DB63∕T 2497-2026 青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术规程

ICS65.020.30

CCSB43

DB63

青海省地方标准

DB63/T2497—2026

青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术

规程

2026-01-09发布2026-02-10实施

青海省市场监督管理局发布

DB63/T2497—2026

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由青海省农牧业标准化技术委员会提出。

本文件由青海省农业农村厅归口。

本文件起草单位：中国科学院西北高原生物研究所、青海省种羊繁育推广服务中心。

本文件主要起草人：田得红、裴全帮、张子安、赵凯、韩步鹰、李雪。

本文件由青海省农业农村厅监督实施。

I

DB63/T2497—2026

青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术规程

1范围

本文件确立了青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术程序，规定了基因判型、选种、基因型选配

及选育档案建立等操作步骤的指示，描述了多胎基因型种羊选育技术的追溯方法。

本文件适用于青海毛肉兼用细毛羊多胎个体的分子标记选育。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T31016样品采集与处理移动实验室通用技术规范

GB/T34265Sanger法测序技术指南

NY/T1673畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程

DB63/T1036青海毛肉兼用细毛羊

DB63/T1606藏羊细管冻精人工授精技术规程

DB63/T1876藏羊采精技术操作规程

DB63/T2249青海藏羊种畜场档案管理技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

引物

用于DNA片段聚合酶链式反应扩增人工合成的一种具有特定的核苷酸序列。

基因型

某一生物个体全部基因组合的总称。

4选育技术流程

选育技术流程包括仪器设备、试剂及引物准备、样品采集、DNA提取、PCR扩增、上机测序、数据

分析、基因判型、选种、基因型选配等过程。技术流程见图1。

1

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图1青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术流程图

5技术操作步骤

仪器设备、试剂及引物准备

5.1.1仪器设备

凝胶成像分析系统，高速冷冻离心机，96孔核酸提取仪，超微量分光光度计，电泳槽和电泳仪，电

子天平，-20℃冰箱，水平摇床，单道可调移液器，测序仪，PCR仪，微波炉，干燥箱，高压灭菌锅。

5.1.2试剂与耗材

磁珠法基因组DNA提取试剂盒，96孔PCR板，POP-7™Polymer，3730RunningBuffer(10X)，Tris碱，

乙二胺四乙酸二钠，硼酸，NaOH，ddH2O，NaCl，EDTA，SDS，氯仿：异戊醇（24:1），酚：氯仿：

异戊醇（25:24:1），无水乙醇，70%无水乙醇，蛋白酶K，TE缓冲液，PBS，AgNO3，琼脂糖，超纯水，

尿素，溴化乙锭，聚丙烯酰胺凝胶，TEMED，AP，过硫酸铵，甲醛，乙酸。

5.1.3溶液配制

实验用水和溶液配制方法按照GB/T6682执行，具体配制方法见附录B。

5.1.4引物序列

引物序列如下：

——FecB-F1：AAAAGGTCGCTATGGGGAAG

——FecB-R1：CTAGGGTGGTGGACTTCAGG

2

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——GDF9-F2：GAATTGAACCTAGCCCACCC

——GDF9-R2：GCTAACCTCCAGCAGCACTC

样品采集

采集一月龄内待测羔羊的血液或耳组织，样本采集按照GB/T31016的要求执行。

DNA提取

DNA提取和检测按照NY/T1673要求执行。

PCR扩增

利用PCR仪进行PCR扩增，PCR反应体系为30μL，DNA模板：1.0μL，2×TaqPCRMasterMix：15

μL，上下游引物（10pmol/μL）各1.0μL，加双蒸水至30μL。FecB反应条件：95℃预变性5min；95℃

变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，进入35个循环；GDF9反应条件：95℃预变性5min；95℃

变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，进入35个循环；72℃延伸5min后4℃保存，产物用1%的琼脂

糖凝胶电泳检测完整性。电泳结果显示主带明亮清晰，无拖带，DNA完整性良好的PCR产物进行下一步

的鉴定，胶图见附录图A.1和附录图A.2。

上机测序

按照GB/T34265要求执行。

数据分析

从测序仪上导出原始数据，进行测序峰图的质控，并导出相应的序列文件及峰图。

基因判型

5.7.1依据峰图判定基因型，见附录A图A.3和图A.4。

5.7.2FecB基因型为CC、TC、TT；TT基因型为野生型纯合子，TC基因型为突变型杂合子，CC基因型

为突变型纯合子。

5.7.3GDF9基因型为AA、AG、GG，GG基因型为突变型纯合子，AG基因型为突变型杂合子，AA基因型

为突变型纯合子。

选种

5.8.1外貌特征

选留种羊的外貌特征应符合DB63/T1036要求。

5.8.2初生

公羔FecB和GDF9基因型均为CC和AA，初生重3.4kg以上；母羔FecB和GDF9基因型分别为CC、TC

和AA、AG，初生重3.0kg以上。

5.8.3断奶

4月龄断奶公羔体重20.0kg以上，母羔16.0kg以上。

5.8.4周岁

3

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按照DB63/T1036选留二级以上个体。

5.8.5成年

按照DB63/T1036选留二级以上个体。

基因型选配

5.9.1公羊（FecB基因型为CC，GDF9基因型AA）×母羊（FecB基因型为CC，TC，GDF9基因型为AA，

AG）。

5.9.2配种方法采用人工授精，按照DB63/T1606和DB63/T1876执行。

选育档案建立

档案管理按照DB63/T2249执行，初生羔羊信息登记表见附录C。

6追溯方法

根据选育档案进行追溯，包括但不限于以下内容：

a)基因判型记录

b)初生、断奶、周岁、成年鉴定记录

c)配种记录

4

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A

A

附录A

（资料性）

基因的鉴定与分型

基因扩增胶图见图A.1和图A.2。

图A.1FecB扩增电泳胶图图A.2GDF9扩增电泳胶图

基因型图见图A.3和图A.4。

图A.3FecB基因型示意图图A.4GDF9基因型示意图

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B

B

附录B

（资料性）

溶液的配制

B.11MTris-HCl(pH=8)

称取6.057gTris,加ddH2O40mL充分溶解,调pH=8（用HCl）最终定容至50mL，灭菌后4℃

保存。

B.20.5MEDTA（pH=8）

称取乙二胺四乙酸二钠（EDTA）9.306g，加ddH2O40mL充分溶解，调pH=8（用NaOH约1g）最

终定容至50mL，灭菌后4℃保存。

B.35MNaCl

称取NaCl29.25g加ddH2O定容至100mL，灭菌后4℃保存。

B.4裂解液（TES）

2.06mL（5MNaCl）、1mL（0.5MEDTA）、0.2mL（1MTris-HCl），加ddH2O定容至100mL；

B.510%SDS

称取10gSDS加80mLddH2O溶解HCl调pH=7.2，加ddH2O定容至100mL，灭菌后4℃保存。

B.6蛋白酶K（PK）

称取20mg蛋白酶K粉末，加入1ml缓冲液（终浓度20mg/ml），轻柔涡旋混匀，避免剧烈震荡,若溶

解困难，可置于37℃水浴孵育10-15分钟（避免高温）。

B.770%冰乙醇

用量筒量取70ml无水乙醇，倒入容器，再加入30ml蒸馏水，搅拌均匀，4℃保存。

B.850×TAE缓冲液制

Tris60.5g、冰乙酸14.275mL、0.5MEDTA(pH8.0)25mL，最后ddH2O定容至250mL。

B.91×TAE配制

10mL50×TAE加入490mLddH2O

B.101%浓度的琼脂糖凝胶

称取0.3g琼脂糖粉，加30mL1×TAE混匀，微波炉加热3遍至澄清透明，待温度降至40℃左右加入

0.5μL核酸染料。混匀倒入制胶槽，插入梳子（避免气泡产生）冷却至室温。

6

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C

C

附录C

（资料性）

初生羔羊信息登记表

初生羔羊登记信息见表C.1。

表C.1初生羔羊信息登记表