《动物源性制品中源性成分检测 实时荧光定量PCR法 第4部分：鸡DNA检测方法 》编制说明

2 2（一）工作简况 3（二）国家标准编制原则、主要内容 41、标准编制原则 52、确定国家标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等）及其确定依据（包括试验、统计数据） 5（三）试验验证的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效益、社会效益和生态效益 51、实验材料及仪器 52、实验方法 63、方法验证 5、经济与社会效益 （四）与国际、国外同类标准技术内容的对比情况，或与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况16（五）以国际标准为基础的起草情况，以及是否合规引用或者采用国际国外标准，并说明未采用国际标准的原因 16（六）与有关的现行法律、行政法规及相关标准的关系 （七）重大分歧意见的处理经过和依据 （八）涉及专利的有关说明 （九）实施国家标准的要求，以及织措施、技术措施、过渡期和实施日期建议等措施建议 （十）其他应予说明的事项 3本标准根据国家标准化管理委员会下达的2025年第一批推荐性国家标准计划及），名称为动物源性制品中源性成分检测实时荧光定量PCR法-第4部本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。造假和真实性问题（尤其是清真食品和生产供应链品经深加工后改变了肉的组织形态，在利益驱动下，有识不符的生产经营行为，将一种或多种低价格肉类扰乱市场秩序，鸡血冒充鸭血、猪鸡鸭肉冒充牛羊肉、成分而配料表未如实标识等事件在各地时有发生，这为鉴定标准繁多，方法不统一。该标准的建立对保障肉类该项标准为等同采用ISO国际标准，将IS基础设施与国际接轨的关键一步，也是保障贸易公平甘肃省商业科技研究所有限公司、苏州百源基因技术有4（1）2025年4月至2025年5月，标准起草单位组织相关技术人员对该标准项目进行了预研，课题组成员广泛收集了国内外相关标准、（3）2025年9月收到全国生化检测标准化技术委员会生检标[2025]31号文件以及该标委会转发的国标委综合国标委发〔2025〕34号《国批国家标准制修订计划的通知》立项文件，计划编号：202并对全国生化检测标准化技术委员会汇报了标准起草工作，就该标准（草案）进行了讨论，标准起后向全国生化检测标准化技术委员会提交了标准（12度34567895司司司在方法起草过程中，项目工作小组依据《GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》和《食品补充检验方法研制指南》的要求进行方并参照《RB/T032-2020基因扩增检测方法确认与验证指南》对方法学进行了考察。遵循出限和污染判定能够满足食品风险监测工作的需要，方法的准确性能够满足食品求。2、确定国家标准主要内容（如技术指标、参6苯酚-三氯甲烷-异戊醇（25:24:1，体积比）：将苯酚、三氯甲烷、异戊醇按25比24鼠、大鼠、小鼠、竹鼠、猫、狗、貂、鸽子、鹌鹑、草鱼和鲢鱼24个物种的新鲜肌肉组取各物种新鲜肌肉组织0.1g，用于DNA提取、PCR扩增和测序比对，不同物种测序比对结果见表2，比对结果显示用于特异性试验的动物肌肉组织样品均为单一源性，且为相应源表2特异性试验样品测序比对结果样品名称匹配序列号比对物种样品名称匹配序列号比对物种猪KT279760.1Susscrofa火鸡HQ122602.1Meleagrisgallopavo7黄牛KU891850.1Bostaurus海狸鼠JF318985.1Myocastorcoypus水牛KR009128.1Bubalusbubalis大鼠KT279110.1Rattusnorvegicus牦牛KX232527.1Bosgrunniens小鼠AP014941.1MusmusculusKJ789954.1Caprahircus竹鼠KC789518.1Rhizomyspruinosus绵羊KF677301.1Ovisaries猫KT626623.1Feliscatus鸡KX534431.1Gallusgallus狗KU253531.1Canislupusfamiliaris鸭EU755252.1Anasplatyrhynchos貂MT888755.1Neogalevison鹅KU211647.1Ansercygnoides鸽子KC811463.1Columbalivia驴JX312730.1Equushemionus鹌鹑KX712089.1Coturnixjaponica马KT757742.1Equuscaballus草鱼MN923203.1Ctenopharyngodonidella兔KT626640.1Oryctolaguscuniculus鲢鱼MT002870.1Hypophthalmichthysmolitrix提取的不同物种源性DNA作为特异性试验的DNA模板，用转评价各目标源性的特异性。检验过程分别设阳性对照、图1.鸡特异性试验结果检出鸡源性成分；而其他物种生鲜肉中均未出现荧光扩增曲线或Ct值≥45.0，表明未检出鸡源性成分。该结果表明方法中鸡源性成分的其他物种源性的特异性试验符合预期，方法的特选择我国不同区域的家鸡品种（三黄鸡、乌鸡、文），进行试验，评价该方法对各家鸡品种的兼容性。结果显示（图2）各家鸡品种均有鸡源性成分的典型扩增曲线，表明该方法对不同品种家鸡的兼8图2不同家鸡品种包容性扩增曲线表3不同家鸡品种鸡源性检测结果鸡品种三黄鸡乌鸡文昌鸡芦花鸡剑门关土鸡卢氏鸡海东鸡大骨鸡C23.68/23.823.79/23.823.63/23.724.23/24.124.84/24.626.88/26.824.53/24.725.29/25.2t74249437值对模板DNA进行倍比稀释，作为反应模板进行扩增，确定模板DNA浓度范围与Ct值的线性关系。参照《RB/T032-2020基因扩增检测方法确认与验证指南》的要求，同时。图3.鸡源性成分灵敏度检测扩增曲线及线性关系表4.鸡源性成分灵敏度检测Ct值DNA浓度ng/μLng/μL10-1ng/μL10-2ng/μL10-3ng/μL10-4ng/μL鸡源性成分24.2527.5430.9934.2837.0424.2127.7131.0434.7237.45无23.6827.4931.1734.2336.75无灵敏度试验结果鸡源性成分检测灵敏度：10-3ng/μL，线性范围：101-10-3ng/µl，相关系数（R2）：0.996，扩增效率：103.2%；能够满足方法对样品DNA浓度的要求。本方法在线性范围内均有良好的线性关系，相关表性的畜禽肉（生鲜鸡肉）、肉制品（鸡肉肉松）、畜品类型（鸡精）的检出限试验，同时还验证饲料中鸡源重复样，每个重复样2个平行反应（表5）。分均质混匀，制成1%样品，0.1%和0.01%样品依次同法制备。每个检出限样品取不同点为目标源性，以牛肉午餐肉（不含鸡肉）为混样基质进方法：分别将鸡精以临近检出限的3个梯度水平掺入牛肉粉调味料中，分别取1g鸡精和），料中，充分混合混匀，制成1%检出限样品，0.1%检出限样品依次同法制备。每个检出限饲料检出限制样方法同鸡精检出限制样方法，以鸡表5.不同源性成分生鲜肉混合肉样检出限扩增Ct值混合比例1%（w/w）混合比例0.1%（w/w）混合比例0.01%（w/w）浓度 L）检测结果浓度 L）检测结果浓度（ng/μL）检测结果鸡源性成分（生鲜鸡肉）20.527.7421.531.6020.034.4628.0331.4735.0827.8620.031.4634.4727.7831.5634.8525.027.9535.031.3530.034.6827.9231.3034.4222.027.9732.031.6621.034.1627.9131.5334.2829.528.4131.3625.034.2128.3331.3734.51鸡源性成分（鸡肉肉松）33.029.2134.035.4039.039.9029.0735.5139.6431.529.0438.035.0032.039.6728.8634.6539.4224.029.0230.534.9822.038.9029.1034.8639.3849.029.2540.535.4521.538.0929.0735.7438.2832.028.7825.534.3537.539.0828.7434.7538.16鸡源性成分（午餐肉罐29.531.8337.036.5933.539.8331.7136.0139.2027.031.4740.536.7432.039.1831.4336.1839.0824.531.6938.535.7534.042.1631.3435.6841.6031.531.5041.036.5528.541.8331.7636.0940.2343.531.8441.036.6825.541.1531.6136.2740.81鸡源性成分（鸡血）24.532.9522.035.5628.540.0132.5935.9728.032.6329.035.6724.041.6232.4535.1840.5222.032.4735.5729.539.6332.1035.6440.4823.532.3320.537.4526.043.1632.2436.5642.1927.032.8224.036.2621.539.0432.6136.10鸡源性成分（饲料）30.8928.536.9730.9034.1637.8930.8533.7624.037.4030.5834.3137.0630.5534.2937.2630.5334.1837.4430.6134.0126.038.5730.6434.2937.4731.0033.6021.537.2630.7033.6338.40混合比例10%（w/w）混合比例1%（w/w）混合比例0.1%（w/w）浓度 L）检测结果浓度 L）检测结果浓度（ng/μL）检测结果鸡源性成分（鸡精）36.535.3026.538.5727.5无34.7638.27无29.034.8321.021.0无34.8038.97无41.035.6224.541.0037.5无35.1038.78无39.034.7420.038.8235.5无35.3039.86无37.535.7827.041.0524.5无35.4040.16无检出限试验结果在不同代表性食品基质和饲料中，该方法对畜禽肉及副产品、肉制品、固态符合调味料、畜禽肉罐头的检出限能达到0.01%；对固态符合调味料的检出限能达到1%。当Ct值≤40.0时，能够满足方法对生鲜肉、加工肉、饲料的检出限为0.01%；当检测Ct值＜45.0时，能够满足方法对畜禽肉及副产品、肉制品、固态符合调味料、畜禽肉罐头的检出限为0.01%；可判定为检出相应源性成分。而对于深加工、高脂、高盐等食品，当检测Ct值＜45.0时，能够满足方法对固态符合调味料的检出限为1%。为确保检测结果的准确性，当40.0＜Ct值＜45.0时，需重复试验一次进行确认后，可判定为检出相应源性成分。），样品阳性；如再次扩增后Ct值仍≥45.0，则判定被检样品阴性。调理肉制品、腌腊肉制品、发酵肉制品、酱卤肉制等，还包括复合调味料、畜禽肉罐头、畜禽副产品动物油脂、方便食品（调味包）、速冻米面食表6适用性样品信息样品编样品名称产地样品编样品名称产地J01生鲜鸡肉J26午餐肉罐头四川遂宁J02鲜乌鸡肉江西泰和J27香辣鸡肉卷J03生鲜鸭肉J28贵阳鸡肉饼贵州贵阳J04生鲜鹅肉J29乌鸡卷切片J05剑门关土鸡J30烟熏鸡肉肠切片河南漯河J06文昌鸡海南文昌J31肥牛卷辽宁大连J07麻辣鸡胗J32羔羊肉卷内蒙古通辽J08J33J09鲜鸡血J34盒装鸭血J35牛肉丸广东汕头鲜鸭肠J36经典撒尿牛丸广东佛山食用鸡油J37包心鱼丸福建厦门鸡精J38牛肉风味丸鸡肉香辣酱贵州贵阳J39速冻鸡肉包河南新乡鸡汁调味料J40宠物狗粮鸡肉香肠河南漯河J41鲜蛋液鸡肉肉松J42蛋黄粉辣子鸡丁J43蛋糕咖喱鸡丁J44蛋挞J20麻辣鸭脖J45鸡肉味膏状香精J21手撕烤脖J46牛肉味膏状香精鸡肉干奥尔良鸡胸肉鸡米花香菇炖鸡面（料福建鸡肉干奥尔良鸡胸肉鸡米花香菇炖鸡面（料福建漳州成都青岛成都鸡骨粉鸡肉粉猪饲料鸡饲料成都成都成都成都J22J23J24J25J47J48J49J50包）包）表6.鸡源性成分适用性试验及方法比对结果鸡源性成分样品编号J01J02J03J04J05J06J07J08J09J10J11J12J13J14J15J16J17J18J19J20J21J22J23J24J25浓度(ng/μL)42.540.535.039.038.531.522.025.08.04.525.56.536.026.027.521.026.533.031.524.049.0（Ct值）19.03/18.8418.72/18.6419.93/19.7720.02/20.0618.65/18.5418.76/18.5719.48/19.4718.82/18.6019.78/19.6219.84/19.6221.85/21.9319.85/19.7919.02/19.0022.20/22.1319.86/19.7616.89/16.6616.72/16.4718.94/18.9620.11/20.0918.99/18.8218.80/18.6918.50/18.5516.00/16.09检测结果（Ct值）24.26/24.1924.05/23.92无/无无/无24.31/24.0324.07/23.9924.72/24.7536.61/35.7026.02/25.95无/无无/无35.03/35.1433.05/33.1025.54/25.5534.80/34.6025.42/25.6121.54/21.4020.71/20.7125.45/25.46无/无25.58/25.3621.30/21.3725.27/25.2025.22/25.1921.75/21.55GB/T38164比对结果16.31/16.4316.46/16.68无/无无/无16.41/16.3516.26/16.5417.51/17.6329.53/29.9218.21/18.35无/无无/无27.37/27.3725.22/25.1418.27/18.2827.74/27.7817.47/17.5314.04/13.7314.78/17.7718.31/18.40无/无19.63/19.0414.74/14.6118.09/17.8413.89/13.84结果判定检出检出未检出未检出检出检出检出检出检出未检出未检出检出检出检出检出检出检出检出检出未检出检出检出检出检出检出鸡源性成分J2642.019.06/18.8824.03/24.0216.86/16.88J2739.018.33/18.2826.29/27.4016.40/19.05J2832.018.33/18.3026.44/26.4219.12/19.12J2931.519.02/18.9424.98/24.9617.61/17.65J3027.518.46/18.2927.08/26.7819.16/19.06J3128.018.91/18.59无/无无/无J3220.018.57/18.29无/无无/无J3331.518.76/18.9124.61/24.7117.37/17.40J3425.519.05/18.87无/无无/无J3527.518.88/18.78无/无无/无J3633.018.86/18.9834.10/34.1827.30/27.22J3732.019.29/19.3124.77/25.0917.54/17.39J3838.520.04/19.9638.25/37.8730.82/30.61J3922.018.51/18.6035.49/35.1928.58/28.73J4027.015.17/15.2531.29/31.3324.67/24.59J4110.014.74/15.1540.48/39.8031.51/31.64J4223.014.99/14.9939.76/39.0632.23/32.21J439.517.11/17.1541.00/41.3134.38/34.35J449.017.10/17.0440.46/41.0133.89/34.03J4512.529.50/29.5538.01/38.7826.05/26.23J4614.522.34/22.31无/无无/无J4728.018.15/18.0024.94/24.8818.98/19.66J4832.014.22/13.6926.85/26.8220.01/19.71J4933.514.13/14.35无/无无/无J5027.015.02/15.1029.58/29.9122.65/22.65检出检出检出检出检出未检出未检出检出未检出未检出检出检出检出检出检出检出检出检出检出检出未检出检出检出未检出检出依据适用性试验结果，同时结合动物成分代于畜禽肉及副产品、肉制品、复合调味料、畜禽肉罐头油脂、方便食品、速冻米面制品、速冻调理肉制品、糕加剂、食品用香精）和饲料中鸡源性成分的检测。通过适用性试验，表明方法对不同食品基质样品和饲料能够性成分检测方法实时荧光PCR法》（简称GB/），对样品，用GB/T38164检测鸡源性成分，结果显示：本方法对样品的鸡源性成分