2026年生物制药技术员资格考试试题及答案

2026年生物制药技术员资格考试试题及答案1.单项选择题（每题1分，共30分）1.1在CHO细胞培养过程中，发现乳酸脱氢酶（LDH）活性显著升高，最可能的原因是A.培养基中葡萄糖浓度过高B.细胞进入对数生长期C.细胞膜完整性受损D.谷氨酰胺补充不足答案：C解析：LDH为胞内酶，培养液中活性升高提示细胞膜破损，与凋亡或机械剪切相关；葡萄糖过高主要导致乳酸堆积而非LDH泄漏；对数期细胞活力高，LDH应维持在低水平。1.2下列哪项不是单克隆抗体人源化的目的A.降低免疫原性B.提高亲和力C.延长血清半衰期D.减少HAMA反应答案：B解析：人源化通过置换鼠源框架区降低抗抗体反应，但亲和力可能下降，需进一步亲和力成熟；延长半衰期依赖Fc工程而非人源化本身。1.3关于生物反应器Scale-down模型，错误的是A.用于验证工艺鲁棒性B.需保持体积传氧系数kLa一致C.搅拌功率输入P/V必须与生产规模相同D.可用于故障调查答案：C解析：Scale-down强调关键参数相似而非全部相同，P/V常因几何限制无法一致，需通过kLa、混合时间等关键指标模拟大罐环境。1.4在ProteinA层析中，提高洗脱pH至4.0仍出现抗体峰拖尾，优先调整A.降低电导率B.提高流速C.缩短保留时间D.加入0.1M精氨酸答案：D解析：精氨酸为稳定剂，可抑制低pH下抗体聚集和与填料次级作用；降低电导反而可能增强静电吸附导致拖尾加剧。1.5下列哪项不是病毒清除验证中“缩小模型”需证明的等效性A.LRV≥5B.流速一致C.柱高与线性流速比例一致D.缓冲液pH±0.2答案：B解析：缩小模型允许流速成比例下降，但需保持停留时间、柱高/直径比、缓冲液组成等关键参数一致；LRV为结果指标非等效条件。1.6使用CRISPR-Cas9敲除GS-CHO细胞中谷氨酰胺合成酶（GS）基因，最佳筛选标记为A.嘌呤霉素B.甲硫氨酸磺酰亚胺（MSX）C.潮霉素D.G418答案：B解析：GS-CHO已缺失内源GS，外源GS表达使细胞能在无谷氨酰胺培养基生长；MSX抑制GS活性，只有高表达GS细胞存活，实现基因剂量筛选。1.7关于高浓度蛋白制剂（>100mg/mL）开发，最先出现的稳定性问题通常是A.氧化B.脱酰胺C.粘度升高D.聚集答案：C解析：高浓度下分子间距离缩短，疏水相互作用增强，导致粘度指数级上升，给灌装和注射带来挑战；聚集虽重要，但粘度问题更早显现。1.8在DOE（实验设计）中，Plackett-Burman设计主要用于A.筛选关键工艺参数B.建立响应面模型C.优化配方D.评估交互作用答案：A解析：Plackett-Burman为两水平部分析因，可高效识别主效应，适用于早期大量因子筛选；响应面需中心复合或Box-Behnken设计。1.9关于生物类似药“头对头”临床比对研究，错误的是A.主要终点需使用敏感性指标B.等效界值通常设为±1.5倍标准差C.样本量基于检测差异的把握度D.允许使用历史数据替代对照答案：D解析：生物类似药必须与原研直接比对，历史数据仅用于支持，不可替代同期对照；等效界值常参考EMA±1.5×SD标准。1.10在病毒样颗粒（VLP）疫苗生产中，采用杆状病毒-昆虫细胞系统，最需关注的宿主蛋白为A.微管蛋白B.卵黄蛋白C.丝氨酸蛋白酶D.保幼激素酯酶答案：C解析：昆虫细胞丝氨酸蛋白酶易激活VLP表面蛋白降解，导致效力下降；微管蛋白为常见HCP但免疫风险低。1.11关于连续制造中周期性放行模式（PAT），正确的是A.每批需全检B.可基于实时放行检测（RTRT）C.无需工艺验证D.仅适用于小分子答案：B解析：PAT结合多变量统计过程控制（MSPC），实现RTRT，减少终产品检测；生物药连续制造指南已明确其适用性。1.12在细胞库建立中，主细胞库（MCB）与工作细胞库（WCB）的关系是A.MCB可直接用于生产B.WCB来源于MCBC.两者需同步检定D.WCB可替代MCB答案：B解析：WCB由MCB扩增建立，形成两级系统；生产仅使用WCB，MCB作为原始种子备份。1.13关于宿主细胞DNA残留限度，WHO规定为A.≤10ng/剂B.≤100pg/剂C.≤1μg/剂D.≤50ng/剂答案：A解析：WHO1987指南设定DNA残留≤10ng/剂，长度<200bp；FDA/EMA对DNA长度更严格。1.14在冻干工艺中，塌陷温度（Tc）通常A.高于共晶温度TeuB.低于玻璃化转变温度Tg'C.等于共熔温度TmD.与pH无关答案：A解析：Tc为冻干饼机械支撑丧失温度，通常高于Teu但低于Tm；pH影响无定形相Tg'，进而影响Tc。1.15关于双特异性抗体knob-into-hole技术，正确的是A.在CH3区引入二硫键B.通过电荷互补促进异源二聚C.需共转染两条重链质粒D.轻链共用降低错配答案：C解析：KiH在CH3区分别引入大knob与小hole突变，促进异源二聚；共转染两条重链质粒，轻链共用减少轻链错配。1.16在下游纯化中，使用阴离子交换膜层析（AEX）主要清除A.宿主细胞蛋白B.病毒C.聚集体D.内毒素答案：B解析：AEX膜在高流速下保持高结合容量，对带负电病毒颗粒清除效率高；HCP与内毒素清除多依赖多步层析。1.17关于mRNA疫苗加帽率测定，首选方法为A.RT-qPCRB.毛细管电泳C.LC-MSD.免疫印迹答案：C解析：LC-MS可区分Cap0、Cap1及未加帽mRNA，定量准确；RT-qPCR无法区分帽结构。1.18在单抗电荷异构体分析中，阳离子交换色谱（CEX）峰形展宽最可能由以下哪项引起A.缓冲液pH高于抗体pIB.柱温升高C.流速降低D.盐梯度斜率过大答案：A解析：pH>pI抗体带负电，不与CEX填料结合，出现穿透峰；柱温升高通常改善传质，峰形变锐。1.19关于生物制药清洁验证，最难清除的残留物通常是A.培养基成分B.宿主DNAC.产品蛋白D.缓冲液盐答案：C解析：产品蛋白易吸附不锈钢表面，形成顽固生物膜；DNA虽顽固但可通过强碱清除，盐易溶于水。1.20在细胞培养中，添加胆固醇脂质体主要目的为A.提高单抗产量B.增强抗剪切力C.延长半衰期D.抑制凋亡答案：B解析：胆固醇插入细胞膜，提高膜刚性，抵抗搅拌剪切；对产量影响间接。1.21关于腺相关病毒（AAV）空壳率测定，最佳技术为A.动态光散射B.分析型超速离心（AUC）C.SEC-MALSD.透射电镜答案：B解析：AUC可区分空壳（~60S）与实心（~100S）颗粒，定量准确；DLS无法分辨，SEC-MALS对相近分子量不敏感。1.22在生物反应器放大中，保持P/V恒定常导致A.kLa升高B.剪切力下降C.混合时间延长D.CO2stripping增强答案：C解析：P/V恒定意味着搅拌功率线性放大，但大罐搅拌桨直径增大，混合时间延长；kLa常下降。1.23关于抗体偶联药物（ADC）DAR测定，疏水相互作用色谱（HIC）优势为A.高分辨率B.保持天然结构C.可区分0-8药物分布D.与质谱联用方便答案：C解析：HIC按疏水性分离不同DAR物种，0-8峰形清晰；天然结构保持为次要优势，质谱联用困难。1.24在生物制药厂房设计中，B级区背景下的A级区气流模式需验证A.单向流风速0.36–0.54m/sB.粒子≥0.5μm≤3520/m3C.气流可视化（烟雾试验）D.温湿度±2℃/5%RH答案：C解析：A级区需通过烟雾试验证明无涡流，风速与粒子限度为静态指标；温湿度为B级要求。1.25关于连续流加细胞培养（Perfusion），正确的是A.细胞密度通常<5×10^6cells/mLB.需使用细胞截留装置C.产物滞留时间延长D.灌流速与死亡速率无关答案：B解析：Perfusion依赖切向流过滤或沉降器截留细胞，维持高密度；密度可达80×10^6cells/mL，产物连续收获滞留短。1.26在病毒灭活中，低pH孵育最适条件为A.pH3.0–3.6，15–30℃，≥30minB.pH4.0，4℃，5minC.pH5.0，37℃，1hD.pH6.0，室温，过夜答案：A解析：指南要求pH≤3.6、室温、≥30min确保≥4LRV；过高pH或低温灭活效果不足。1.27关于生物制药变更管理，属于重大变更的是A.更换层析填料供应商但配基相同B.培养基灭菌过滤器孔径0.1→0.22μmC.生产规模从500L放大至2000LD.制剂防腐剂浓度降低10%答案：C解析：规模放大改变几何与流体动力学，属重大变更需验证；同配基填料更换为中等变更。1.28在单抗糖型分析中，PNGaseF释放的N-糖链标记采用A.2-ABB.4-硝基苯肼C.丹磺酰肼D.苯甲酰氯答案：A解析：2-AB为荧光标记金标准，灵敏度高；其余标记效率低或背景高。1.29关于生物制药技术转移，最关键文件为A.批生产记录B.技术转移报告C.工艺描述D.风险评估答案：C解析：工艺描述为核心知识载体，定义参数范围与控制策略；报告为输出文件。1.30在细胞培养代谢分析中，谷氨酰胺分解产物为A.乳酸与氨B.丙酮酸与CO2C.α-酮戊二酸与NH3D.乙酰CoA与NADH答案：C解析：谷氨酰胺酶催化生成谷氨酸与NH3，谷氨酸脱氢酶进一步生成α-酮戊二酸；乳酸来自葡萄糖。2.配伍选择题（每题2分，共20分）A.离子交换层析B.疏水层析C.体积排阻层析D.羟基磷灰石层析E.亲和层析2.1清除宿主细胞DNA残留首选：A2.2分离抗体聚集体与单体：C2.3基于钙离子配位差异分离：D2.4利用Fc段结合：E2.5在高盐条件下结合目标：B3.判断题（每题1分，共10分）3.1生物反应器放大时，保持kLa恒定即可确保溶氧一致。答案：错解析：kLa相同但细胞密度、耗氧速率变化，仍需动态平衡。3.2冻干保护剂蔗糖在降温过程中优先结晶。答案：错解析：蔗糖为无定形保护剂，抑制结晶，维持蛋白无定形相。3.3宿主蛋白残留检测可采用通用ELISA试剂盒。答案：错解析：需针对特定宿主开发平台特异性试剂盒，通用型交叉反应高。3.4ADC药物中，高DAR一定伴随高毒性。答案：错解析：高DAR增加清除率与聚集风险，体内暴露可能反而下降。3.5连续制造可减少厂房占地面积。答案：对4.简答题（每题10分，共40分）4.1阐述高浓度蛋白制剂粘度升高的分子机制及解决策略。答案：机制：高浓度下分子间距离缩短，疏水补丁、电荷簇相互作用增强，形成瞬态网络；Fab-Fab、Fc-Fc交叠导致水化层重叠，流动阻力增大。策略：1.氨基酸置换：降低表面疏水性与电荷补丁；2.添加小分子赋形剂：精氨酸、脯氨酸破坏蛋白-蛋白作用；3.调节pH与离子强度：远离pI减少静电吸引；4.引入剪切稀释装置：在线混合降低注射力；5.使用共溶剂：如少量乙醇降低介电常数，削弱静电；6.糖基化工程：增加寡糖位点，提高空间位阻。4.2描述病毒清除验证中“缩小模型”建立步骤。答案：1.工艺表征：确定关键参数范围（pH、电导、流速、停留时间）；2.缩小比例：保持柱高/直径比、膜面积/体积比一致；3.病毒选择：至少三种不同理化特性病毒（包膜/非包膜、DNA/RNA、大小）；4.加标实验：在关键步骤前加入高滴度病毒（≥5%v/v），计算LRV；5.等效性证明：对比大规模与小规模中间体纯度、收率、杂质谱；6.统计评估：LRV≥4且95%置信区间下限≥1；7.报告撰写：包含偏差与CAPA。4.3比较Perfusion与Fed-batch在单抗生产中的经济差异。答案：Perfusion优势：1.设备体积小，一次性系统降低CAPEX；2.连续收获减少下游储罐；3.高细胞密度提高体积产率，降低培养基消耗/克蛋白；4.灵活响应市场需求，降低库存。劣势：1.操作复杂，需24h监控；2.膜堵塞风险增加耗材成本；3.工艺验证与监管路径复杂；4.高细胞密度增加CO2与渗透压管理难度。Fed-batch：1.技术成熟，监管友好；2.批次清晰，质量追溯简单；3.但规模放大需大罐，CAPEX高；4.下游批处理导致间歇操作，设备利用率低。综合：对稳定大需求产品，Perfusion可降低30%COGS；对多品种共线，Fed-batch灵活。4.4说明mRNA疫苗加帽率对免疫原性的影响及检测要点。答案：影响：未加帽mRNA易被核酸酶降解，翻译效率下降，表达抗原量低，导致抗体滴度不足；同时未加帽RNA激活RIG-I/MDA5，增加IFN-β分泌，引发过度炎症反应。检测要点：1.样品制备：使用抗帽抗体富集，避免RNase污染；2.LC-MS：离子对反相色谱分离Cap0、Cap1、Cap2，高分辨质谱定量；3.内标：合成同位素标记帽类似物；4.方法验证：线性、准确度、精密度、LOD≤1%；5.放行标准：Cap1≥80%，未加帽≤5%；6.稳定性：-80℃储存6个月加帽率下降≤5%。5.计算题（每题10分，共20分）5.1某Fed-batch培养最终体积2000L，活细胞密度15×10^6cells/mL，活力90%，单抗产量5g/L。下游纯化总收率65%，求理论单抗产量。解：体积=2000L滴度=5g/L总蛋白=2000×5=10000g收率65%理论产量=10000×0.65=6500g=6.5kg5.2病毒清除验证中，低pH处理前病毒滴度10^8.5TCID50/mL，处理后取样1mL未检出（检测限10^1.5TCID50/mL），求LRV。解：LRV=log10(输入/输出)=log10(10^8.5/10^1.5)=7.0因未检出，按检测限计算，LRV≥7.0。6.案例分析题（每题20分，共40分）6.1某ADC项目临床I期出现输液反应，表现为潮红、低血压，发生率30%。分析可能原因与改进策略。答案：原因：1.高DAR（>6）增加疏水性，形成微粒，激活补体；2.制剂中聚山梨酯80降解产生脂肪酸，引发过敏；3.连接子不稳定，提前释放毒素，导致全身毒性；4.患者预存抗PEG抗体，对PEG化脂质体产生反应。策略：1.降低DAR至3-4，采用亲水连接子；2.更换稳定表面活性剂（如聚山梨酯20→泊洛沙姆188）；3.引入组氨酸缓冲体系，减少氧化；4.临床前采用补体激活试验（CH50）筛选处方；5.输注前给予抗组胺与皮质激素预用药；6.采用逐步递增输注速率。6.2某生物类似药III期临床比对试验，主要终点ACR20等效界值预设±15%，结果原研组65%，类似药组70%，95%CI差异为[-2%,12%]，监管机构提出异议，请分析并回复。答案：分析：1.界值±15%过宽，EMA建议±12%；2.CI上限12%虽未超出15%，但接近边缘，把握度不足；3.次要终点ACR50/70、药代动力学相似性需补充；4.免疫原性AD