2013薄板层析法鉴定四环素纯度.ppt

1、上课前，每组清洁3块玻璃板、1个研钵和1个研磨棒，用去离子水冲洗干净，放入实验室后面的烘箱中烘干，并将研钵倒置！按组号登录。生物分离工程基础实验，指导老师：龚晓燕张平绣，生物分离工程实验一，基础实验：实验内容和时间，薄层色谱法检测四环素纯度的实验一：星期一，星期四，第11周，第2课：星期一，第12周，两相萃取相图制备实验一：星期四，第14周，第2课：第14周，第14周，第1课：第15周，第14周，第1课：第15周，第1课：第15周，第2周，第2课：第11周， 第16周：考试方法、出题和操作实验报告：实验结果预习报告、讨论和思考问题、用薄层色谱法鉴别四环素。熟悉薄层色谱法的操作过程。 用薄层色谱

2、法研究四环素产品的纯度。(1)色谱法：色谱法是一种分离技术。任何色谱都有两个相，固定相是固定的，流动相相对于固定相移动。不同的物质在两相之间有不同的分布，并随着流动相以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。固定相：固体或液体(固定在载体上)流动相：液体、气体或超临界流体流经固定相。(2)实验原理；(2)色谱方法：根据机理，可分为：分配色谱、吸附色谱、凝胶色谱、离子交换色谱、亲和色谱；(2)实验原理，根据色谱方法：纸色谱、薄层色谱和(3)薄层色谱(TLC)，它利用不同溶质组分在固定相和流动相中的不同分配系数，并在铺展各层时形成以不同速度移动的区域来实现分离。溶质容易在固定相中分布。溶质容易

3、在流动相中分布。第二，实验原理，移动速度慢。移动速度很快。延迟因子Rf值用于表征每个部件的差异运动：0 Rf 1，合适的范围是0.20.8。第二，实验原理，溶质移动距离与流动相同时移动距离相同，Rf=1。第二，实验原理，固定相：水和各种水溶液，甲酰胺，低级醇等。流动相(铺展剂):不溶于水(或微溶于水)的有机溶剂。薄层色谱：载体：为中性多孔粉末，无吸附活性，流动相自由通过硅藻土/纤维素/硅胶/氧化铝等。亲水物质可以储存水。本实验使用硅藻土。本实验是在硅藻土上吸附乙二胺四乙酸缓冲溶液。在本实验中，丙酮：乙酸乙酯：氯仿=3:133601。(4)四环素是四环素的广谱抗生素，由于发酵或储存不当，导致四环

4、素的抗菌效果差，毒性强。四环素易溶于流动相液体，而微分四环素易溶于固定相液体。氢化四苯环(含共轭双键，具有紫外吸收和荧光能力)；2.实验原理、本实验所需设备、玻璃平板砂浆平衡移液管硅藻土乙二胺四乙酸缓冲液饱和氯化铵筒架、铺展剂铺展筒取样毛细管刀和直尺紫外灯氨水；3.主要实验设备和试剂；(1)溶液制备(配置)硅藻土处理：取50克硅藻土进行薄层层析，加入25毫升浓盐酸和250毫升水，搅拌煮沸10分钟，冷却，过滤，用蒸馏水洗涤至洗涤液对刚果红指示剂不显色，然后用流动相液体洗涤，过滤，在105烘箱中干燥。乙二胺四乙酸缓冲液(固定相):在40毫升甘油中加入10毫升聚乙二醇400，摇匀得到20%(体积比)

5、聚乙二醇400甘油溶液(保湿)，然后加入950毫升pH7.0.1的乙二胺四乙酸(螯合)溶液，混匀得到乙二胺四乙酸缓冲液。展开剂(流动相):取5ml乙二胺四乙酸溶液，pH 7，缓慢加入200ml(丙酮：氯仿3360乙酸乙酯=:133601)，然后倒入展开剂缸中。样品制备：称取100毫克成品四环素a实验方法：硅藻土1g、研钵、乙二胺四乙酸缓冲液2ml、蒸馏水0.5cm、研磨均匀(颗粒适中，无气泡)、放入饱和氯化铵缸中，室温放置，无明显水渍，均匀涂抹。15厘米、0.5厘米、甚至没有气泡和裂缝，毛细管取样、取样点高于液面、溶质移动距离、流动相同时移动距离、Rf=、操作点、制板：在研钵中研磨应缓慢，注意不要产生气泡。将薄板移入充满氯化铵的罐中时，不应太干或太湿，最好没有明显的水渍。太干和传播太快，导致拖尾；太湿，太慢。取样：取样时，尽量使取样点的直径变小。取样后，在溶剂蒸发后，移动到涂抹缸中，不要使用吹风机。铺展层：注意铺展剂浸入薄层一端约0.5厘米，不能浸入样品斑点。色谱柱的盖子应密封，以减少溶剂挥发。实验结果和讨论：(1)四环素硅藻土薄层色谱属于什么样的色谱机理？什么是固定相和流动相？为了使色谱效果好(无拖尾，分离好)，操作中应注意的事项。(2)实验结果和讨论：在纸上画出斑点的图案，测量每个斑点成分的距离，计算Rf值。分析实验结果。总结这次实验成败的经验教训。5.思考