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武汉生物工程学院武汉生物工程学院 毕业论文(设计)文献综述 题题 目目 名名 称：称： 当归的提取及药理研究概况 题题 目目 类类 别：别：毕业论文 系系 别：别：制药工程系 专专 业业 班班 级：级：08034101 学学 生生 姓姓 名：名：李婧 指指 导导 教教 师：师：刘冬琳 完完 成成 日日 期：期：2011.11 当当归归的的提提取取及及药药理理研研究究概概况况 摘摘要要：当归Angelica sinensis(O1iv)Diels为伞形科植物当归的干燥根，味甘平，性温。 当归多糖是从当归根中提取的水溶性化合物，它是当归中促进造血的有效成分之一。本文通 过查阅大量文献及相关资料阐述了当归的有效成分、药理作用、现代提取工艺及有效成分的 含量测定。 关键词：关键词：当归；当归多糖；提取工艺；含量测定 1 前言 当归为伞形科多年生草本植物当归的干燥根。当归属伞形科植物，属于血中气药， “其 性温，味甘、辛，当归，归心、脾经，具有补血活血，调经止痛的作用。主治血虚头晕， 面色不华，跌打损伤，风湿痹痛，疮疡痈肿，月经不调，痛经闭经，崩漏及产后瘀滞腹痛 等病症。当归有补血及调和血脉作用。 ”当今其在临床具有广泛的用途。我国当归主产于甘 肃东南部，以岷县产量多、质量好，其次为云南四川、陕西、湖北等省，均为栽培。甘肃 产的当归，个大质优，称“秦归”或“西归” ，销往全国并大量出口。国内外研究表明，当 归的化学成分主要有多糖类、苯酞类、香豆素类、黄酮类、挥发油类化合物及其他成分1。 2 化学成分研究概况 2.1 苯酞类化合物 苯酞类化合物在伞形科植物挥发油中分布广泛，目前当归属中检测有25种苯酞类 化合物，主要有藁本内酯 (1igusti1ide)、正丁烯基苯肽 (Z-butylidene-phthal ide)、丁基 苯酞(butylphthal ide)以及1998年通过HPLC-EPS-MS技术分析到的新蛇床内酯 (neocnidi1ide)等，其中，藁本内酯占此类化合物总量的 60以上2。 2.2 香豆素类 香豆素类的主要成分为简单香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素和双香豆素类。 2.3 有机酸类 化合物当归中主要的有机酸类化合物是阿魏酸钠(sodium ferulate，SF，当归素)3。 2.4 黄酮类化合物 从当归中分离出3个查尔酮衍生物；分离出的黄酮苷有木犀草素-7-0-D葡萄糖苷 (1ute-olin-7-0-D-gluco-Side)以及木犀草素-7-0-芦丁(1uteolin-7-0-rutinoside)。 2.5 挥发油成分 当归中挥发油成分非常丰富，藁苯内酯和正丁烯基苯等均属于此类。 2.6 多糖类 当归多糖的各种不同多糖成分的基本糖单位有D-葡萄糖(D-glucose)、D-半乳糖(D- galactose)、D-木糖(D-xy-ose)、L-阿拉伯糖(L-arabinose)、甘露糖(mannose)、鼠李糖 (rhamnose)、岩藻糖(fucose)以及葡萄糖醛酸(glucuronic acid)和半乳糖醛酸(galacturoni-cacid) 4。 2.7 氨基酸 当归含有丰富的氨基酸。文献报道，甘肃岷县当归中检出19种氨基酸，其中精氨酸的 含量最大，谷氨酸次之，其中有赖氨酸、吉氨酸、色氨酸等8种为人体所必需但又不能自行 合成的氨基酸5。 2.8 微量元素、维生素及其他成分 有文献报道，当归含钾、钠、钙、镁、铝、硅、磷、铁、锰、镍、铜、锌、砷、钼、 锡、硼、铼、钡、硒、镭、钛、钒、铬等23种微量元素，其中l6种是人体所必需的6。关 于当归的维生素研究的还不多，有维生素B12(1.2540gl00g)、维生素A。除此以外，当 归还含有尿嘧啶、腺嘌呤、胆碱、5-羟基呋喃醛、磷脂等化学成分。 3 提取工艺的研究概况 当归目前有多种提取方法，主要有水蒸气蒸馏工艺、水蒸气蒸馏后水提工艺 、 乙醇渗漉工艺、乙醇回流提取工艺以及近年来出现的SFE-CO2 (超临界CO2)提取工艺。 现当归的多糖含量较高，作为免疫调节剂和抗放射损伤剂，多糖已应用于临床，但 多以粗多糖的形式被利用，质量难以控制，药效重复性差，不符合国际规范。当归在我 国属于大宗药材，产地多，有野生的，也有种植的，种植技术、采收时间等也有差异， 这些因素导致当归有效物质存在差异。在以当归多糖作为药用成分应用时，如何分离、 提取和高效快速检测当归多糖是当归药材质量控制要解决的重大问题。 3.1 超声提取一分光光度法 先用80乙醇提取，以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等成分，再用超声提 取多糖成分；多糖类成分在硫酸的作用下，先水解成单糖分子并迅速脱水生成糖醛衍生 物，然后和苯酚合成有色化合物，用比色法测定其含量超声提取方法缩短了提取时间， 简便快捷，具有分离效果好、灵敏准确、重现性好等优点，且含量测定显色稳定，多糖 水解较完全 7。 3.2 水提醇沉法 对当归用石油醚、乙醚除去脂溶性杂质，用85%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及苷 类等干扰性成分后，再用水提醇沉法制得当归粗多糖。 3.3 超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术8是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。超临界流体是指 物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，密度大， 粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能. 而且这 种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有 效成分的活性和无溶剂残留等优点。 由于CO2的超临界条件（Tc304.6，Tp7.38MPa）容易达到，常用于超临界萃取的 溶剂，在压力为840MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入 改性剂后则可溶解极性化物。廖周坤等17采用超临界CO2萃取法从藏药雪灵芝中提出了多 糖类成分。 4 含量测定研究概况 4.1分光光度法 利用多糖的还原性， 经3，5一二硝基水杨 (DNS)显色测定当归中的总糖、还原糖及 多糖的含量。本实验方法操作简便、快速、准确，灵敏度高，为深入认识当归的作用， 进一步挖掘当归的临床价值，对分析当归的有效成分的含量以及测定方法提供了实验依 据9。 4.2 用硫酸一苯酚法 测定当归及其炮制品中的水溶性糖、还原性糖的含量 10。硫酸苯酚法不同单糖显色 后产生较好吸收峰，稳定性也很好，通过多次测试表明，吸收度在0.20.8A之间线 性关系非常好，但不同时间不同操作人员操作时所测数据有差异，建议在使用硫酸苯酚 法测定多糖含量时，需同时用对照品作对照，并结合标准曲线参数计算多糖含量，避免 直接由标准曲线读数，使得不同时间所测数据产生较大差异。 多糖含量的测定是多糖类药物质量控制的重要指标，也是其样品稳定性最可靠的依 据。苯酚硫酸法是目前测定多糖含量较为可靠的传统方法，但不同类型多糖特别是 与蛋白质等结合的结合型多糖对测定结果有较大的影响。实验原理为多糖在浓硫酸的 作用下水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，糖醛衍生物再与苯酚缩合成有色化 合物，用分光光度比色法测定其含量。本法简单快速，灵敏度高，显色稳定，重现性好， 可作为当归质量控制标准 11。 5 当归的药理作用研究概况 5.1 对免疫系统的作用 大量药理及临床实验证明当归 多糖不仅能激活 T、B淋巴细胞、巨噬细胞 (M)、 自然杀伤细胞 (NK)、细胞毒细胞 (CTL)、淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK)、树突状细 胞(Dc)等免疫细胞，还能促进细胞因子生成，激活补体系统，促进抗体产生，对免疫系 统发挥多方面的调节作用。对于当归多糖 (AP)对免疫系统的影响，现归结 如下： 5.1.1 对免疫器官的影响 免疫器官的脏器系数是衡量机体免疫功能的初步指标。据报道，AP-PBMC条件 培养液可促进 PBMC(外周血单核细胞 )增殖，AP注射BALBc小鼠后脾细胞增殖能力 和巨噬细胞吞噬能力均得到了不同程度的增强，此特性可能与单核细胞的活化密切相关 12。 5.1.2 对巨噬细胞的影响 单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫的指标之一。AP可使小鼠的 巨噬细胞数目及吞噬能力显著增加，从而提高主动免疫治疗效应 13。具体到Kupffer 细胞，它是肝内巨噬细胞，既能吞噬大颗粒物质(如细菌、肿瘤细胞 )，也能吞饮可溶 性物质(如肠毒素、细菌抗原 )，并释放NO和TNF-a等多种免疫因子。 5.1.3 对体液及细胞免疫的影响 T细胞在宿主防御与免疫监测反应中起重要作用，CD4T(Th)细胞已被证实为结肠 炎的致病性 T细胞，其功能增强可促进损伤性免疫因子的释放，启动与维持肠黏膜炎症 反应。 5.1.4 对红细胞免疫的影响 刘景田等 14用黄芪、灵芝、茯苓、党参、当归、天花粉等进行试验研究发现，当 归多糖对红细胞免疫有促进和调节作用，促进红细胞与补体致敏酵母菌的黏附作用，从 而使RBCC3bRR(红细胞C3b受体花环率 )增高，达到调节和增强其红细胞免疫功能的 作用。 5.2 对血液系统的作用 5.2.1 对造血系统的影响 AP能增加外周血红细胞、白细胞、血红蛋白及骨髓有核细胞数，这种作用特别是 在外周血细胞减少和骨髓受到抑制时尤为明显。外周血红蛋白(Hb)含量是临床评价贫 血病的重要指标。 5.2.2 对凝血和血小板聚集的影响 杨铁虹等 15经AP对凝血和血小板聚集的影响研究发现， AP在凝血方面表现出双 向调节作用，既有显著的抗凝血活性，又有明显的止血作用。其凝血作用主要是影响内 源性凝血系统，显著延长部分凝血活酶时间，对外源性凝血系统的作用较弱。血小板聚 集是生理性止血的最好步骤，止血主要与血小板功能有较大关系。当归多糖能促进血小 板聚集，加之其对外源性凝血作用较小，这可能是其止血的作用途径，这与其抗凝血活 性并不矛盾。 5.3 抗肿瘤作用 多糖类成分能提高机体免疫功能的活性，是其应用于抗肿瘤的根据。近年来，发现 及应用的比较有代表性的抗肿瘤多糖有云芝多糖、猪苓多糖、香菇多糖等 11。AP在 抗肿瘤方面亦有较突出的功效。 5.4 镇痛作用 乐江等16采用己烯雌酚和缩宫素诱发小鼠扭体反应，醋酸致小鼠扭体反应及小鼠 热板法进行镇痛实验研究。结果表明，当归粗多糖剂量0.075gkg 和0.25gkg可明 显减少乙烯雌酚和缩宫 素引起疼痛模型中诱发的小鼠扭体反应次数，延长扭体反应潜 伏期，大剂量则显著降低扭体发生率；当归粗多糖尚可显著抑制醋酸所致小鼠扭体反应 及提高热板法所致小鼠痛觉反应的痛觉。 5.5 抗氧化 AP具有抗氧化效应和免疫促进效应，能增强心、脑、肾、胰中超氧化物歧化酶活性， 降低心、脑、肾、胰中丙二醛含量，可防止过氧化损伤 17，故推测AP的抗氧化效应 和免疫促进效应可能与其降血糖作用机理有关。 5.6 其他作用 许莹等18通过AP对四氧嘧啶糖尿病小鼠的研究表明， AP对四氧嘧啶所致的血糖 升高有明显的抑制作用，这表明 AP可能具有减弱四氧嘧啶对胰岛 细胞的损伤或改善 受损伤的白 细胞的功能。 总之，AP具有广泛的药理学意义和临床利用价值 。目前，AP作为免疫调节剂和 抗放射损伤剂已应用于临床，但多属于粗多糖的形式利用，质量难以控制，药效重复性 差，不符合国际规范，因此加强当归多糖的分离、纯化和化学结构鉴定，并在此基础上 开展活性及作用机制的研究，从分子水平揭示当归多糖的药理作用与结构的关系，对开 发符合国际规范的新药有着重要意义。 6 结语 随着回归自然的理念日益深入，天然药物在世界范围内越来越受到重视和青睐，服用 中草药的人数在迅速地增长。当归是极常用的中药，甘、辛、温。归肝心、脾经，有补血 调血、调经止痛、润肠通便的功能，用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚 寒腹痛，肠燥便秘，风湿痹痛，跌仆损伤，痈疽疮疡。同时在中医处方中，在中成药中出 现频度甚高。为了提高当归的治疗效果，降低毒副作用，选择合理的提取工艺是非常必要 的。 参考文献参考文献 1 宋萍萍，孙明毅，徐增莱，等三种当归属植物的化学成分研究J中草药， 2007，38(6)：833835 2 杨崇仁，陈江议当归属植物的研究进展 J天然产物研究与开发，2004，I6(4)： 359365 3 王雪梅，李东当归有效成分及其药理作用的研究进展J. 2009，12(5)：6-7. 4 刘汉珍,夏咸水当归及其炮制品多糖含量的测定J时珍国医国药,2006,l7(3):393- 394 5 黄伟晖，宋纯清当归化学成分研究J药学学报，2003，38(9)：680683 6 王海燕，陈汝贤，许鸿章当归化学成分研究J中国中药杂志，1998，23(3)：167 169 7 郭建巍，吕同德，张银霞，等当归多糖对免疫细胞增殖作用的实验研究J微生物 学免疫学进展，2003，31(4)：39-42 8 左增艳新型生物反应调节荆当归多糖(ASPP)抗肿瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的 影响J中国免疫学杂志，2000，16(10)：545 9 刘景田，党小军，王惠萍，等中药多糖对红细胞膜相 CD35免疫活性的调节作用J 中国现代医学杂志，2002，12(1)：7-9 10 杨铁虹，贾敏，梅其炳，等当归多糖对凝血和血小板聚集的影响J中药材， 2002，25(5)：344345 11 田庚元，冯宇澄，林颖植物多糖的研究进展J中国中药杂志，1995，20(7)： 441 12 乐江，彭仁璃，孔锐，等当归粗多糖镇痛作用的实验研究J中国药学杂志， 2002，37(10)：746748 13 凌小曼，丁虹，罗顺德，等当归多糖对血瘀症动物免疫功