临床病原体检测剖析.ppt

1、临床病原体检查，云南省第一人民医院毛小琴，教学目的了解细菌药剂耐受力的发生反应历程，了解临床感染常见病原体检查方法，掌握临床常见病原体标本采集与运输，掌握主要教学内容； 感染的变迁以及目前感染状况细菌的药剂耐受力及药剂耐受力反应历程临床所关注的药剂耐受力菌监测报告临床标本采集注意事项及细菌培养报告制度感染的变迁和当前感染状况、疾病谱的变迁(以g染色阳性菌为主的g染色阴性菌)新的传染疾病不断出现(如、 嗜肺结账台军团菌、SARS冠状细小病毒)一些已灭绝旧传染疾病的死灰复燃(如梅毒、结核等)多药耐药性株的出现医院感染和条件致病菌感染增加，一直接涂片显微镜检查(最简单、快速、直观)致病微生物的分离培

2、养和鉴定(确诊方法) 病原体专一性抗原或抗体检测(如沙门氏菌属属血清凝集、肥达试验等)分子生物学方法(如基因探测技术和PCR技术)其他方法(如动物(抗生素作用部位缺乏；抗生素运输机制缺乏；具有耐受力的基因； 拥有天然屏障)-获得性耐药性(后天获得)的主要途径是什么(自我变异和遗传交换)、理化反应历程(要点) 生灭活酶催化剂或钝化酶催化剂-药效作用靶位的变化-膜渗透性变化-有源外排作用-抗生素抑制旁路-生物被膜存在细菌的药物耐受力监测和流行病学调查药物耐受力反应历程研究的重要手段、直接目的、药物复盖检查的方法-纸片扩散法(定性检查)，如最常用的KB法稀释一些重要概念药物敏感性试验简称药物敏感性试

3、验，是检测细菌对抗微生物剂物易感性(或耐药性)的体外试验。 警告：体外试验结果与体内效果不一定一致。 MIC :最低抗菌浓度，即抑制细菌生长所需的最低药物浓度。 MIC90 :抑制试验菌株90%生长所需的最低药物浓度。 mic50:50%试验抑制菌株生长所需的最低药物浓度。 敏感(susceptible，S) -指用普通接触剂量抗微生物剂在体内可达到的浓度可以治愈细菌感染，除禁忌症外。 联中介变量(intermediate，I) -指抗微生物剂对试验菌株的MIC值接近血液和组织中可达到的药物浓度，但抗菌速度低于敏感菌株。 耐药性(resistant，R) -这意味着所允许的最大接触剂量抗微生物

4、剂在组织或血液中的浓度仍不能达到抗菌目的。 临床常见药物耐受力监测甲氧苄啶耐受力金黄色葡萄球菌(MRSA )的筛选测定-目前仅用于导致医院感染的重要致病菌-定义和判断标准：超广谱b内酰胺酶(ESBL )检测-目前仅用于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌读片方法和标准(用CLSI-2010实施)-ESBL阳性菌株的药物易感性结果处理青霉素类、头孢菌素类和阿摩尼亚曲南应当作为药物耐受力报道，不管体外药物易感性结果敏感还是药物耐受力，均采用高水平氨基糖苷类药物耐受力(HLAR ) 和万古霉素耐受力肠球菌的筛选-目的和意义：判断联合用药的可行性和效果-检测药物： GN、链霉素、万古霉素(要用稀释法测定MIC值)

5、-检测方法：筛选测定青霉素耐受力肺炎链球菌(PRSP )- -目的和意义：筛选此类肺炎链球菌-筛分法： 1ug苯并三氮唑青霉素纸片的筛选-判定方法：抗菌圈为20mm，试验菌对青霉素g敏感，抗菌圈为19mm，提示该菌对青霉耐受力和中度敏感，需要用稀释法和E-test对MIC值进行一头地测定。 四、临床标本的采集和运输(重点把握)、血液标本采血时间节点：尽量在应用抗微生物剂前采集。 最好的时间节点是在寒冷和体温急剧上升之前预测。 (牛鼻子！ 采集标本数：建议每隔2次，优选3次，每次约1小时采集一次。 血液量：成人10ml； 小盆友2-5ml乳婴儿子和新生儿最多可摄取1-2ml。 每次采集血液时注入

6、两个血培养瓶(即好氧瓶和厌氧瓶)。 如果没有血培养瓶，放入含有抗凝血剂聚茴香脑金属钍(SPS )的无菌瓶和试管进行检查。 皮肤消毒：静脉穿刺前必须用抑菌剂仔细消毒穿刺部位(非常重要！ 必须使用，等待皮肤的消毒剂完全挥发。 可以使用含有2%碘元素鸡肉、10%吡比碘元素、70%酒精、0.5%氯元素的确定的70%酒精。 注意事项：每人需要一针！ 如果患者在输液中，不能从输液管采血，不能从离输血部位尽可能远的地方采血。 将血液用注射针插入培养瓶之前，先取下培养瓶的外盖，再用消毒剂消毒瓶盖，注入后立即混合！ 一次采血进行多次检查，必须先采血(可以直接注入血培养瓶)。 总原则：尽量避免培养前的标本污染！

7、脑脊液标本-采集：内科医生进行腰穿或脑室穿刺。 -采集量：成人2-5ml； 小盆友2-5ml乳婴儿子或新生儿1-2ml。 注意事项：标本必须放入无菌试管，标本必须立即保温检查或在床边接种。 尿液标本-无菌操作(带盖无菌容器培养所需尿液必须留中段尿-采集前清洗外阴(特别是女性和小盆友)的方法：洗手后用无菌纱布和温肥皂水从前向后清洗外阴。 注意：不要使用消毒剂！ 女性对于必须避开月经期的厌氧菌培养用膀胱穿刺法收集，用无菌厌氧小瓶运送。 我会尽快发送检查。 最多不到一个小时！ 上呼吸道标本理论上，标本的采集应由受过专科医师或专业训练的人进行。 方法患者面对光源，舌压板舌下，用无菌棉拭子用力擦拭双侧扁

8、桃体、咽后壁和其他炎症区域。 注意事项：不能擦拭舌头和脸颊粘膜时，最好用2个雨刮器擦拭相同的区域，一个用于涂膜检查，另一个用于微生物培养。 下呼吸道标本-方法：采集前口腔清洁，咳嗽较强，收集深部痰的医生也可采集支气管清扫液和支气管刷片进行检查。 注意事项：标本无菌，请收集到带盖的容器(有商品化品)中，不要混入唾液！ 取样前清洁口腔取高质量痰液标本是一项技术，不容忽视！ 泌尿生殖道标本-尿道标本：将细径棉拭子或无菌接种环装入尿道3-4cm，轻轻转动取出，脓性分泌物可直接收集于棉拭子或接种环。 肛门直肠标本：需将雨刮器放入肛门内采集4-5cm。前列腺液标本：马杀鸡后采集-女性生殖道标本：均应在窥视

9、器行盆腔检查时采集。 应不同检验项目要求采集相应标本(由专科医师取样)，粪便标本采集时间：拉肚子早期，病原体量大时，以应用抗微生物剂前采集为宜。 注意事项：请采集早上的标本，中午前送到实验室(送检时间不超过2h，否则用专用的送培养基送检)。 成型应在不合格标本霍乱或其他弧菌检验用碱性蛋白胨水培养基中检验，采集新鲜粪便，最好是标本最低5g，采集带血、黏液或脓液部分，避免尿液混入。 选择带防漏罩的合适容器，粪便不排出，但检查或运输费时间时，直肠擦拭子标本、脓性渗出物、创伤和脓肿标本脓肿：可用注射器和穿刺针尽可能多地吸引脓液，无菌操作将脓液放入无菌容器。 没有无菌容器，可暂时保存在注射器中，盖上针帽送入实验室。 (眼睛等特殊部位，可用棉拭子取)-裂伤、贯通伤、术后创面、烧伤和褥疮溃疡的感染：目前虽然没有