动物细胞融合和单克隆抗体制备.ppt

杂种植株,筛选融合AB的原生质体,再生出细胞壁,脱分化,愈伤组织,再分化,植物细胞的融合,植物组织培养,植物细胞A,原生质体B,原生质体A,杂种细胞AB,去壁,去壁,人工诱导,方法？,促进融合的方法？,融合完成的标志,植物细胞B,植物体细胞杂交技术过程,原理？,原理？,动物细胞融合与单克隆抗体,一、动物细胞融合,1、动物融合的过程.细胞融合的概念.诱导动物细胞融合的方法.意义,2、动物细胞融合的概念,动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程,思考题,1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？,酶解法，如纤维素酶或果胶酶,2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？,无需，因为动物细胞无细胞壁,3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？,离心、电激等物理方法；PEG等化学方法,4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？,能还可以利用灭活的病毒进行诱导,5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？,不能,1.前几天大概十点钟的时候，我在写文章。突然收到母后的短信：“儿子，下班了没？冲凉了吗？这段时间忙不忙？我很久没加班呢，每天都是五点半下班，井么办？房租又贵。你一个人在外面要保护好身体。有烦老的事情就上他过去，不要放在心里。好吗？听话！”你没有看错，这不是我笔误，确实是我妈发过来的原文，短短一百来字有好几处错别字。我妈文化水平不高，小时候因为家里穷，根本上不起学，所以连小学未毕业就辍学了。我妈并不是在什么好的单位上班，而是在广东和千千万万的普工一样，做着一些流水线上的事情。大学有一年暑假，我在她所在的那个工厂上了半个月的班，然后就再也坚持不下去了。在那里，接近40度的高温，里面却没有空调，甚至连风扇都是隔了好远才有一把。上一天的班，身上总会被汗水浸湿又干掉然后又浸湿，来来回回好几遍。我们上班的时候，总是期待着少加些班，多放些假。可是我的父母，却总是期盼着能多加点班，这样就有高出平时上班工资一半的加班费。因为他们在外面租房贵，如果没有加班费，每个月除去开销基本上就剩不下什么钱了。从小到大，家境算不上富足，但是因为父母的努力，也并不是很贫寒，凡是我想要的，他们都会,不同DNA的两个细胞,灭活病毒诱导细胞融合,融合后的细胞进行有丝分裂,1、动物细胞融合过程,4、原理,细胞膜的流动性,5、最有价值的应用,制备单克隆抗体,3、过程,不同DNA的两个细胞,灭活的病毒,PEG等,杂交细胞,细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核,动物细胞融合,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物体细胞杂交,去壁,原生质体融合,植物组织培养,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振动、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是A离心B灭活的病毒C电刺激D振动,2.动物细胞融合的目的中最重要的是A克服远源杂交不亲和B制备单克隆抗体C培育新物种D生产杂种细胞,7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？,思考题,利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞,8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？,生产单克隆抗体,请同学们阅读课本P52,1.抗体是由何种细胞产生的？、一个淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？,二、单克隆抗体,每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。,浆细胞,一种,抗体不纯,.简述获得抗体的传统途径？,、这种方法获得的抗体有什么缺陷？,6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？,体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体,7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?,不能,怎样解决这个问题？,设计方案：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交细胞,二、单克隆抗体,为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？,思考：,因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,培养液中细胞有几种类型？（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？,5种B淋巴细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞-B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞3种骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞-B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞,多种杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,2、单克隆抗体的制备过程,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高,2.制备过程：,诱导其融合的方法有哪些？,注射抗原的目的是什么,大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法,融合后培养液中有几种细胞,两次筛选的原因,2、单克隆抗体制备过程,B淋巴细胞骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞（B-瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,产生所需抗体的杂交瘤细胞,体外培养,单克隆抗体,课堂小结,单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？,动物细胞融合技术动物细胞培养技术,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,【堂堂清】,1.单克隆抗体的优点是_,特异性强、灵敏度高、可大量制备,2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是_,每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体,3.产生抗体的细胞是_产生单克隆抗体的细胞是_,效应B细胞（浆细胞）,杂交瘤细胞,4.杂交瘤细胞的特点:_,既能无限增殖，又能分泌特异性抗体,5.首次筛选是为了获得_第二次筛选时为了获得_,杂交瘤细胞,既能无限增殖，又能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞,第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。,实验评价,1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠,2、B淋巴细胞,3、选择培养基,4、必须经过专一抗体阳性检验,下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。,3.单克隆抗体的应用：,在基础理论研究中具有重要意义,在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性高、灵敏度高等优越性。,生物导弹,二、单克隆抗体,比较植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备,细胞膜的流动性、细胞的全能性,膜的流动性、细胞增殖,酶解法去壁,小鼠免疫处理、细胞分散,物理法化学法,物理、化学、生物法,原生质体的制备,融合亲本细胞的准备,原生质体的融合与筛选,动物细胞融合与两次筛选,杂种细胞的形成与培养,产特定抗体的杂交瘤细胞培养,杂种植株的鉴定,单克隆抗体的分离提纯,单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防,获得具优良性状的杂种植株,4、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的淋巴细胞,5、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A、B、C、D、,6下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：,（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。（2）B过程是一个_过程，该过程的进行需要灭活的_或_的诱导。,免疫的B淋巴,特异性抗体,特定抗原,细胞融合,病毒,聚乙二醇,7右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果