免疫细胞诊断及治疗完整版

克利(Li)斯蒂娜的世界第一页，共五十二页。第二页，共五十二页。第三页，共五十二页。第四页，共五十二页。45岁进(Jin)入了肿瘤发病高峰，且肿瘤风险随年龄增加呈几何倍数上升65岁的老年人患肿瘤的几率是25岁年轻人的50多倍40岁后肿瘤发病率逐(Zhu)年增长第五页，共五十二页。恶性肿瘤离我们有(You)多远?我国每年新发肿瘤病例约(Yue)为312万例平均每天8550人（全国每分钟有6人被诊断为癌症）肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、食管癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、脑肿瘤和乳腺癌第六页，共五十二页。肿瘤的治(Zhi)疗第七页，共五十二页。第八页，共五十二页。第九页，共五十二页。攻克癌(Ai)症

人类的第一次手术1809年德国医生McDowell第一次用手术切除卵巢癌，并取得36年生存期的良好效果。放疗1895年伦琴发现了X线,1896年即用X线治疗了第1例晚期乳腺癌。化疗化学治疗上世纪40年代用氮芥治疗恶性淋巴瘤取得显著疗效，自此开始了肿瘤的化学治疗。50年代以环磷酰胺、氟尿嘧啶合成为标志是化疗的第二里程碑(Bei)，70年代顺铂及阿霉素进入临床并得以广泛应用是化疗的第三里程碑(Bei)。90年代以后，抗肿瘤的新药不断推出。第十页，共五十二页。ChesterSoutham:在五十年(Nian)代首次给志愿者注射活的癌细胞结果:注射的癌细胞在健康人体内不生长.注射的癌细胞在癌症病人体内可长成大肿瘤。结论：癌症病人体内失去健康人所具有广谱抗癌活性。研究项目受到伦理(Li)学及法律的极大挑战。研究结果为抗癌界带来极大提示，1968年被推选成全美抗癌学会主席。Science，1957年一月125:158-160首次证明人体内天然抗癌活性的存在人体免疫与肿瘤的发生第十一页，共五十二页。临床(Chuang)信息部肿瘤细(Xi)胞免疫治疗第十二页，共五十二页。免疫器(Qi)官免疫(Yi)细胞免疫分子第十三页，共五十二页。第十四页，共五十二页。

免疫系统是人体的防御体系，一方面清除细菌、病毒等外来异物，另一方面清除体内衰老的无功能细胞以及发生突变的细胞。一个人身(Shen)上每天有数万亿个细胞在复制，在复制中，约有万分之一到百万分之一的细胞会出现差错，也就是说，每天约有50-100万个细胞可发生突变。有的突变细胞进一步变为癌细胞。免疫系统免疫防御、免疫监视、免疫自(Zi)稳第十五页，共五十二页。

“Inlarge,long-livedanimals,likemostofthewarm-bloodedvertebrates,inheritablegeneticchangesmustbecommoninsomaticcellsandaproportionofthesechangeswillrepresentasteptowardmalignancy.Itisanevolutionarynecessitythatthereshouldbesomemechanismforeliminatingorinactivatingsuchpotentiallydangerousmutantcellsanditispostulatedthatthismechanismisofimmunologicalcharacter.”——SirFrankMacfarlaneBurnet诺贝尔生理学或医学奖1960肿瘤免疫治疗理(Li)论—“免疫监视”理论(ImmuneSurveillanceTheory)“肿(Zhong)瘤免疫编辑”(TumorImmunoediting）

Elimination:免疫消除Equilibrium:免疫平衡Escape:免疫逃逸发病时健康时第十六页，共五十二页。肿(Zhong)瘤的潜伏期长达10年以上癌细胞反复进行分裂，约30次后大小(Xiao)约0.7cm时，初次被影像学识别为“癌症”；早期癌症被发现时的大小约是1cm，重量约是1g，其中癌细胞的个数约是10亿个；据统计，肿瘤发展到临床诊断，所经过的时间约为10年，这期间是防治的黄金时间。第十七页，共五十二页。肿瘤的治(Zhi)疗清除微小病灶、残余肿瘤细胞；增强机体免疫功能；增强放、化疗的敏感性；无明显毒副作用。局部快速切除肿瘤组织，见效快；容易遗漏的微小病灶或转移病灶。局部减少肿瘤负荷，对敏感的肿瘤见效快；不敏感肿瘤疗效欠缺，容易出现放射性损伤、骨髓抑制等。全身减轻肿瘤负荷，见效快；不敏感肿瘤疗效欠缺；副作用大，出现脱发、呕吐等，造成免疫系统损伤。第十八页，共五十二页。？第十九页，共五十二页。？？第二十页，共五十二页。临床信息(Xi)部FDA批准第一个免(Mian)疫细胞第二十一页，共五十二页。树突状细胞在抗(Kang)肿瘤免疫中发挥重要作用2010.4.29美国食品药品管理局批准Provenge(sipuleucel-T)，作为一种治疗晚期前列腺癌患者的免疫活性细胞，这标志着癌症进入一种新的治疗：自身免疫活性细胞治疗。Provenge诱导作用是通过抗原提呈细胞(APCs)负载前列腺癌酸性磷酸酶（PAP）抗原，继(Ji)而激活肿瘤特异的CD8+T细胞，诱导抗前列腺癌免疫应答。这是FDA首次批准的自体免疫细胞用于治疗肿瘤。第二十二页，共五十二页。前列腺癌是一个比较理想的生物治疗模型发(Fa)病率高病情进展缓(Huan)慢肿瘤相关抗原表达化疗疗效有限“非必需”组织前列腺癌细胞免疫治疗获得成功的原因PSA、PAP等内分泌治疗无效的患者，此时肿瘤负荷较小，机体具有一定的抗肿瘤能力第二十三页，共五十二页。Provenge疫苗

治疗晚期前列腺癌(Ai)的机制第二十四页，共五十二页。治疗(Liao)结果受试者：512名总体生存期：对照组:

21.7个月，治疗组:25.8个月。3年存活率：治疗组32%，对照组23%。副作用：主要是(Shi)发烧、发冷、疲劳和疼痛。第二十五页，共五十二页。2011年诺贝尔生(Sheng)理学或医学奖

BruceA.Beutler

JulesA.Hoffmann

RalphM.Steinman2011年诺贝尔生理学或医学奖揭晓，美国、法国三位科学家因在免疫学方面的发现获奖。其中一半的奖金归于BruceA.Beutler和JulesA.Hoffmann，获奖理由是在“Toll样受体和先天免疫激活方面的发现”；另一半奖金归于RalphM.Steinman，获奖理由是“发现树突状(Zhuang)细胞及其在获得性免疫中的作用”。美籍科学家比尤特勒和卢森堡籍科学家霍夫曼是因为发现“Toll样受体（Toll-likeReceptors，TLRs）及其配体”获得2011年诺贝尔生理学或医学奖第二十六页，共五十二页。肿瘤的(De)免疫治疗时代已经来临权威(Wei)医学杂志纷纷刊文，高度评价免疫细胞治疗技术的前景肿瘤的免疫治疗时代已经来临癌症免疫疗法是2013年最值得关注的六大科学领域之一DC细胞治疗技术正走进肿瘤免疫治疗的前沿第二十七页，共五十二页。临床信(Xin)息部个体化体细胞免疫治疗(Liao)方案第二十八页，共五十二页。

根据不同肿瘤的生物学特性（肿瘤类型、分期和肿瘤的免疫源性）、患者的遗传背景（是否具有家族倾向？）、目前的病情状况(Kuang)（体质，免疫状况(Kuang)）、前期治疗方法、年龄等，在常规治疗的基础上，制定出适合病人的个体化体细胞免疫治疗方案。

第二十九页，共五十二页。（一）

针对老年肿瘤晚期患者，体质弱、免疫功能(Neng)极度低下采取抽少量血多次回输的治疗方案抽血(Xue)30-40ml外周血第1天第3次CIK回输第2次CIK回输第4天第8天第12天第14天第16天开始下一个疗程的治疗第1次CIK回输第三十页，共五十二页。(二）

化疗联合(He)细胞治疗的增效方案化疗前1天抽血50ml，进行CIK或D-CIK免疫(Yi)细胞培养第一周第二周7天第1次开始化疗第2次开始化疗回输CIK或D-CIK等细胞化疗前1天抽血50ml，进行CIK或D-CIK免疫细胞培养第三十一页，共五十二页。（三）

体细(Xi)胞免疫治疗联合放疗的增效方案放疗前抽(Chou)外周血50ml，上午放疗前放疗放疗放疗两周后，当天放疗后回输免疫细胞第2天周二第3天周三第1天周一第4天周四第6天周六第7天周日第5天周五回输培养的CIK、NK、D-CIK等细胞休息休息第三十二页，共五十二页。（四）

抗肿瘤效应细胞(Bao)交替使用方案第(Di)二周D-CIK第三周NK第四周D-CIK抽血30ml回输NK抽血50ml抽血30ml，回输NK细胞抽血50ml，回输D-CIK细胞第五周NK第六周D-CIK回输D-CIK第一周NK第三十三页，共五十二页。临床(Chuang)信息部细(Xi)胞

产品第三十四页，共五十二页。一、CIK细(Xi)胞

CIK细胞(Cytokine-InducedKiller，CIK)，即细胞因子诱导的杀伤细胞，是一种新型的免疫活性细胞，该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同“细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发(Fa)，提高机体免疫力。

第三十五页，共五十二页。DC细胞寻找肿瘤细胞的“雷达”DC又称树突状细胞。它是目前发现的功能最为强大的专职抗原递呈细胞，也是唯一能激活幼稚T细胞的抗原递呈细胞，在免疫应答的诱导中具有独特地位。经临床研究的结果显示，DC细胞可促使患者T细胞增殖分化，还可激活B淋巴细胞，全(Quan)面启动抗体免疫系统产生高效而特异的抗肿瘤效应，帮助重建肿瘤患者对肿瘤细胞的免疫监视功能。DC细胞的功能如同“雷达”，通过在体内随着血液全身各处主动搜索、识别肿瘤细胞，并把信息传递给免疫活性细胞，促进其激活和大量繁殖。二(Er)、DC细胞第三十六页，共五十二页。三(San)、DC-CIK通过负载肿瘤抗原的DC与CIK的有机结合（即DC-CIK细胞）能产生特异性和非特异性的双重抗肿瘤效应，二者具有一定的互补作用。DC-CIK细胞不仅能激发、增(Zeng)强肿瘤患者特异性抗肿瘤免疫应答，有效清除体内残留病灶，且在患者体内诱发免疫记忆，从而获得长期的抗瘤效应。DC-CIK自体细胞免疫治疗可以有效杀灭术后的残留肿瘤细胞，防治复发和转移，减轻放化疗的毒副作用，减轻患者痛苦，提高患者自身免疫机制和生活质量，延长患者生命。第三十七页，共五十二页。扩增活化的自体淋巴细胞（AutologousImmunotherapyLymphocytes,AIL），又称为高效CIK细胞。是从患者自体外周血（50-100ml）中分(Fen)离单个核细胞，经过体外激活扩增培养，得到的一种在生理条件下能够杀伤肿瘤细胞的细胞群，主要效应细胞包括MHC限制性效应细胞（CD3+CD8+细胞毒性T细胞、CD3+CD4+辅助性T细胞）、非MHC限制性效应细胞（CD3+CD56+细胞、CD3-CD56+NK细胞），可有效辅助恶性肿瘤的治疗。四、AIL细(Xi)胞第三十八页，共五十二页。AIL与CIK培(Pei)养方法比较50ml外(Wai)周血PBMCA培养法：B培养法：A培养法（传统CIK）：DI：IFN-γ1000U.ml-1D2：OKT3mAb.100ng.ml-1、IL-21000U.ml-1、PHA100ug.ml-1B培养法（AIL）：DI：IFN-γ1000U.ml-1D2：OKT3mAb.100ng.ml-1、IL-21000U.ml-1、PHA100ug.ml-1，AIL扩增试剂

第三十九页，共五十二页。自然杀伤细胞（Naturalkillercell，NK）是一种细胞质中具有大颗粒的细胞，来源于骨髓，主要存在于外周血、脾脏和(He)骨髓中。对靶细胞杀伤时既不需特异性抗体参加，也不需抗原预先致敏。自然杀伤细胞可在接触病原体或肿瘤细胞后，立即发挥非特异性杀伤靶细胞的作用，尤其是对多种肿瘤细胞有迅速杀伤和溶解作用。因此，NK细胞对癌症的监视作用已越来越受到重视。五、NK细(Xi)胞第四十页，共五十二页。一、NK细胞是人体内(Nei)抗癌活性的第一道防线，可直接杀死癌细胞，抑制肿瘤的生长及扩散；二、NK细胞会抑制肿瘤附近新血管的增生，因此可限制肿瘤取得所需要的养份进而限制肿瘤生长；三、NK细胞可直接改善并调节患者的免疫力及神经系统，间接提高患者之生活品质；四、副作用低或几乎无副作用。NK细(Xi)胞作用原理第四十一页，共五十二页。六(Liu)、iAPA-细胞SOCS1是维持(Chi)机体免疫耐受的重要分子Si-YiChenetal.发现：SOCS1(SuppressorofCytokineSignaling1)是一种重要的免疫负调节因子(antigenpresentationattenuator,APA)，对DC细胞的抗原呈递起负调节作用，限制抗原呈递的时间和强度，从而限制自体抗肿瘤免疫反应。该研究第一次提出了抑制免疫负调控因子来增强DC疫苗的概念NatureBiotechnol.2004;22:1521-2评述：NatureBiotechnol.2004;22:1546-53J.Clin.Invest.2006;116:90–100STATSOCS1JAKCytokineIFN

,IFN

,IL-2,IL-3,IL-4,IL-6,IL-12,IL-7,IL-15,M-CSF,etc.LPSMyD88TRAF6IKK

IKK

RelAp50I

BIKK

IRAKMalSOCS1TLR配体第四十二页，共五十二页。TAA

s-FlagellinSOCS1-siRNA:

解除DC免(Mian)疫耐受(persistentandenhancedSignals2/3)肿瘤(Liu)相关抗原(tumor-associatedantigen,TAA)intracellularSurvivin(Tcells)surfaceMUC1(TcellsandAb)分泌型FliC:TLR5ligandauto-andparacrineactivationofAPCs(enhancedSignals2/3)

siSOCS1-TTiAPA技术治疗肿瘤iAPA-细胞第四十三页，共五十二页。与传统免疫细胞治疗(Liao)相比，iAPA技术的优势结构新颖：iAPA因子包含(Han)抑制SOCS1的siRNA、肿瘤抗原（Survivin,muc1）和鞭毛蛋白。机制新颖：iAPA技术不但针对性增强DC免疫活性，而且去除了免疫负性调控因素，从而更有效的增强了免疫效应。创新靶点：iAPA技术作用的靶点独创性针对免疫活化通络上的关键性分子iAPA分子-SOCS144第四十四页，共五十二页。45iAPA™技术完全打破了传统的免疫治疗理念与方法，代表了免疫学理论的一场新的革命，为国际首创、世界一流。许多(Duo)研究成果已分别发表在国际一流权威杂志，包括《Naturebiotechnology》、《Naturemedicine》与《JCI》等。2008年3月第14期2004年12月第22期2006年1月第116期基础研究：国际首创世界一流为国际医学界所(Suo)公认第四十五页，共五十二页。

CTL(CytotoxicTLymphocyte)，细胞毒性T细胞，其表面标志是CD8。这些细胞的功能就像一个“杀手”，它们可以直接攻击带有特殊抗原的靶细胞，在抗病毒感染和(He)抗肿瘤免疫中具有极其重要的用，细胞毒性T细胞也被称为杀手T细胞。七(Qi)、CTL细胞第四十六页，共五十二页。肿瘤浸润淋巴细胞（TumorInfiltratingLymphocytes，TIL）是通过采集患者(Zhe)胸腔积水或者腹水，经过体外激活扩增培养，得到的一种在生理条件下能够杀伤肿瘤细胞的细胞群。它是新一代的特异性免疫活性细胞疗法，具