2025年大学生物（细胞培养实验）试题及答案

2025年大学生物（细胞培养实验）试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题共30分）答题要求：每题只有一个正确答案，请将正确答案的序号填在括号内。(总共10题，每题3分)w1.细胞培养中，常用的基础培养基是（）A.DMEMB.RPMI1640C.MEMD.以上都是w2.细胞培养时，最适宜的二氧化碳浓度一般为（）A.1%B.3%C.5%D.10%w3.用于细胞培养的血清，通常采用（）A.胎牛血清B.小牛血清C.马血清D.人血清w4.细胞培养过程中，防止微生物污染的常用抗生素是（）A.青霉素B.链霉素C.庆大霉素D.以上都是w5.细胞传代培养时，一般当细胞长满培养瓶底的（）时进行传代。A.50%B.70%C.80%D.90%w6.细胞冻存时，常用的保护剂是（）A.DMSOB.甘油C.乙醇D.以上都是w7.细胞复苏时，正确的操作顺序是（）A.37℃水浴快速解冻，离心弃上清，加培养液重悬接种B.4℃水浴缓慢解冻，离心弃上清，加培养液重悬接种C.直接将冻存管放入培养箱解冻，然后接种D.先在室温放置1小时解冻，再离心接种w8.细胞培养箱的温度一般设置为（）A.常温B.30℃C.37℃D.42℃w9.细胞培养用的水通常要求是（）A.蒸馏水B.去离子水C.双蒸水D.自来水w10.细胞培养过程中，发现细胞生长缓慢，可能的原因不包括（）A.血清质量差B.培养温度不合适C.细胞密度过高D.培养液pH值合适第II卷（非选择题共70分）w11.（10分）简述细胞培养的基本流程。w12.（15分）细胞培养过程中，如何进行无菌操作？w13.（15分）请说明细胞传代培养的步骤及注意事项。材料题：某实验室在进行细胞培养实验时，使用了DMEM培养基、10%胎牛血清、青霉素和链霉素。在培养过程中，发现细胞生长状态不佳，培养液变浑浊。w14.（15分）请分析细胞生长状态不佳且培养液变浑浊可能的原因，并提出相应的解决措施。w15.（15分）若要对培养的细胞进行冻存，简述冻存的具体操作及后续复苏的要点。答案：w1.D；w2.C；w3.A；w4.D；w5.C；w6.A；w7.A；w8.C；w9.C；w10.D；w11.细胞培养基本流程：准备细胞培养所需物品，如培养瓶、培养基、血清、抗生素等。选择合适的细胞系，复苏细胞。将复苏后的细胞接种到含合适培养液的培养瓶中，置于培养箱培养。定期观察细胞生长状态，当细胞长满进行传代培养。如需长期保存细胞，则进行冻存。w12.细胞培养无菌操作：在超净工作台操作，提前紫外灯照射消毒。实验人员穿戴无菌工作服、口罩、手套。操作前用酒精擦拭双手和台面。打开的试剂瓶及时盖好，避免长时间暴露。接种工具如吸管、移液器头要提前灭菌，操作过程中避免交叉污染。培养细胞的器皿要提前灭菌处理。w13.细胞传代培养步骤：在显微镜下观察细胞生长状态，当细胞长满培养瓶底约80%时进行传代。吸弃原培养液，用PBS冲洗细胞1-2次。加入适量胰蛋白酶消化液，覆盖细胞，放入培养箱或在室温下消化，显微镜下观察细胞变圆、间隙增大时，立即吸弃消化液。加入含血清的培养液终止消化，用吸管轻轻吹打细胞，使其分散成单细胞悬液。按合适比例接种到新的培养瓶中，补充新鲜培养液，放入培养箱培养。注意事项：严格无菌操作，消化时间不宜过长，吹打细胞力度要适中，避免损伤细胞，接种密度要合适。w14.可能原因及解决措施：污染，可能是操作过程中无菌不严格，导致微生物进入培养液。解决措施：重新严格按照无菌操作要求进行实验，更换培养液和培养器皿，对污染的细胞进行丢弃。血清质量问题，血清可能存在质量差异或变质。解决措施：更换血清品牌或批次，重新复苏细胞进行培养。细胞老化，传代不及时导致细胞老化。解决措施：按照合适的传代时间及时传代细胞。w15.冻存操作：配制冻存液，一般为含10%-20%DMSO的培养液。将对数生长期的细胞消化制成单细胞悬液，离心弃上清。加入适量冻存液重悬细胞，调整细胞密度至合适浓度。将细胞悬液分装到冻存管中，密封好。先将冻存管置于4℃冰箱1-2小时，再放入-20℃冰箱2小时，最后转入-80℃冰箱过夜或长期保存。复苏要点：从-80℃冰箱取出冻