消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全

消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全第一页，共31页。消毒灭菌常用术语灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微生物的方法。

消毒（disinfection）：杀死物体上或环境中的病原微生物的方法。防腐（antisepsis）：防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。第二页，共31页。清洁（cleaning）：是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。无菌（asepsis）：无菌是无活菌的意思，多是灭菌的结果。无菌操作技术:防止细菌进入人体或其它物品的操作技术。第三页，共31页。物理方法化学方法第一节消毒灭菌的方法第四页，共31页。（一）热力灭菌法（干热+湿热）

1.干热灭菌法

焚烧炉适用：废弃的物品动物尸体一、物理消毒灭菌法

焚烧第五页，共31页。烤箱干烤用干烤灭菌箱，适用于高温下不变质，不损坏，不蒸发的物品。171℃1h160℃2h121℃16h第六页，共31页。烧灼

用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌

第七页，共31页。红外线辐射

是一种0.77-1000微米波长的电磁波,红外线为热效应杀菌,红外线加热速度快，但为表面照射，物体受热不均。用红外线烤箱灭菌，多用于医疗器械的灭菌。人受红外线照射较长，会感觉眼睛疲劳及头疼；长期照射会造成眼内损伤。因此，工作人员应戴防护镜。第八页，共31页。

巴氏消毒法(pasteurization):巴氏消毒法用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，而保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。主要应用于乳制品的消毒。方法有两种：①加热到61.1-62.8℃30分钟②71.7℃15-30秒。

2.湿热灭菌法

第九页，共31页。煮沸法煮沸温度为100℃，一般细菌繁殖体5分钟就杀死了，芽胞需要1-2小时才可被杀灭。

流动蒸气消毒法利用一个大气压下100℃的水蒸气进行消毒，细菌繁殖体15-30分钟杀灭。蒸笼具有类似的原理。间歇蒸气灭菌法利用反复多次的流动蒸气间歇加热以达到灭菌消毒的目的。第十页，共31页。高压蒸气灭菌法一种最有效的灭菌方法。灭菌的温度取决于蒸气的压力。在103.4kPa蒸气下，温度达到121.3℃，维持15-20分钟，可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。高压蒸汽灭菌器第十一页，共31页。

1.紫外线（265-266nm）

原理：其主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合成二聚体，干扰DNA的复制与转录。特点：紫外线的穿透力弱适用范围：因此一般用于手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒。注意：紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，应注意防护。

（二）辐射杀菌法

第十二页，共31页。紫外线灯管第十三页，共31页。2.电离辐射

常用γ射线(钴-60)和β射线。原理：

干扰代谢和DNA合成，破坏细胞膜、酶，产生H2O2、游离羟基杀菌。

第十四页，共31页。特点：

具有较高的能量与穿透力，可在常温下对不耐热的物品灭菌，故又称“冷灭菌”。

运用：可用于消毒不耐热的塑料注射器和导管等，亦能用于食品、药品、生物制品等的消毒灭菌。

第十五页，共31页。

微波是一种波长为1-1000mm的电磁波，频率较高；一般认为其杀菌机理除热效应以外;还有电磁共振效应。可穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质，但不能穿透金属；微波照射多用于食品加工。

3.微波（microwave）第十六页，共31页。

在医院中可用于检验室用品、非金属器械、无菌病室的食品、食具、药杯、及其它用品的消毒。 微波能杀灭各种微生物；可在1-5分钟内杀死各种细菌。微波长期照射可引起眼睛的晶状体混浊、睾丸损伤和神经功能紊乱等全身性反应，因此必须关好门后才开始操作。第十七页，共31页。1.滤菌器(filter）----直径是0.45um以下。

（三）滤过除菌法第十八页，共31页。2.空气除菌采用生物洁净技术

超净工作台层流室第十九页，共31页。（四）其他物理方法1、干燥与低温抑菌法盐或糖腌食物，冰箱冷冻食物2、超声波灭菌法每秒钟超过20,000次振动的声波不被人耳感受，称为超声波。利用在菌体内的空化作用、机械裂解杀菌。尤其是革兰阴性菌更为敏感，但不彻底，常有残留。第二十页，共31页。二、化学消毒灭菌法第二十一页，共31页。高效消毒剂原理适用范围含氯消毒剂（次氯酸钠、漂白粉）产生氯气、次氯酸新生态氧排泄物、物体表面、饮用水等过氧化物消毒剂（过氧化氢、过氧乙酸）（二氧化氯）氧化作用物体表面、皮肤空气净化剂醛类消毒剂（戊二醛、甲醛）对细菌蛋白和核酸的烷化作用高效空气过滤器消毒（对人有毒）环氧乙烷与醛类相同（一）高效消毒剂:可杀灭芽孢在内的微生物适用不耐高温，但必须进入人体内部的器械：内窥镜、塑料外科器械第二十二页，共31页。

含碘消毒剂：碘伏、碘酊氧化作用，但有刺激性醇类消毒剂乙醇、异丙醇脱细胞膜的脂类，并使菌体蛋白变性

70-75%乙醇作用最强（二）中效消毒剂：杀细菌繁殖体，真菌和大部分病毒第二十三页，共31页。（三）低效消毒剂：杀多数细菌繁殖体，不能杀芽孢和结核杆菌以及一些真菌和病毒新洁尔灭皮肤、粘膜、地面、物品表面（不与阴离子表面活性剂合用）洗必泰皮肤、粘膜、地面、物品表面（不与阴离子表面活性剂合用）高锰酸钾氧化作用皮肤、粘膜、蔬菜、水果的消毒第二十四页，共31页。第二节消毒灭菌的运用1、高危器械物品用时需进入无菌组织的物品。所有这些物品都应该灭菌。2、中危器械物品用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采用消毒即可。3、低危器械物品只接触未损伤皮肤，不接触黏膜和无菌组织的物品。一般用后清洗、消毒即可。4、快速周转的医疗器械瞬时灭菌，高效消毒剂处理，微波灭菌等

（一）、医疗器械物品的消毒灭菌第二十五页，共31页。1.物理消毒法

①紫外线照射最常用；

②滤过除菌：2．化学消毒法

包括化学消毒剂喷雾和熏蒸：

①过氧乙酸喷雾、熏蒸；

②过氧化氢喷雾；

③二氧化氯溶液喷洒；

④中草药点燃烟熏。（二）、室内空气消毒灭菌第二十六页，共31页。（三）手和皮肤的消毒

用肥皂和流动水经常并正确洗手

病原微生物污染时应用消毒剂消毒。乙醇，碘伏（四）黏膜的消毒

口腔粘膜可用3%的双氧水，腔道冲洗用1/1000的高锰酸钾。第二十七页，共31页。（五）病人排泄物与分泌物的消毒灭菌

50g/L的次氯酸钠、漂白粉处理小时（六）病人污染物品的消毒

（七）饮水的消毒

氯气或是漂白粉消毒（八）环境的消毒

第二十八页，共31页。第三节影响消毒灭菌效果的因素1、微生物的种类

微生物对消毒灭菌敏感性由高到低一般是：真菌＜细菌繁殖体＜有包膜病毒＜无包膜病毒＜分枝杆菌＜细菌芽孢。2、微生物的物理状态

在恶劣环境生长的细菌的抵抗力强于在营养丰富的环境生长的细菌3、微生物的数量

细菌越多，消毒时间越长，因此，消毒前的清洁很重要第二十九页，共31页。4、消毒剂性质