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文档简介
1、实验11:植物组织培养,组织培养的概念:取一些植物组织,如叶、芽、根、花瓣或花粉,在无菌条件下,接种在三角瓶中的琼脂培养基上,并给予一定的温度和光照,使其产生愈伤组织并发芽生根。外植体、超净工作台和植物组织培养的原理是什么?植物细胞具有全能性,也就是说,植物的每一个活细胞都具有遗传全能性,因此它有可能发育成完整的植物。植物组织培养的基本过程:植物组织培养条件、含有所有营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适宜的酸碱度、适时的光照等。细胞分裂素/生长素,高,诱导芽形成,大致相等,愈伤组织继续未分化生长,低,诱导根形成,实验中使用的生长素是人工合成的萘乙酸(NAA),其需要用少量0.1摩尔
2、/升氢氧化钠溶液溶解,而细胞分裂素是人工合成的苄基腺嘌呤(BA),其需要用少量0.1摩尔/升盐酸溶解。植物中所有的天然激素都有相应的酶来分解它们,所以天然激素在植物中的作用和存在时间较短,而合成激素在植物中没有相应的酶,所以它们的作用和存在时间较长,效果明显。所需培养基类型:质谱培养基:由主要元素、微量元素和有机成分组成。蔗糖:提供碳源并维持渗透压。请看本书第60页的具体公式。发芽培养基:含钡溶液的培养基中含有含NAA溶液的蔗糖琼脂,钡比NAA多,诱导芽生长和丛生苗生长。MS培养基含含NAA溶液的蔗糖琼脂,NAA大于BA,诱导生根,生根培养基:在灭菌锅内灭菌20min,压力1kg,操作过程,1
3、。取外植体,将无菌苗切成段,每段至少一片叶子。如果用天然茎进行组织培养,一段茎可以用70%乙醇浸泡10分钟,然后用5%次氯酸钠溶液浸泡5分钟,再用5%次氯酸钠溶液浸泡5分钟,最后用无菌水在超净台上清洗。2、芽培养,芽培养基,分成2-3段,将茎插入培养基中,用密封膜覆盖。荧光灯下温度保持在1825,日光灯不低于14.5小时。生根培养,23周后,在无菌条件下将丛生苗转移到生根培养基中,并在上述条件下继续培养。4.适应锻炼,将幼苗转移到泥炭土或蛭石中,用玻璃罩或塑料布保持湿度在80以上,23天后打开,逐渐降低湿度进行锻炼,直到玻璃罩完全打开并处于自然湿度下。5.如果你转移到土壤中种植,你就能长成植物并开花。如果你在自然界采集植物样本进行组织培养,你认为应该采取什么措施来保证样本不被污染?(5)操作快捷灵活;(3)操作人员严格遵守无菌操作规程;(1)防止外植体带菌;(2)确保培养基
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