实验三 齐墩果酸的提取

实验三 齐墩果酸的提取、分离及鉴定 一、实验目的 1、掌握三萜皂苷元的提取、分离和鉴定技术，熟悉三萜皂苷的性质。 2、掌握两相溶剂水解方法。 3、掌握碱溶盐析法提取萜类化合物的方法。 齐墩果酸又名庆四素，属五环三萜类化合物，广泛分布于植物界，已报道 其以游离态、酯、苷或兼有的形式存在于 150 多种植物中，而多数是以苷的形 式存在。但含齐墩果酸的量超过 10的甚少。从刺五加、龙牙楤木中提得率超 过 10，纯度达 95以上，是理想的药用资源，是一种天然产物化学成分，并 己证实其具有多种生物活性。 纯齐墩果酸是白色簇状结晶，无色、无味、无臭，熔点为 308-31O，不 溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿等有机溶剂。据研究证实，齐 墩果酸具有消炎抑菌、增强免疫功能、降转氨酶、改善肝功能，纠正体内异常 蛋白代谢，防止肝硬化、降血糖、降血脂等多方面的临床药理作用，它对急性 黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎疗效显著，是国内研制的保肝、治疗肝炎的有效 药物之一。此外，齐墩果酸还具有抗血栓形成、抗突变、抗艾滋病、抑制 HIV- I 的复制作用；以及强心、利尿和抑制 S180 瘤株生长等作用，其毒性小，副作 用低，安全范围大。齐墩果酸还因其有抗衰老、抗突变、清除自由基的作用， 还可以作为化妆品成分被广泛应用。 女贞子为木犀科植物女贞 Ligustrum lucidum Ait的干燥成熟果实，为 常用的扶正固本中药。药理研究表明其促进免疫的主要有效成分为齐墩果酸、 熊果酸及乙酰齐墩果酸。齐墩果酸以游离态和结合成苷的形式同存于女贞子中。 经检测发现其齐墩果酸含量以幼果期（8 月）含量最高，可达 8.04，随着发 育成熟下降到 2.5左右。其在果实中的含量分布为外中果皮全果实内果皮 种仁。女贞子还含橄榄苦苷、D-甘露醇、硬脂酸、植物蜡等。 女贞子中主要有效成分： （1）齐墩果酸：C 30H48O3，白色针状结晶（95乙醇） ，mp 305-306。可 溶于热甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等，不溶于水。 （2）熊果酸：C 30H48O3，白色针状结晶（95乙醇） ，mp 286-287。易溶 于二氧六环、吡啶。可溶于热乙醇，微溶于苯、氯仿、乙醚，不溶于水。 （3）乙酰齐墩果酸：C 32H50O5，白色簇晶。Mp 258-260。溶于氯仿、 乙醚、无水乙醇，不溶于水。 齐墩果酸 R=H 熊果酸 乙酰齐墩果酸 R=OCOCH3 二、实验原理 根据女贞子中齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用酸 水解，氯仿萃取同步法提取齐墩果酸。 根据女贞子齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用碱溶 解，制备成钠盐形式，酸沉淀方法提取齐墩果酸。 三、实验材料： 1、器材：500ml 圆底烧瓶、烧杯、水浴锅、滴管、球形冷凝管、索氏 提取器、250ml 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、旋转蒸发器、硅胶 G-CMG-Na 板、层析缸等； 2、药品及试剂：女贞子果皮粗粉 50g、5%氢氧化钠溶液、浓硫酸、浓盐 酸、乙醇、丙酮、氯仿溶液、石油醚（沸程 60-90） 、冰醋酸、乙酸乙酯溶液、 无水硫酸钠、乙酸酐 四、实验操作步骤： 1、酸水解和氯仿同步提取法 称取女贞子果皮粗粉 25g，置于圆底烧瓶内，加 15盐酸溶液 175 ml，氯 仿 125 ml，70水浴回流水解 2h，过滤，分取氯仿提取液（在分液漏斗中进行， 注意：氯仿在下，水在上，因为氯仿密度 1.4916 比水大，用水洗至中性，用无 水硫酸钠脱水干燥、过滤，用过滤液）另存。药渣用水洗至中性，抽干，干燥 药渣至含水量小于 10（摊平晾晒或低温烘干） 。将干燥药渣置于圆底烧瓶内， 加氯仿 250 ml 回流 1h，合并二次氯仿提取液，取出 2 ml 留待薄层鉴识，其余 减压回收氯仿（用旋转蒸发器或常温挥干）至糖浆状，趁热转移至烧杯中，冷 后成半固状物。 女贞子果皮粗粉 氯仿提取液 回流 回收氯仿至糖浆状 2、分离与精制 方法 1：取上述半固状物，以少量石油醚洗涤除去脂溶性较大的成分，即 有固体析出，抽干，得浅黄色析出物。用 1:100 倍量（WV）95乙醇 90回 流 10 min，过滤，滤液浓缩至小体积，放置，析出粗晶，抽滤得齐墩果酸粗品。 反复用 90乙醇重结晶，可得较纯的齐墩果酸。 即方法 1： 半固状物 浅黄色析出物 乙醇回流 齐墩果酸粗品 齐墩果酸 方法 2：同方法 1 用石油醚处理得浅黄色析出物，加 10 倍量 5%氢氧化钠溶液煮 沸 10 min，放冷后抽滤，适量热水洗涤 12 次，抽干得类白色析出物，用 95乙醇回流溶解，趁热过滤，盐酸调至 pH l2，放置析晶。抽滤得齐墩 果酸粗品，用正己烷-乙醇（1:1）重结晶，可得较纯的齐墩果酸。 即方法 2： 半固状物 浅黄色析出物 氢氧化钠溶液煮沸 乙醇回流 齐墩果酸粗品 齐墩果酸 3、鉴定 a呈色反应 （1）取本品约 50mg，加氯仿 2ml 溶解后，加硫酸 2 滴，振摇，静止，氯仿 液自无色(或淡黄色)渐变为淡红色。 （2）取本品少量，加乙酸酐 lml，微热使溶解，滴加硫酸 1 滴，即显紫红 色，放置后色渐变深。 （3）取本品少量，加香草醛的冰乙酸溶液(香草醛 0.5g，加冰乙酸 10ml 溶 解，即得)0.2ml，加高氯酸 0.8ml，置沸水浴中加热数分钟，显紫红色，加乙 酸乙酯 2ml，紫红色溶入乙酸乙酯中，放置不变色。 b薄层色谱鉴别 薄层板：硅胶 G-CMG-Na 板 点样：女贞子氯仿提取液、自制齐墩果酸乙醇溶液、齐墩果酸对照品乙醇 溶液（1 mg/ml） 。 展开剂：氯仿-丙酮（95:5） 、环己烷-乙酸乙酯（8:2）任选一种。 显色：喷 10% 硫酸甲醇溶液，105烘至显色，日光和紫外光灯（365nm） 下检识。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 4、计算得率 得率=得到的齐墩果酸成品（g）/称取得样品量（g）*100% 五、注意事项 1、女贞子中齐墩果酸的含量因采收季节、产地不同有较大差异，可根据原