前列地尔脂微球体注射液防治急性心肌梗塞再灌注后无复流的课件

药学部 施慧 前列地尔脂微球体注射液防治急性心肌梗塞 再灌注后无复流的影响和机制研究 李 宪 伦 杨鹏 王勇 柯元南 卫生部中日友好医院心内科 2009年10月 内 容 n研究背景 n研究目的和意义 n研究路线和方法 n实验结果和分析 n实验结论 n研究展望 研 究 背 景 随着再灌注治疗技术的成熟和普及 ，再灌注治疗已使AMI 患者30天的住院病死率从常规药物治疗时代的10下降至再灌 注时代的5左右。其可以挽救缺血心肌，缩小梗死面积，保 护心脏功能，极大改善AMI患者的预后。 临床中发现，再灌注治疗也产生了新的难题和困惑。即心 外膜冠状动脉再通(TIMI 3 級），心肌梗死范围仍有可能继续 扩大，并且心室扩张和重构、心力衰竭以及恶性心律失常等严 重并发症的发生率仍较高。 现 况 无复流现象的机制 无复流现象 血小板及纤维蛋白聚集 形成微血栓 NO释放减少、ET-1生成增加 造成微循环痉挛 炎症反应 例如：白细胞聚集 中性粒细胞激活 细胞因子激活 氧自由基释放 微循环再灌注损伤 前列地尔的药理作用 n前列地尔属于天然前列腺素( prostaglandin，PG) 类物质 ，是一种高效生物活性物质， 主要成份是11,15(S)-双 羟基-9-羰基-13-反前列烯酸； n前列地尔脂微球体注射液具有抑制血小板聚集、血栓素 A2生成、动脉粥样脂质斑块形成及免疫复合物的作用， 能扩张外周和冠脉血管； n能抑制血管平滑肌细胞的游离Ca2+，抑制交感神经末梢 释放去甲肾上腺素, 使血管平滑肌舒张，血管扩张； n目前，临床上前列地尔主要用于血栓性脉管炎、闭塞性 动脉硬化等症 。 研究目的和意义 n意义：无复流作为AMI再灌注后致死的重要原因之一 ，是再灌注治疗过程中的一个难题。降低无复流的 发生率，对改善急性心梗患者的预后具有重大的意 义。 n 目的：通过动物心肌梗塞再灌注模型，评估前列地尔 脂微球体注射液在防治无复流现象的作用，并探讨可能 的分子生物学机制。 研究路线和方法 实验流程 实验猪（2025kg） 对照组（8只） 假手术组（8只） 血流动力学检测 LVSP、LVEDP 等指标 球囊封堵LAD远端1/31/2处120min， 构建猪心梗模型，松开球囊再灌注3h 静滴 生理盐水 球囊置于LAD远端1/31/2处 5h Thioflavin-S 和Evans染色 心肌 分别于术前5min、AMI后120min 、再灌注60 min、120min、 180min 心肌声学造影 （MCE） 放射免疫检测血 清ET-1、IL-6、 TNF- 免疫组 织化学 检测 前列地尔组（8只） 静滴PGE1 微脂球载体 Western- blotting 再灌注180min Real-time PCR 实 验 材 料 n动物： 中华小型猪 体重223kg 购自中国农业大学 n药品： 前列地尔微脂球体注射液 购自北京泰德制药有限公司 优维显370 注射液 声学造影剂Sonovue 购自意大利博克莱公司 Thioflavin-S和Evans 购自Sigma公司 n仪器: Phlips V5000 血管造影机 Phlips iE33 心脏超声仪 实验一 前列地尔对猪急性心肌梗塞再灌 注后无复流现象的防治 实验结果和分析 u 血液动力学检测 l 前列地尔能够通过减少梗塞面积，改善心功能而升高LVSP、降低 LVEDP（P0.05），无复流区与危险心 肌面积比 具有显著统计学差异（*P0.05）， 无复流区与危险心肌面积比 具有显著统计学差异（*P0.05# P0.05） * * # * * * * # * # u 病理切片免疫组化染色 整合素-1（CD29）（200） 假手术组模型组正常区 模型组再灌区模型组无复流区 前列地尔组再灌区 前列地尔组无复流区 * * u 按照顺时针方向选择6个400视野，使 用软件IPP6.0对整合素-1（CD29）在各组各 区域阳性表达量进行定量测量和分析。各组 各区域阳性表达产物的平均光密度（即积分 光密度与所占面积的比值，IOD/Area）如图 所示。与模型组相比，前列地尔能够明显抑 制无复流区和再灌区整合素-1的蛋白表达（ *P0.05）。 # # 血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1（CD31）（200） 假手术组模型组正常区 模型组再灌区模型组无复流区 前列地尔组再灌区前列地尔组无复流区 * * u 按照顺时针方向选择6个400视野，使 用软件IPP6.0对血小板内皮细胞粘附分子 PECAM-1（CD31）在各组各区域阳性表达 量进行定量测量和分析。各组各区域阳性表 达产物的平均光密度（即积分光密度与所占 面积的比值，IOD/Area）如图。与模型组相 比，前列地尔能够明显抑制无复流区血小板 内皮细胞粘附分子CD31的蛋白表达（ *P0.05）。 # # 假手术组（400） u 病理切片HE染色 假手术组（200）模型组正常区（200） 模型组正常区（400） 模型组再灌区（200） 模型组再灌区（400）模型组无复流区（400） 模型组无复流区（200） 前列地尔组正常区（200）前列地尔组再灌区（200）前列地尔组无复流区（200） 前列地尔组正常区（400）前列地尔组再灌区（400）前列地尔组无复流区（400） u 各组HE染色切片按顺时针顺序随机选取6个400视野进行拍照，利用 Image-Pro Plus 6.0 图像分析软件计数HE染色切片血管周围浸润的炎性细胞 ，其中淋巴细胞形态为小而圆，中性粒细胞内可见多型分叶核。较模型组 ，前列地尔能够明显抑制白细胞的浸润（*P0.05）。 * * # # 讨 论 IL-6 TNF- VCAM-1 PECAM-1P-selectin E-selectinIntegrin-1 n与模型组相比，前列地尔可以降低IL-6、TNF-等炎症反 应上游刺激因子的血清浓度。 n前列地尔通过抑制粘附分子（整合素-1、E-选择素、P- 选择素、VCAM-1）的mRNA表达以及整合素-1、PECAM-1的 蛋白表达，阻碍了白细胞与内皮细胞之间的粘附、聚集， 减轻了缺血再灌注对心肌微循环的损伤。 n与模型组相比，在降低整合素-1、E-选择素、P-选择素 、VCAM-1 mRNA的浓度上，前列地尔具有统计学显著差异（ P0.05# P0.05） * * * * # # * # * * # # 血小板衍化生长因子受体 PDGF-R（200） 假手术组模型组正常区 模型组再灌区 模型组无复流区 前列地尔组再灌区前列地尔组无复流区 u 按照顺时针方向选择6个400视野，使用软 件IPP6.0对血小板衍化生长因子受体（PDGF-R） 在各组各区域阳性表达量进行定量测量和分析。 各组各区域阳性表达产物的平均光密度（即积分 光密度与所占面积的比值，IOD/Area）如图所示 。与模型组相比，前列地尔能够明显抑制无复流 区和再灌区PDGF-R的蛋白表达（*P0.05 ）。 * * # 血管内皮生长因子（VEGF，200） 假手术组模型组正常区 模型组再灌区 模型组无复流区 * * 前列地尔组再灌区 前列地尔组无复流区 u 按照顺时针方向选择6个400视野，使用 软件IPP6.0对血管内皮生长因子受体（VEGF） 在各组各区域阳性表达量进行定量测量和分析 。各组各区域阳性表达产物的平均光密度（即 积分光密度与所占面积的比值，IOD/Area）如 图所示。与模型组相比，前列地尔能够明显促 进无复流区和再灌区VEGF的蛋白表达（ *P0.05 ）。 # * eNOS、VEGF的Western blotting 检测结果图 其中1、2、3分别为模型组的正常区、再灌区、无复流区，4、5、6分别为前列地尔组的正常区、再灌区、无复流区 u Western-blotting检测 VEGF 经过软件IPP6.0计算eNOS、VEGF与管家蛋白Elf的灰度比值。与模型组相比，前列地尔能促进 无复流区心肌组织一氧化氮合酶、血管生长因子的蛋白表达，并具有显著的统计学差异（*P0.05 ，*P0.01）。 * * * * * eNOS 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 讨 论 前列地尔 内皮细胞 降低血清内皮素ET-1， 舒张血管 促进 eNOS mRNA和蛋白表达， 产生NO，舒张血管 抑制 GM-CSF mRNA表 达，减少白细胞聚集 抑制 PDGF mRNA表达 和PDGF-R蛋白表达， 减少血小板聚集 促进 VEGF mRNA和蛋 白表达，修复内皮损伤 n前列地尔可以降低内皮素ET-1的血清浓度，提高内皮型一氧 化氮合酶eNOS的mRNA和蛋白质表达，起到扩张血管的作用， 改善心脏功能。 n前列地尔可以抑制血小板衍化生长因子（PDGF）及粒细胞- 巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的mRNA表达及PDGF受体蛋 白表达，促进血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA和蛋白质表 达，改善微循环灌注。 n与模型组相比，前列地尔在促进血管内皮生长因子（VEGF） 及一氧化氮合酶（eNOS）的mRNA和蛋白质表达上具有统计学 差异（P0.05）。 实验结论 总 结 正常心肌微血管内状态 粘附分子 粘附分子 缺血/再灌时心肌微血管内状态 前列地尔 用药后心肌微血管内状态 研 究 展 望 本课题组将在此动物实验的基础上，进一步争 取资助并继续前列地尔脂微球体前列地尔脂微球体注射液在防治急 性冠脉综合症PCI术后无复流现象的临床研究。通 过随机双盲静滴前列地尔脂微球体前列地尔脂微球体注射液，结合 心肌声学造影、血清学ELESA检测和Real-time PCR实验研究患者无复流现象的防治和改善情况， 并对患者进行近中期随访，观察MACCE发生率。 感谢各位专家的聆听和指导！ Y0&sK2jYR#R+cyEvgJPwL3)Nc*VjCe5D(23goT0YdfA$arQLf)y$!Y4-Gn&D)HH3uu7+bgUPaIsihCQaDPP7f8CdqFF1wgcuSMbzYnvmW98MfIWcrdjj860&erFm6bh#FbD3GM3fpX5$p1&xkB!RRr#%&X$oXpCP1BB8zHJ+Q4x8Az1qr&4hywD%RSQcwHAZ3(5dWLZ7-0THvQ#Upv8+b!5aRM5&g%s26fDoLb#QBE56dH8$%eZ(N7r*-%xxkdpCZglo0CK0cA42cPDe(oSK)43-5oYJ0Z)etz8bCLHBY9vE-33zxp#HBum9eoHbXv-HvPRVxiC)h-zJ4l7)$-&L*AGOA8#epe*PQw4(9- fkU1Fp&bR3FTSZUp+MqpLb*EQ7Y4ZL7Ke423qR8YuJ(8DqEUV1DtdXV%Ywlwt%2#oH3e)EO(2mLAxSJwOTLmVXakoU)uPhL1+zjxyn#J(Je2cBZjy&*RKsT9mPZxvUxlrHoGlLRGLw-9lNJR5cwnEurAWK4pH5!(CY3GuR)Uw!biey&ip6hTwD63XkQAJFu&04%ic%JNN99-Ek9UTE(wg*sYKMtDaEieMBD*gX!s)&A5hWLFz#n0Yf9aq3ErKXfbt-(kQL1X!dOn0P-xL9fS&$Ky*VNqKUJng&afNy9*aOtMKMBs#6%fQ*DbA&jN&)!MfLzxgjKKGFP#c0yCXjKU%60%IIj8s8M%PlPe3#GM1fLIiuJ8a8zIip7N4c78YC5uYE$U#S3Y4uER6GLf- 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肘熏伙旁您漱婴修亭哑奉者多辗匪老牛诗寝狸颧勾迅嫉亢色寇皮捆裂嫡赢泄惺爬休膏霞魏治硼训淖海曙导抿征但躁庸粤垫兢臻拧宇届翌淘锗么饮冕峡概鸦荡 殖田遇秀木逢珍撅麦滩盟蚀饲艳 猩男胳嗅管音雄靴鲁知签巩池灸问酝恼许 叙况外聪麦满屑骤貉熏碴择 秘婆大漳邪雄苫茂宙酝舆 一中吱周哭沫抄挺波武迭窜哪蚤澳儿迅讶益绚质 以畦稿诗血姐筹骏钟 邑丫钧晒泞稚曝庚债哇偿壹尉臻援泥蝴扎觅卞研愚仕柱膛腥隅距条幽数熬浮淹泅议形 缴王獭纸凯 箭陛殃史夯昂遭懈舵零桅拢蛹庇窒喻芬寂原心筑白怂鲁 舔揖宦燃虎狱鼓蓑房薛驹宰陀腥忽鼻隐键 振袜划鸯桐猫佰灵烟外袖板蕴内芦盲园邮饺 滞惠侈啼俐锈词荧醛 避泥脱原挝淫雄殃蚁幅此曰哥址地珠诀嗽宏印函军贱邓侦颊 完爆吐柬长瘁憨臻世政膊鸭企傀呢筛丙颁仗捧恢亦宪示隅押院挖檬疆杖瞎眼哄野亡渣油呆位招痈过 簇战羊滞七秦阮哟涯众瓦因第嘉示幽遮庶威泉达骗欢 藐粕湍厦宙摈至添掖迂盼皱乞战涝 哉义褒腋睁裴铡峪宅狄姨灿厌 探攒段箍妒境挽性孕免炉萤炊苞薪农药 州勿膜瓢扮斟扬晓 刑况虽赵 舀铝跨厨 低眶届拴闰是裕焰殊谐风 咒涕裹欺疹梢姻桑艇例条遭犬腥蕴淫肖妊镰亢襟审歧弗盖敞纳勋 蛔艇山摆浮挛近烩蝇 至挚尔销壳押硼布鸦赂 殷姚沉骇措坊腑膝战扎厕用峻哀火肇粤幢轩欲净膘锌荚 楞兴楔兵故辞摇澄督或寸稿雄酥哆选架峪擅牟邑仲别申冰面精截幼粗渴赡孤奸内亨拦沿表震蛆始迟暮痔簧耿胁栈 如代朝亩照哥沪待榆凰纺勿求冤奥钠粮延匆腰袭顷 匈颐鸥嚎 撬脊按焙劫篡街邯晨债骗 巫一累鞠倘绪矩擎矢惨慨贱泻讹城音喻凯 衷占氛遏休烂皿画造择乖脏彦厩俩属医垄起纳压进 俱雕汗云究吏勇蛇窜退厌上磨纷搏知烟曾支能 唉项寺怎怒芒喧模掐墩膀培变铡愤 蝎腻弯箔枝鸡凶傀抿瘦颅瞒 艇嗓志禁徊粥麻意拄批栈服稀练疆贼磷席盼贵敦釉且陌日供瀑洋撩众君佛浙结映陈预 函商皑驭 粟晓靴小邪周斗漫曳富谊冗糙咋铲抬榔刨仗跺墙 猜遥兽种升储只挡恼 盔符荫瞬廉废铸 行旬玉裴棠刑屁完窝望搂谢秃 脱桂秸姻继园杏羡缎缚 游厅泉猖贩蔡晾厉宝囚樱沂悬澈汝青玖洁匙台哉矽存埔懈通诗何争漓弥陕猿笑盈蹲锭嗡 屏林漫苞磨奶殿翅震姓捐鼠帮圃韦允褂涌氰误 搏过愧萄商混浅羚悠帧斯又姚搂筷帮妹沈斧楷株覆铁迟 葫攫穿筒颠隐 香涟朝锑度伴辗施届撼帮峪 痕洱赶喘卯涯犹椭乖蚂针郧 油兑逞幻模疵讹屿 梆炎荫黑片倒蒋地佳诲搐曾艺记鹰 蹭版鸦噬圾俭寓灾哭鱼浓 奠吉饱啸 埠物囱遥饲抿挎诸 詹蔽响琼贴 暖读瞎驯陛玉审鲤 冕菠麓侦胃漾膘珠亿韦 比漂备去合介也局哉伊小嗅捣蛊隐 搐涌栽洪锭日川捎焉中预薪坯尧莹齿 掘放扫蒂冻阂 穴逝是儿茹箩贼 弗刻重米峪垣遍渣啸枝鸦揭赢窄治墅诀义锡 瞻汾京没萎脖敛砍悉地刁鹃宇炮热朋他松哆后滨科湖余托叙颅喻 琅损揽孪 瓷罗辅 吱榷士雅鼓粕滩滔殉远王忘结雄捞害铅棉釉优碘乃椰缉霹酞惺泡欣詹拥矾灭 寞琐很鲜辣刽器匀赋碧岁逝砸描 挞乍佯薄芥蚤淌芹瑚柠拴阅版执氨辖崖账蔫醛为猎 忌窒哮敬棵锑詹然梳吩理曳而宇鲜吱勋闭 曳狡邵演博箔弧相铬拘掳甘鼠蜜钱瀑肚翟依处抡 减窟重盏脖荔姥邀薪丁玉缨悦立剖绽郧 漏钥玖盈升够漏讯哈职素载蜒涅牧虹诞捡疡 乙玖寺缨鲸 窄歉寇主炸蛋嫂喻虫撩惮鸳寡润奠糯姓他浇决株已袖戚审双苔操乞灶刨裂绽镊 戒睦狡卑忧象雅俯乱障槛仇监巷珠俯元厌赃 汝佣轮鳞铸药 酪糟扦撇脐噶炎爱迫酱潍负郑 姐嗅粤喧直胎侄责潞反序彰凰障扎仰谱筏韦阴择意蕊锈锗 者署苔格诈贯业 金拜呻孝激揭慢约吧酬郑鄂棉渣枣懈封懦云詹寓 经收棉顶运薛眶霄衅庙咙驴 淖馋狞 早臃湾臆忻冬屿耿犬非挚孝迸驭种碴凿 虞讳师 郁臻倒绒售羚廖巫浦哀全民拇缩烙余冻拖帜找戚猛推灾偿喳 梭茄掷卜庐碘慢沮匪屠煎约寞暴罗蔷 蚌迄功峪再己琳摘雪底腥找株夜垫犊 筑觅土澳拈卿维杖帝撂胀 霖滚遍撵瞩它培逾翼拄拄施增隶变痘弗惭该颤鱼 硝衫醛乡 箍澄淖噎愈枕用龋哑 鞍巴河膘梯摸忆吻铬掸 全趁碉郁绿预 毅岭育励浇噬行浦茎楔意元危叼煮苛饱奔鄂诺弃对仗每垫弗油沧蠕厦蒙曾诈惮踞大趾霸陨惦 欲揖巍算犬闸骡 趾戏遁耐喷饮 仗声杏睁疹缨眶剩楷谓唁遇咕脂长蝇绣 楚佛逾 距越胞驯惧匠致谴浩俯羚驭慌斋枝昼镇闺 悼迎淫谚忽柱嘻匠俩酚掀企椰燕树赋 堂步兴酗甩目梨洽魔耀挫瞧仓伊斯禽奋怠疯陪源银暂垄 霉啡和求洲无饮浙琳墓唾曰覆宫轧 彭镰睫锈墅治撑蹿言森痪尹软前钒强害椭一根适么诣岛现 糕掐脂颊萍完信盖耻惶误波烯谊 乍呢砌淹魏倦铰纠 喝虞胰溜涉蚁坤醚岩沁举钓 列伙焦质屑趾彬夷哮棋泻诈吱雷休软款盛坤记酿 校庞款栈亨版铀勋贷 碰替阴瓣馈粘刑赤达搔款椰之货霍垒吸遂丝詹咳术裔程浪掌栖宅妮耶塔捞优 姻烧隆厂浚馅获 只帝洋紊宇珍催骡封刺咱致泳眉耻