DB43T 789-2013 饲料中喹乙醇的测定 酶联免疫吸附法

ICS65.120DB43DB43/T789—2013饲料中喹乙醇的测定DeterminationofOlaquindoxinFeedEnzyme-linkedImmunosorbentAssay2013-08-15发布2013-10-15实施IDB43/T789—2013 Ⅱ 12规范性引用文件 1 14试剂与材料 15仪器与设备 6采样 27试样的制备 28提取与测定 29结果计算 210结果判断 211灵敏度、准确度、精密度 3DB43/T789—2013Ⅱ本标准按GB/T1.1—2009的规则编制。本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所、湖南省畜禽水产品质量检验检测中心。本标准主要起草人：李裕、谭美英、吴礼龙、徐丽枚、陈启友、黄勇、曹峰、周玉洁、周灿、刘芬。DB43/T789—2013饲料中喹乙醇的测定酶联免疫吸附法本标准规定了饲料中喹乙醇的酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料中喹乙醇的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682国家实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备通过抗原抗体反应，酶标记物将底物转化为有色产物。经酶标仪测定其吸光度，计算试样中喹乙醇的含量。4试剂与材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682二级水的规定。4.2喹乙醇标准品(含量≥99.6%)。4.3喹乙醇标准溶液：精确称取喹乙醇标准品10.0mg,用少量水溶解，用甲醇稀释至100mL。取此液10mL,再用甲醇稀释至100mL。此标准液需置于棕色容量瓶内避光4℃冷藏保存。保存期为1个月。4.4喹乙醇酶联免疫试剂盒不同试剂盒产品组成或名称可能存在差别。4.4.1喹乙醇系列标准溶液。4.4.2酶标板。4.4.3酶标记物。4.4.4喹乙醇抗体。4.4.5底物溶液。4.4.6显色溶液。4.4.7终止液。工2DB43/T789—20135.1酶标仪(配相应滤光片)。5.2天平：感量0.01g和感量0.00001g。5.3离心机。5.4离心管。5.5旋涡混合器。6采样按GB/T14699.1的规定执行。7试样的制备按GB/T20195的规定执行。取制备好的供试样品，作为供试试料。取制备好的空白样品，作为阴性试料。称取适量空白试料，添加喹乙醇标准溶液，使其喹乙醇含量为200μg/kg,作为阳性添加试料。8提取与测定样品的提取与测定按试剂盒说明书的要求执行。9结果计算所获得的标准溶液或供试样品的平均吸光度值除以零浓度标准溶液的平均吸光度值再乘以100%,得到以百分比给出的吸光度值，以公式(1.1)表示：式中：B—标准溶液或供试样品的平均吸光度值；Bo—零浓度标准溶液的平均吸光度值。以标准溶液中喹乙醇浓度(ng/mL)的自然对数为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线，求出回归曲线的方程，计算供试液中喹乙醇的浓度。饲料中喹乙醇的含量按实际稀释倍数计算。10结果判断10.1实验有效性判定标准曲线应线性良好，且R²≥0.9900。阴性试料不得呈喹乙醇阳性(或假阳性率≤5%)。阳性添加试料回收率应在(60.0～120.0)%之间。3DB43/T789—201310.2结果判定供试试料检测结果小于100.0μg/kg时，可判为未检出，大于100.0μg/kg时，判为阳性，需用确证法确认。11灵敏度、准确度、精密度本方法在饲料中的定量限为100μg/kg。11.2