cm茎段，800倍的百菌清消毒15min～20min，清水冲洗1h，转入超净工作台中用75%的酒精消毒25s～35s，无菌水漂洗3次～4次,用2%NaClO溶液处理8min～12min，无菌水漂洗3次～4次。5.2.4花序取10cm～20cm长花序，清水冲洗1h～2h，置于超净工作台中用75%的酒精消毒30s～45s，无菌水漂洗3次～4次，0.1％HgCl2溶液处理4min～8min，无菌水漂洗4次～5次。6培养基配制6.1培养基选择使用MS培养基作为基本培养基。6.2MS培养基配制MS培养基配制方法见附录A。6.3培养基配方6.3.1愈伤诱导培养基越冬芽：MS+2.5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+0.5mg/LGA3。未成熟果序：MS+2.0mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA。叶柄分支点：MS+0mg/L2,4-D+0.6mg/LIBA+1.0mg/L6-BA。花序：MS+2.7mg/L2,4-D+0.8mg/L6-BA+0.8mg/LNAA。6.3.2丛生芽诱导培养基MS+1.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAA。6.3.3丛生芽增殖培养基MS+1.2mg/L6-BA+1.0mg/LNAA。6.3.4生根培养基1/2MS+0.5g/L活性炭。6.4培养基灭菌与保存按照NY/T2306-2013的规定执行。7组织培养7.1培养条件培养室温度23℃±2℃，光照强度1000lux～2000lux，光照时间14h/d。7.2初代培养7.2.1未成熟果序将果序撕开，取出种子，沿长轴方向用解剖刀划1～2道创口,创口向下接种于愈伤组织诱导培养基上。7.2.2叶柄分支点将叶柄分支点切成1cm～2cm茎段，用解剖刀沿叶柄分支点纵向划伤2～3道创口，创口向下接种于愈伤组织诱导培养基上。7.2.3花序将花序切成1cm～1.5cm小块，接种到愈伤组织诱导培养基上。7.3继代培养将经增殖培养的愈伤组织转接到丛生芽诱导培养基中；再将分化出的丛生芽接种在丛生芽增殖培养基上。7.4生根培养选取生长健壮的4cm～5cm分化苗接入生根培养基中，培养45d～50d，待根系发达后炼苗。8炼苗选择根系生长健壮，5条～7条侧根的幼苗进行炼苗。打开瓶盖，在培养室内炼苗2d～3d；后将组培苗移至温度20℃～25℃、湿度70%～80%的温室中炼苗1周～2周，逐渐增加光照和通风。9移栽9.1容器选用穴盘或底部有孔的育苗盘。9.2基质珍珠岩、蛭石、泥炭土体积比1:2:3。9.3方法取出生根苗，清水洗净根部培养基，用1000倍甲基托布津或多菌灵溶液浸泡根部5min～8min，置于通风阴凉处晾干水分，再移栽入已准备好的基质中。9.4苗期管理9.4.1大棚环境移栽初期温度保持在18℃～25℃，湿度85％～90％，基质含水量70％～80％，适当遮荫，2周后转入正常管理。9.4.2追肥新叶长出后，每隔15d～20d用氮磷钾水溶性肥600倍～800倍溶液浇苗1次。9.4.3病虫害管理对苗期病虫害以预防为主，综合防治。施用农药应符合NY/T1276和GB/T8321的规定。10苗木出圃苗高5cm以上，根系长5cm以上，芽苞1个以上，叶片3片以上，出圃。11包装、标志、运输11.1包装采用干燥、清洁、无异味、的材料，外包装用纸箱。11.2标志每箱贴上标签，注明品种、数量、产地、出苗日期等。11.3运输运输过程避免日晒、雨淋，高温和严寒，温度控制在5℃～25℃，防倒置。12档案管理12.1内容涵盖组织培养育苗过程中外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、炼苗与移栽、出圃、包装等内容，逐项如实记载，记录表格见附录B。12.2保存档案采用纸质档案和电子档案2种方式，保存时间3年。

（资料性）

MS培养基配制方法MS培养基配制方法方法见表A1。表A1MS培养基配制方法方法种类成分称取量（mg）母液体积（ml）配制1升培养基吸取量大量元素KNO3190001000100NH4NO316500MgSO4·7H2O3700KH2PO41700CaCl2·2H2O4400微量元素MnSO4·4H2O2230100010ZnSO4·7H2O860H3BO3620KI83