甲型肝炎灭活疫苗标准HS20010016

PAGE1PAGE5甲型肝炎灭活疫苗(预充式)质量标准InactivatedHepatitisAVirusVaccineJS200200611、外观检查可分层，上清液透明，摇均后应为均匀乳白色。2、装量用已标定的刻度吸管量取。儿童剂量应不低于0.50ml,成人剂量应不低于1.00ml。3、pH值按《中国生物制品规程》(2000年版)pH测定方法进行，测定疫苗混合物(不少于5支疫苗合并在一起)，pH在200C时的范围为6.8-7.5。4、无菌试验按《中国生物制品规程》(2000年版)通则《生物制品无菌试验规程》进行。结果应为阴性。5、异常毒性试验按《中国生物制品规程》(2000年版)通则《生物制品异常毒性试验规程》进行。到期动物应健在，体重增加。6、铝含量的测定按《中国生物制品规程》(2000年版)中《氢氧化铝含量的测定方法》进行。结果应在0.35-0.65mg/ml之间。7、残余甲醛含量的测定按《中国生物制品规程》(2000年版)《残余甲醛含量的测定方法》进行。结果应100g/ml。8、内毒素含量的测定按《中国药典》(2000年版附录)进行。结果应2.00EU/ml。9、2-苯氧乙醇含量的测定按《2-苯氧乙醇含量的测定》(附录1)方法进行。结果应在4.25-5.75mg/ml之间。10、鉴别试验按《鉴别试验》(附录2)方法进行。疫苗解离后与特定的甲肝抗体中和，证明含有甲肝抗原。11、相对效力试验按《相对效力试验》(附录3)方法进行。疫苗(解离抗原后)中和甲肝与参比苗的比值为0.85-1.30。规格1440EL.U/ml(成人剂量)；720EL.U/0.5ml(儿童剂量)；8升/罐（进口分装用）生产国别及生产厂比利时葛兰素史克公司效期2-80C条件下保存，有效期3年。质量复核单位中国药品生物制品检定所甲型肝炎灭活疫苗质量标准起草说明本产品用于预防甲型肝炎，是由比利时葛兰素史克生物技术公司生产(申请编号：HS20010016)、葛兰素史克(中国)投资有限公司申报的。此疫苗为纯化灭活疫苗，其质量标准目前我国尚未收载。拟定此质量标准的主要依据《中国生物制品规程》(2000年版)同类疫苗及厂家标准，此质量标准变化主要有：一、增加的项目主要有：1、甲肝病毒抗原含量；2、铝含量的测定；3、效力试验；4、2-苯氧乙醇含量5、游离甲醛含量测定；6、鉴别试验；7、pH测定。二、由于该疫苗是灭活疫苗，与我国《生物制品规程》(2000年版)相比此质量标准中取消的项目有：1、病毒滴定；2、热稳定性试验；3、牛血清蛋白残留量测定。三、需要修订的检定项目：疫苗效力试验：所有国外生产厂家均以相对效力试验表示，即用待检疫苗与参考疫苗的比值表示，今后检定拟采用此方法。特此说明。2002年5月22日附录2甲肝抗原鉴别试验方法一、实验步骤：1、用包被缓冲液稀释纯化HAV-IgG(1：300)包被微孔板，100l/孔，40C过夜；2、洗液洗三次，设一孔空白对照，三孔阴性对照，二孔阳性对照，在相应孔中加连续稀释的参考疫苗解离后甲肝抗原和待测样品20l/孔，过夜；3、用洗液洗三次，加入50l/孔酶标记HAV-IgG，置400C2小时。4、洗液洗四次，加入显色剂100l/孔，置室温15分钟，加终止剂50l/孔。5、比色用酶标仪(波长492nm)测定OD值。二、结果计算：1、阈值计算阈值=阴性对照均值×2.12、结果判定阈值为阳性，阈值为阴性。3、计算含量按下列方法进行：将测出的参考标准及样品的OD均值乘以1000后记入下表：方法：将待测样品与特异抗体中和，用ELISA双抗体夹心法测中和前后的甲肝抗原。材料：纯化HAV-IgG：由本室纯化，效价1：300酶标记HAV-IgG：来源本室，效价1：1000中和抗体：甲肝免疫球蛋白参考品(WHO100mIU/ml)实验步骤：用包被缓冲液稀释纯化HAV-IgG(1：300)包被微孔板，100l/孔，40C过夜；每批待测抗原与抗体(1：1)370C中和1小时用洗液洗三次，设一孔空白对照，三孔阴性对照，二孔阳性对照及四孔细胞对照，在相应孔中加中和前和中和后待测样品20l/孔，另设中和用免疫球蛋白对照两孔，过夜；用洗液洗三次，加入50l/孔酶标记HAV-IgG，置400C2小时。洗液洗四次，加入显色剂100l/孔，置室温15分钟，加终止剂50l/孔。比色；用酶标仪(波长492nm)测定OD值。计算结果：阈值计算阈值＝细胞对照均值×2.1结果判定阈值为阳性，阈值为阴性。待测样品应中和前为阳性，中和后为阴性，证明其确为甲肝抗原。附录3甲肝抗原的定量(相对效力试验)测定方法：将已知含量的参考疫苗解离后甲肝抗原与待测样品用ELISA双抗体夹心法测定后计算含量：材料：纯化HAV-IgG:由本室纯化，效价1：300酶标记HAV-IgG：来源本室，效价1：1000已知含量的疫苗参考品稀释度参考标准OD1000(T)样品OD1000(S)1：211：221：231：241：25T5T4T3T2T1S5S4S3S2S1计算公式：含量Log-1V/WLog1.5V=0.2(T1+T2+T3+T4+T5)-0.2(S1+S2+S3+S4+S5)W=0.1(T5-T1+S5-S1)+(T4-T2+S4-S2)含量Log-1V/WLog1.5结果:批号含量该批疫苗的含量除以参考苗的已知含量即为相对效力试验的比值。附录12-苯氧乙醇含量的测定方法用高压液相层析(HPLC)方法测定2-苯氧乙醇。用已知含量的2-苯氧乙醇作为标准，通过与样品在HPLCUV-270nm吸收峰的比较计算样品中的2-苯氧乙醇含量。试验方法：1、标准品制备：量取2-苯氧乙醇标准品50mg于10ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容后，取1ml至10ml容量瓶中，CH3CN定容，0.45um滤膜过滤后上样。2、样品制备：取1ml样品于10ml容量瓶中，CH3CN定容，离心并用0.45um滤膜过滤后上样。3、实验条件：高效液相色谱UV-270nm检测柱：microBondap