课题2　月季的花药培养 (3)

1、课题2 月季的花药培养,花的基本结构,(一)被子植物的花粉发育,一、基础知识,1. 花的基本结构,花,花托,花萼,花瓣,花蕊,雄蕊,雌蕊,花丝,花药,柱头,子房(胚珠),花柱,2、请说出被子植物雄蕊的结构？,雄蕊,花丝,花药,多数被子植物的花药由4个花粉囊组成，花粉囊外由囊壁包围，内生许多花粉粒。,3、请说出被子植物花粉的发育过程？,当花粉囊的壁组织逐步发育分化时，会形成大量的花粉母细胞（小孢子母细胞）。,1花粉母细胞,减数分裂,4个小孢子,有丝分裂,4个花粉管细胞核,4个生殖细胞核,形成,8个精子,形成,营养细胞,生殖细胞,有分,注意： 二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞

2、核。（精子在花粉管中形成） 三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。 两个精子和一个营养核的基因型相同。,产生花粉植株的途径有哪几种？,（二）产生花粉植株的途径,花粉,花粉,胚状体,愈伤 组织,从芽,从芽,生根,移栽,再分化,诱导,脱分化,途径1：花粉通过胚状体阶段发育为植株； 途径2：花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。,是否只有花药的培养才能得到胚状体？,人工种子,人工种子又称人造种子、合成种子或无性种子，就是将组织培养所产生的体细胞胚（由体细胞经脱分化形成的）、不定芽、顶芽、腋芽或小鳞

3、茎等繁殖体，包裹在能提供营养的胶囊（人造胚乳）里，再在外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜（人造种皮），造成一种类似种子的结构，能在一定的条件下萌发生长，形成完整植株。,某些体细胞可培养成与合子发育成的胚非常相似的胚状体结构。具有胚芽、胚根、胚轴，就像一颗种子。,（三）影响花药培养的因素,主要的影响因素：材料的选择与培养基的组成 1、不同种植物的诱导成功率很不相同。 2、同种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。 （1）同一植物不同的花期。花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般，月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。,影响花药培养的因素,（2）花粉

4、发育时期：一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧时，花药培养成功率最高。选择完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒；花瓣松动，菌多，消毒困难。 3、此外，亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度对诱导成功率都有一定的影响。,二、实验操作,材料的选取,材料的消毒,接种和培养,（一）材料的选取 1、选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 2、确定花粉发育时期最常用方法：醋酸洋红法。 某些植物的花粉细胞核不易着色，则需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 注：花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，

5、染色体容易被染色。通过染色，可以确定细胞核为单核期还是双核期，是单核居中期还是单核靠边期。一般单核靠边期的花药培养成功率最高。,为了挑选到单核期的花药，通常选择什么样的花？为什么？,选择完全未开放的花蕾。,为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,花花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料消毒带来困难。,（二）材料的消毒,1、花蕾用体积比为70%的酒精浸泡30秒； 2、无菌水清洗； 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分； 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2-4分钟（也可用质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）； 5、无菌水冲洗3-5次。 用于培养的花药，实际上多数未熟，由于它的外面

6、有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。,（三）接种和培养,1、接种时为什么要尽量不损伤花药？,灭菌后的花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，彻底去除花丝后将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织。,2、接种时为什么要彻底去除花丝？,因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。,（三）接种和培养,3、试管苗形成之前是否需要光照？长出愈伤组织或胚状体后怎样处理，为什么？,不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。,一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快