医学ppt课件病原性球菌及检验

对人有致病性的球菌主要引起化脓性 炎症 ,又称 化脓性球菌 。 G+C： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌 G-C： 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他 布兰汉菌 1. 了解病原性球菌的概念及种类。 2. 熟悉 常见病原性球菌 的主要生物学特 性、 致病性和免疫性。 3. 掌握 葡萄球菌、链球菌、 脑膜炎奈瑟 菌和淋病奈瑟菌 的 检验程序和检验方法。 学习目的与要求 第一节第一节 葡萄球菌属葡萄球菌属 (Staphylococcus) （一）形态与染色 G+， 球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。 一、一、 生生 物物 学学 特特 性性 （ 二）培养特性 营养 ：要求不高，耐盐。 液体 ：均匀浑浊生长 普通琼脂平板 ： 血液琼脂平板 ： 高盐甘露醇平板 ：金黄色葡萄球菌为 淡橙黄色菌落 ； 其他葡萄球菌为 白色菌落 。 （ 三）生化反应 活泼 分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。 (如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇） 触酶（） （区别于链球菌属） （ 四）抗原构造 、 蛋白抗原（） 、 多糖抗原 金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸 （检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断） 凝固酶（）：甘油磷壁酸 （ 五）分类 : 个种及亚种 、 按色素分类 ：金、白、柠 、 按凝固酶分类 ： 凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌 、 按噬菌体分类 ：金葡菌分为 5群 26型 4. 据色素、生化反应分： 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌 三种葡萄球菌的主要性状 性状 金黄色葡萄球菌 表 皮葡萄球菌 腐 生葡萄球菌 色 素 金黄色 白色 白色或 柠 檬色 血 浆 凝固 酶 + 溶血素 + 耐 热 核酸 酶 + 甘露醇 + SPA + 致病性 强 弱 无 （ 六）抵抗力 无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸 、升汞、龙胆紫敏感。 易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌（ MRSA）。 MRSA常呈多重 耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏 感率分别为 1.3%、 3%及 14%。 长期住院 、 反复使用各种广谱抗菌药物 、 烧伤 或 有伤口的病人 及 与 MRSA定植或感染的病人接触 都 是造成院内 MRSA流行的危险因素。 MRSA定植或感染 的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源 。 MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起 院内流行的主要来源 。 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ MRSA） 二、致病性和免疫性二、致病性和免疫性 (一 )致病物质 金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。 1 血浆凝固酶（ coagulase)： 分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。 鉴别 金黄色 葡萄球菌的 重要 指标。 2 葡萄球菌溶血素（ staphylolysin） 3杀白细胞素（ leukocidin） 4 肠毒素（ enterotoxin）： （ A、 B、 C1、 C2、 C3、 D、 E、 G、 H 9个血清 型） 5表皮剥脱毒素（ exfoliative toxin） 6. 毒性休克综合征毒素 1（ toxic shock syndrome toxin 1, TSST1） （二）所致疾病 1侵袭性疾病： （ 1） 皮肤软组织感染 特点：病灶局限且脓汁粘稠 （ 2） 内脏器官感染 （ 3） 全身感染 （ 4） 尿路感染 2毒素性疾病 （ 1） 食物中毒 （ 2） 烫伤样皮肤综合征 由表皮剥脱毒素引起 。 （ 3） 毒性休克综合征 由 TSST1引起 （ 4） 假膜性肠炎 人类凝固酶阴性葡萄球菌（ CNS） 感染中 以 表皮葡萄球菌 的感染最为常见。 CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染 ，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为 医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换 人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等 亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。 3、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性 三、微 生 物 学 检 验 n （一）标本采集 n （二）检验程序 n （三）检验方法 三、微 生 物 学 检 验 （一）标本采集 根据病情采集标本 种类 ：脓液、伤口分泌物、穿刺液、 血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。 注意 ：无菌操作，避免污染。 （二）葡萄球菌检验程序 脓液、咽拭子、穿刺液 尿液、痰液 脑脊液 血液 粪便、呕吐 物 直接涂片染色 增菌培养分离培养 （血平板） 分离培养 （高盐甘露醇 平板） 取可疑菌落 鉴定试验 药敏试验 涂片染色 血浆凝固酶 耐热核酸酶 其他鉴定试验 报 告 初 报 （三）检验方法 1、直接涂片 适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液） 伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等 初步报告： “查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为 葡萄球菌 ” 或： “查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌 ” 2、分离培养 50ml葡萄糖肉汤（增菌） 浑浊无菌（ 7天 ） 报告： 无菌生长 脑脊液 、脓液、 穿刺液、咽拭、 尿液 血平板 血液标本 5ml 粪便、 呕吐物 高盐甘露 醇平板 （三）检验方法 3、鉴定试验 （ 1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（ +） （ 2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（ +） （ 3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（ +） （）肠毒素测定： 金黄色葡萄球菌产生 （ 5） SPA检测： 金黄色葡萄球菌 （ 6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定 （ 7） API葡萄球菌鉴定试剂盒 （四）结果评价和报告 n 1、 金黄色葡萄球菌 ：无论任何标本中分离到 均 应鉴定并报告临床。 n 2、 表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌 ：从输液导 管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌 。 n 3、 尿培养计数 ： 103-104为阳性菌尿标准。 n 4、 其他凝固酶阴性葡萄球菌 ：引起感染流行 或治疗失败时，应鉴定到种。 n 5、 金黄色葡萄球菌（ MRSA)： 头孢菌素类抗 生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因 体内试验已证实 MRSA对该类抗生素耐药。 第二节第二节 链球菌属链球菌属 (Streptococcus) 一、一、 链链 球球 菌菌 一、生一、生 物物 学学 特特 性性 （一）形态与染色 G+，球形或椭 圆形，呈链状排列 ，无鞭毛、无芽胞 ，有荚膜。 一、生一、生 物物 学学 特特 性性 （ 二）培养特性 条件 ：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少 数专性厌氧。 液体 ：沉淀生长（絮状或颗粒状）。 普通琼脂平板 ：不生长。 血液琼脂平板 ： （ 三）生化反应 活泼 分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。 菊糖（ -） 胆汁溶菌试验（ -） optochin敏感试验（ -） 触酶（ -） （区别于葡萄球菌属） （区别甲链与肺链） （ 四）抗原构造 、 多糖抗原（ C抗原） ： 群特异性。 、 蛋白抗原（ M、 T、 R、 S） 型特异性，与致病有关的是 M蛋白抗原 。 3、核蛋白抗原：无特异性。 多糖抗原 蛋白质抗原 核蛋白 抗原 链球菌抗原构造模式图 荚膜 （ 五）分类 40个种及亚种 、按溶血情况分类 ： （ 1） 甲型溶血性链球菌 ： 菌落周围有 1 2mm宽的 草绿溶血环，称甲型溶血或 溶血。为 条件致病菌 。 （ 2） 乙型溶血性链球菌 ： 菌落周围形成一个 2 4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或 溶血。又称溶 血性链球菌。 致病力强，引起多种疾病。 （ 3） 丙型链球菌 ：无溶血环， 不致病 、按抗原结构分类： 按 C抗原分群： ABCD20 群，对人致病的以 A群 为 主。 按 M蛋白分型：如 A群： 100个型， B群： 4型， C群 ： 13个型。 （五）分类 （ 六）抵抗力 不强， 6030min 杀死，对多种消毒剂敏感 。 乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。 二、致病性和免疫性二、致病性和免疫性 （一）致病物质 1、 链球菌溶血素 （ 1） 链球菌溶血素 O (SLO) SLO抗体 抗链球菌溶血素 O试验 ：协助诊断风湿热（ 1:400) （ 2）链球菌溶血素 S (SLS)： 无抗原性。 2、 致热外毒素 （猩红热毒素 /红疹毒素） 3、 M蛋白 4、 透明质酸酶 5、 链激酶 6、 链道酶 （二）所致疾病 主要由 A群链球菌引起。 1、 化脓性感染： 由 皮肤伤口侵入 ， 经呼吸道侵入 ，其他 途径（如 产褥热、蜂窝组织炎 ） 特点： 病灶界限不清 ,脓汁稀薄 2 中毒性疾病 ： 猩红热 由产生致热外毒素的 A 族链球菌所致的急性呼吸道传染病。 3 变态反应性疾病： 风湿热 急性肾小球肾炎 二、致病性和免疫性二、致病性和免疫性 4其他疾病： 甲型（草绿色）链球菌：引起 亚急性细菌性心 内膜炎 。 三、微生物学检验 n （一）标本采集 n （二）检验程序 n （三）检验方法 （一）标本采集 根据病情采集标本 种类 ：脓液、鼻咽拭子、血液等 风湿热查血清抗体 （二） 链球菌的检验程序 痰、脓、穿刺 液咽拭子等 脑脊液 血 液 直接涂片 染色 测抗原 分离培养 增菌培养 (5%CO2葡萄糖肉汤 ) 血平板（ 5%CO2 ） 可疑菌落 鉴定试验 初步报告 血清学鉴定 （分群） 杆菌肽试验 optochin 胆汁溶菌试验 其他鉴定 敏感试验 试验 （三） 链球菌的检验方法 （ 1）直接镜检： （痰、脓、穿刺液、 咽拭子等） 初报：发现 G+球菌， 呈链状排列 （ 2）分离培养： 血液、脑脊液 肉汤增菌 脓液、咽拭子等 血平板分离 （ 3）鉴定链球菌的主要试验： 根据形态、菌落、溶血情况进行： 杆菌肽敏感试验： A群 敏感 (d10mm) Optochin敏感试验： 肺炎链球菌 d18mm， d400为 + 二、肺炎链球菌二、肺炎链球菌 (S.pneumoniae) 属链球菌科，链球菌属。 广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道， 多数不致病。 一、生一、生 物物 学学 特特 性性 （一）形态与染色 G+， 矛头状， 成双（或短链）排 列，无鞭毛、无芽 胞，有荚膜。 （ 二）培养特性 条件 ： 营养要求较高，兼性厌氧菌， 5-10% C02生长 最好。 产生自溶酶。 液体 ： 培养 24h呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄 清。 普通琼脂平板 ： 不生长。 血液琼脂平板 ： 灰白色，圆形，扁平，较小，周围有 草绿色溶血环 （ 溶血） （ 三）生化反应 活泼 分解多种糖类。 菊糖（多数 + ） 胆汁溶菌试验（ +） Optochin试验 (+) 区别甲链与肺链 （ 四）抗原构造 、 荚膜多糖抗原 ： 据此将肺炎链球菌分 85型，对人致病的有 20 多型。 - 型引起大叶性肺炎。 、 菌体多糖抗原： 可与 CRP反应，产生沉淀。 3、 M蛋白抗原 ： 型特异性。 （五）抵抗力 较弱，加热 56 ， 20min即死亡。 对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强 。 w荚膜变异 ：有荚膜的光滑（ S） 型菌有毒力 ，失去荚膜的粗糙（ R） 型毒力减低或消失 。 （六）变异性 二、致病性和免疫性二、致病性和免疫性 （一）致病物质 1、荚膜： 肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用 。 2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素 O等 溶血毒素 “ O” ： 自溶后释放，能溶解人和动物 的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。 （二）所致疾病 存在于正常人上呼吸道，为 条件致病菌 ，仅在 人体抵抗力下降时才引起疾病。 可引起： 大叶性肺炎 ，胸膜炎，脓胸，慢性支 气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。 三、微生物学检验三、微生物学检验 （一）标本采集 痰液，脓液，血液，脑脊液等。 （二）检验程序 （三）检验方法 检验程序 痰、脓 脑脊液 血液 直接涂片 分离培养 革兰染色、美兰染色 荚膜肿胀试验 增菌培养（葡萄糖肉 汤、硫酸镁肉汤）（血平板） 挑选可疑菌落 纯培养 初报 兔血清肉汤 小白鼠毒力试验 涂片 荚膜肿胀试验 胆汁溶菌试验 菊糖发酵 Optochin试验 药敏试验 报 告 检验方法 1、直接镜检 适用于：痰、脓、脑脊液标本。 报告： “ 找到肺炎链球菌 ” 2、分离培养 硫酸镁肉汤 ：均匀混浊生长，有绿色荧光。 血平板 ：灰白色，圆形，扁平，较小，周围 有草绿色溶血环（ 溶血） 3、鉴定试验 （ 1）荚膜肿胀试验 （ 2）胆汁溶菌试验： + （ 3） Optochin试验： + （ 4）菊糖发酵试验： + （ 5）小鼠毒力试验： 有毒力的菌株，接种后 12-36h， 死亡。 w胆汁溶菌试验阳性 ： 加入胆汁 或 10%去氧胆 酸钠， 37 ， 5-10min，激 活本菌的自溶 酶，出现溶菌 现象。 wOptochin敏感试验阳性： w 取肉汤培养液均匀涂 于血平板上用 optochin纸 片贴于接种区中央（或分 区划线法，纸片贴于 1-2区 ）， 35 需氧培养过夜， 抑菌圈 18mm。 Optochin test 肺炎链球菌的主要鉴定依据 1、镜下形态 ：革兰阳性球菌，矛头状成双 排列，平端相对，尖端向外； 2、血平板菌落特点 ：直径 0.5-1.5mm， 灰白 色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平 ，周围有草绿色溶血环。 培养或放置 24h以上，菌落中央可塌陷，呈脐 窝状。 3、 生化鉴定 ： Optochin试验 +，胆汁溶菌试验 +。 肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别 形态 菌落 血清 胆汁 菊糖 Opto- 小鼠 肉汤 溶菌 chin 毒力试验 肺链 甲链 矛头状， 稍大，湿润 浑浊 + + + + 成双， 扁平， 有荚膜 脐窝状 圆形， 较小，稍干， 沉淀 无荚膜 圆，凸起 （四）结果评价和报告 乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌 为毒力强的致病 菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。 及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球 菌，有利于早期治疗，以减少并发症（如风湿热， 肾小球肾炎）的产生。 草绿色链球菌 在重症感染时，应鉴定到种。 第三节 肠球菌属 是肠道中的正常菌群 导致医院内感染：如 尿路感染尿路感染 、腹部和 盆腔感染、败血症、脑膜炎。 一、生物学特性 （一）形态染色 G+球菌， 单个、成双或短链状 排列。无荚膜、芽 胞，部分菌株有鞭毛。 营养要求较高。能在 高盐 （ 6.5%NaCl） 、 高碱 （ PH9.6）、 高胆汁 （ 40%）、 1045 生长。 菌落 ：圆形、中等大小、灰白色、不 透明、 S型，有 或 溶血。 （二）培养特性 能分解多种糖类 触酶（ -） PYR（ 吡咯烷酮 - 萘基酰胺）试验（ +） （三）生化反应 目前分 18种。引起医院内感染常见的 是粪肠球菌和屎肠球菌。 常用的分型方法： rRNA基因探针分型法。 （四）分型 （五）抵抗力 对理化因素抵抗力弱。 但对大多数抗生素天然耐药。 二、微生物学检验 （一）标本采集 尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等 。 （二）检验程序 尿液、脓汁、 穿刺液 血 液 涂片染色 分离培养（血平板、 5%CO2 ） 初 报 挑选可疑菌落 增菌培养（葡萄糖 肉汤、 5%CO2） PYR试验 胆汁七叶 苷试验 6.5%NaCl 生长试验 血清学 试验 其他鉴定 试验 报 告 （三）检验方法 1、直接镜检 适用于：痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。 2、分离培养 血平板 ：灰白色，圆形，中等大小，不透明 ， S型菌落，周围有 溶血或 溶血。 选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。 3、鉴定试验 （ 1）菌属鉴定试验： PYR试验：肠球菌、 A群 链球菌、某些凝固 酶阴性葡萄球菌为（ +） 胆汁七叶苷试验： + 盐耐受试验： + （ 4）种间鉴定试验： P175表 17-3 第四节第四节 奈瑟菌属奈瑟菌属 (Neisseria) w 特点 ：为一群 G-双球菌，无鞭毛，无芽 胞，有菌毛，需氧，氧化酶及触酶 +。 w 种类 ：共九种，主要致病菌是 w 脑膜炎奈瑟菌 (merningococcus) w 淋病奈瑟菌 (gonorrhoeae) 一、脑膜炎奈瑟菌 (N.meningitidis) 即脑膜炎球菌， 是 流行性脑脊髓膜炎 的病原体 （一）生物学性状 n 1形态结构 n 2培养特性 n 3 生化反应 n 4. 抗原结构 n 5. 抵抗力特点 （一） 形态结构 n G-， 肾形成双排列 n 在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内 n 无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。 2培养特性 n 营养要求高 ，必须在含有血清或多种氨 基酸、无机盐的培养基上生长良好。 n 血平板 ：半透明，灰褐色，圆形，湿润 光滑露滴样菌落。 n 易自溶 。 n 巧克力平板 ：圆形，扁平，蓝灰色，半透明， 光滑湿润的菌落。 n 卵黄双抗（ EPV） 平板 ：较大，无色，光滑湿润 ，扁平，边缘整齐的菌落。 n 血清肉汤 ：呈微混浊。 3.生化反应 n 分解葡萄糖、麦芽糖： + n 硝酸盐还原试验阴性，不分解尿素 n 氧化酶试验阳性 4.抗原结构 n 可分 9个血清群，对人致病的主要是 A群 5抵抗力特点 n 对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温 3h ， 60 5min 死亡。 n 采集标本：注意保温迅速送检。 n 对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。 （二）致病性与免疫性 n 1致病物质 ：菌毛、荚膜、内毒素 2所致疾病： 传染源、传播途径 寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，与患 者补体介导的杀菌活性缺陷有关。约 2%-3%的人 表现为流脑症状。 3. 免疫性 病原可产生群特异性抗体，但不持久。 (三 ) 微生物学检验 1标本采集 n 菌血症期病人采集血液 n 有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液 n 有脑膜刺激症状，抽取脑脊液 n 带菌者：咽拭子 注意事项： 立即送检 注意保温（勿放冰箱） 防干燥 防紫外线 、脑膜炎球菌的检验程序 血 液 增菌培养（葡糖 肉汤） 分离培养 （巧克力、血平板） 鉴定试验 涂染检 氧化酶 葡、麦糖 多价血清 药敏试验 结果报告 鼻咽拭子 卵黄双抗平板 510%co2 37 1824h 37 1824h 37 1824h 脑脊液 瘀血点 离心 上 沉 清 淀 液 物 510% 2 涂片 染色 初步 报告 直接凝集 脑膜炎球菌的鉴定依据 菌落特征符合 形态染色符合 分解葡、麦糖产酸 氧化酶、触酶阳性 血清凝集试验阳性 二、淋病奈瑟菌 （ N.gonorrhoeae） 即淋球菌 为淋病的病原体，人是唯 一天然宿主和传染源 （一）生物学性状（一）生物学性状 n 1形态结构 n 2培养特性 n 3. 生化反应 n 4抵抗力特点 1形态结构 n G-， 球形或肾形，成对排列 n 有荚膜，无芽胞和鞭毛 2培养特性培养特性 n 营养要求高， 30-37 生长，须在含有血液或 血清的培养基上培养，常用血液、巧克力等培 养基 n 初次分离，须 5-10%CO2才能生长发育 n 菌落：凸起，光滑、圆形，灰褐色，半透明 3.生化反应生化反应 n 氧化酶试验：（ +） n 触酶 ： （ +） n 葡萄糖（ +） ，麦芽糖（ -） n 易自溶 4抵抗力特点抵抗力特点 抵抗力弱， 在干燥环境中仅能存活 1-2h， 湿热 55 5min,100 立即死亡。室温下存活 1-2d 。 对消毒剂极敏感 、致病物质 ：菌毛、外膜蛋白、等 、所致疾病： 侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病 (首 位性病 ) 新生儿眼炎 （二）致病性与免疫性（二）致病性与免疫性 1标本采集标本采集 标本： 男性：尿道分泌物 女性：阴道分泌物 全身性淋病：血液、泌尿、生殖道的各 种分泌物、尿液 立即送检 检验程序检验程序 (三三 ) 微生物学检验微生物学检验 脓汁、分泌物 直接涂片染色 分 离 培 养 血、巧克力、 TM平板 5 10%co2 3518 24h 鉴定试验 涂染检 氧化酶 糖发酵 药敏试验 报 告 初步报告 35 18 24h （）直接涂片镜检 n 急性淋病： 嗜中性粒细胞内大量 G-， 肾形双球菌 具有诊断意义 n 慢性淋病：镜检较困难 检验方法检验方法 （）分离培养 即采集即培养，常用含有两种 以上抗生素（万古霉素、粘菌素、 磺胺类等）的选择培养基上培养（ 如 ML、 TM） 5-10%CO2 n 培养基先预温。 氧化酶试验 ： （ +） 触酶： （ +）（多数奈瑟菌为阴性） 葡萄糖（ +），麦芽糖（ -） PCR： 灵敏，特异，标本不受限制 (不需活菌 ) （）鉴定 1.名词解释： 血浆凝固酶、 SPA、 抗链 “ o” 试验、 Optochin试验。 2.根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？ 3.金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？ 4.根据链球菌在血平板上的溶血现象，将其分成哪些类 型？甲链和乙链有何区别？ 5. 简述链球菌的检验程序和检验方法。 6. 脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？ 7.采集脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验 应该注意哪些问题？为什么？ 复习思考题 中等大，突起， 有色素， S型菌落。 葡萄球菌菌落形态 （普通琼脂平板） 金黄色葡 萄球菌 表皮葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 有透明溶血环。表皮葡萄球菌无 溶血环。 葡萄球菌