pcr、染色体dna提取

名词解释 1.PCR 2.变性 3.退火 4.延伸 5.逆转录 PCR 6.平台效应 9.反向 PCR 选择题 1.关于 PCR 扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中（ ）项不是主要原因。 A.底物（模板）过剩 B.dNTP 的大量消耗 C.产物的聚集 D.非特异性产物的竞争性抑制 2.Clark 作了一个有趣的实验，发现 TaqDNA 聚合酶可以不需要模板，在双链 DNA 的末端加一个碱基，主要是 加（ ） A. dGTP B.dATP C.dCTP D.dTTP 3.有简并引物的 3端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（ ） A. TaqDNA 聚合酶具有一定的不精确性 B.便于排除错误碱基的掺入 C.易于退火 D.易于重组连接 4.PCR 实验的特异性主要取决于（ ） A.DNA 聚合酶的种类 B.反应体系中模板 DNA 的量 C.引物序列的结构和长度 D.四种 dNTP 的浓度 E.循环周期的次数 5.有关 PCR 的描述下列哪项不正确：（ ） A.是一种酶促反应 B.引物决定了扩增的特异性 C.扩增的产量按 Y=A(1+X)n D. 扩增的对象是氨基酸序列 E.扩增的对象是 DNA 序列 6.有关 PCR 的描述下列哪项不正确： ( ) A.polymerase chain reaction 的字首缩写 B.1993 年获诺贝尔化学奖 C.已广泛的应用于医学各学科 D.能够准确对扩增模板定量 7.PCR 反应产物的特异性取决于 ( ) A 镁离子浓度 B 退火温度 C 引物碱基组成和长度 D 循环次数 E.A+B+C 8 基因组是：（ ） A一个生物体内所有基因的分子总量 B一个二倍体细胞中的染色体数 C遗传单位 D生物体的一个特定 细胞内所有基因的分子总量 9.从细胞或组织中分离 DNA 时，常用葡萄糖溶液，目的是：（ ） A.抑制核酸酶的活性 B.保护 DNA，防止断裂 C.加速蛋白质变性 D.有利于细胞破碎 10.变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于 DNA 分离，原因主要是：（ ） A. 氧化物可使 DNA 的磷酸二酯键断裂 B. 氧化物同 DNA 形成复合物 C. 氧化物会改变 pH 值 D. 氧化物在 DNA 分离后不易除去 11.在分离 DNA 时，异戊醇的作用是：（ ） A使蛋白质脱水 B使 DNA 脱水 C帮助 DNA 进入水相； D减少气泡，促进分相 12PCR 反应中，所设计引物的长度一般为（ ） A510 核苷酸 B. 1530 核苷酸 C. 50 个核苷酸 D.长度任意 E. 以上答案均不对 13引物设计时 GC 含量在引物中一般占（ ） A. 2040 B. 3060 C. 4555 D.越高越好 E.含量随意 14以下说法错误的是（ ） A 引物中的碱基组成应该尽可能的随机分布。 B 引物自身不应该存在互补序列 C 设计引物时应考虑使 3端引物和 5端引物具有相似的 Tm 值 D 引物的 5和 3端必须和模板严格配对结合 E 引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过 70 15下列说法正确的是（ ） A. PCR 反应常用的缓冲液为 1050mmol/L 的 Tris-HCl（室温 PH 8.38.8） B. 10mmol/L 的 KCl 能促进引物的退火 C. 加入的 BSA 有利于破坏模板的二级结构 D. 二甲基亚砜有利于保护 TaqDNA 酶的活性。 E. Mg2+能降低 Taq DNA 聚合酶的活性。 16. TaqDNA 聚合酶活性需要以下哪种离子（ ） AK + B. Na+ C. Mg2+ D. Ca2+ E. Cl- 17.已知一段设计好的引物的序列为 GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC,其 Tm 值为（ ） A. 78 B. 80 C. 82 D. 84 E. 无法计算 18以下关于 dNTP 的说法错误的是（ ） A dNTP 具有较强的酸性，使用时应将 pH 调至 7.0-7.5 B. PCR 反应中，四种 dNTP 必须按比例配制，以减少反应的错配率。 C. dNTP 的浓度过高会增加碱基的错配率 D. dNTP 的浓度低，反应速度下降，但特异性提高 19. TaqDNA 聚合酶可以不要模板在 ds DNA 的末端加上一个 ( )碱基. A. dGTP B. dCTP C. dATP D. dTTP 20. 催化 PCR 的酶是 ( ) A. RNA 聚合酶 B. DNA 聚合酶 C. Taq DNA 聚合酶 D. 反转录酶 21. PCR 产物具有特异性是因为 ( ) A. Taq DNA 酶保证了产物的特异性 B. 合适的变性,退火,延伸温度 C. 选择特异性的引物 D. 引物的 Tm 值不同. 填空 1.Clark 发现用 TaqDNA 聚合酶得到的 PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链 DNA 分子。 根据这一发现设计了克隆 PCR 产物的 。 2.酚是蛋白变性剂用酚抽提细胞 DNA 时，具有两方面的作用：（1） （2） 3.用酚-氯仿抽提 DNA 时，通常要在氯仿或酚- 氯仿中加少许异戊醇，这是因为：异戊醇 。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA 的水相，中间的变性蛋白及下层有机溶剂相 维持稳定。 4.同其他水解蛋白酶相比，蛋白水解酶 K 具有两个显著的优点：（1） （2） 。 5.在分离 DNA 时要使用金属离子螯合剂，如 EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 6.用乙醇沉淀 DNA 时，通常要在 DNA 溶液中加入单价的阳离子，如 NaCl、NaAc，其目的是 。 7.浓缩 DNA 的方法有（1） （2） （3） （4） 。 8.通常可在三种温度下保存 DNA：45，-20，-70 ，其中以 最好。 9.在用 SDS 分离 DNA 时，要注意 SDS 的浓度，0.1%和 1%的 SDS 的作用效果是不同的，前者 ，后者 。 10.在 DNA 分离过程中，通常要进行透析，其目的是 。 11.在 DNA 分离过程中造成 DNA 分子断裂的因素很多，主要有（1） （2） （3） 。 12.在 DNA 分离过程时，常用（1） （2） （3） （4） 等方法去除蛋白质。 13.在 DNA 保存液中，常加一滴氯仿，主要是起 的作用。 14.在分离 DNA 时，要戴手套操作，原因是 。 15.乙醇沉淀 DNA 的原理是 。 16. TaqDNA 聚合酶具有 ，缺乏 因此无 。 17. PCR 反应体系含有 ， ， ， 。 18. PCR 反应的基本过程为 ， ， 。 19 引物与模板的退火温度一般为 ，延伸温度一般为 20. PCR 循环次数一般设定为 ，过多的循环次数会导致 的出现 简答题 1.你打算扩增下图所示的两段序列之间的 DNA，请从所列出引物中选出合适的一对， 5-GACCTGTGGAAGC CATACGGGATTG-3 3-CTGGACACCTTCG GTATGCCCTAAC-5 引物 1 引物 2 5-GACCTGTGGAAGC 5-CATACGGGATTG 5-CTGGACACCTTCG 5-GTATGCCCTAAC 5-CGAAGGTGTCCAG 5-GTTAGGGCATAC 5-GCTTCCACAGGTC 5-CAATCCCGTATG 2.PCR 的基本原理是什么？用 PCR 扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？ 3.在古生物学中，尚不知道恐龙是否是温血爬行动物，而不像今