第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测ppt课件.ppt

第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 黑龙江中医药大学临床医学院诊断教研室黄萍 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 第一节概述一 何为ENA ENA Extractablenuclearantige 盐水可提取性核抗原的总称 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 核抗原 组蛋白 不溶于水DNA 不溶于水ENA 可溶于生理盐水是非组蛋白核蛋白 属酸性核蛋白抗原 是许多小分子量的RNA和多肽组成 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 二 多肽抗体谱ENA抗体是指能与核中盐水可提取抗原发生特异性结合抗体 既是抗核抗体的一部分 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 ENA多肽抗体谱是由许多小分子量的RNA和多肽组成 不同的uRNA各有其相应的抗体 目前发现的相应的抗体已有十余种 其中 国际上共认的对风湿有特异的诊断价值的有七种 故将这七种抗体叫做多肽抗体谱 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 三 免疫印迹免疫印迹 ImmunoblotIBT 又称免疫转印技术 是一项新的生化技术 它对研究工作的影响与内切酶的发现和PCR的基因扩增技术是等量齐观的 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理 将凝胶电泳与固相免疫结合起来 其主要的操作过程分三个步骤 1 分离盐水可提取抗原 ENA 中多肽按分子量的大小 先用SDS 聚丙烯酰胺凝胶分离 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理 2 转移将分离的组份从凝胶上转移到固相基质上 如硝酸纤维膜 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理 3 测定对转移后的组份进行免疫法测定 显示出蛋白带 既通过抗体的反应 用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽 呈显色带 的数量与分子量 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理 免疫转印技术实际上是一项将凝胶电泳技术 固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的免疫转印技术 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点 1 高分辨率免疫转印技术综合了电泳技术分辨率强的特点 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点 2 高灵敏度免疫转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点 可检出最小蛋白质1pg 10 12g 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点 3 高特异性免疫转印技术综合了免疫反应特异性 根据抗原抗体的特异反应 同一条蛋白印迹上可做多项分析 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点 4 高度稳定性蛋白印迹膜便于保存 可存放6 12个月 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点 5 设备简单 操作容易免疫转印技术在临床检验中必有远大前程 并可能代替许多现有的传统检验方法 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 第二节检测对象ENA多肽抗体谱早期诊断SLE和多种风湿病 有较高的特异性和敏感性 有助于结缔组织病的诊断和鉴别诊断 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 一 风湿病的定义风湿病学是一门以内科学和临床免疫学为基础的新兴学科其研究的对象是风湿性疾病 包括所有不同原因 以及不明原因引起的骨 关节 肌疾病 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 广义 涉及所有骨 关节 肌肉疼痛和炎症的疾病感炎性 莱姆 Lyme 氏病代谢性 痛风内分泌性 甲状旁腺功能亢进遗传性 粘液多糖病退化性 骨关节炎生态环境性 大骨节病 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 狭义 主要指自身免疫性结缔组织疾病类风湿性疾病骨关节炎 RA 系统红斑狼疮 SLE 干燥综合症 SS 硬皮病 PSS 皮肌炎和多发行肌炎 DM PM 混合性结缔组织病 MCTD 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 二 适应症1 临床上怀疑有风湿性疾病 结缔组织病或自身免疫性疾病 需进一步确诊者 2 已诊断为某种风湿性疾病 但需明确是否合并其它风湿性疾病 以指导治疗者 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 二 适应症3 诊断未明 但有下列症状 需排除或确诊何种风湿性疾病者 原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛 淋巴结肿大或白血球减少或血小板减少或溶血性贫血 皮疹或不典型面部红斑 光敏感 蛋白尿 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 心包炎或胸膜炎 癫痫或精神 神经症状 习惯性流产 雷诺氏现象 肿胀手或手指 足趾皮肤变硬 第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 肌肉有压痛或抬臂 下蹲起立时困难 下肢出现网状青紫 肺间质病变或肺动脉高压 经常口干 眼干 或反复腮腺炎 易口腔溃疡或大量脱发 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 吞咽困难 食道蠕动减弱 青年女性有偏头痛 荧光抗核抗体阳性 关节疼痛 长期反复性原因不明低热 第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 三 送检标本血清 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 四报告方式反应抗体分子量1 抗Sm抗体 29 28KD 13 5KD2 抗u1RNP抗体 73KD 32KD 17 5KD3 抗Scl 70抗体 86KD 70KD4 抗SSA抗体 52KD5 抗SSB抗体 48 47KD 45KD6 抗JO 1抗体 55KD7 抗Rib抗体 38KD 16KD 15KD 表示有该种自身抗体 表示无该种自身抗体 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 第三节临床意义 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 临床意义一 抗Sm抗体1 Sm为病人Smith 发现抗体的第一位病人 的名字缩写2 抗Sm抗体是酸性糖蛋白3 是目前公认的系统性红斑狼疮 SLE 标记抗体 有利于SLE的早期诊断 注意 关键是13 5KD一般是13 5KD和29 28KD同时出现 若单独出现29 28KD 无13 5KD不能判断抗Sm抗体阳性4 阳性率30 50 仅见于本病 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 临床意义二 抗u1RNP抗体 抗RNP 1 是混合性结缔组织病 MCTD 的一项重要血清学特征 2 阳性率可达95 以上 3 73KD 国外报导为70KD 和32KD可同时出现 也可分别出现 17 5KD常拌73KD和32KD 一起出现 单独出现少见 4 其它结缔组织病的阳性率系统性红斑狼疮 SLE 30 干燥综合症 SS 20 硬皮病 PSS 7 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 临床意义三 抗Scl 70抗体1 抗Scl 70抗体中的SclSclerosis的缩写70代表抗原分子量 为70KD 70000 2 是弥漫型硬皮病 PSS 的标记抗体 3 阳性率可达50 64 4 在86KD和70KD两区带间有时可见到两条较弱的区带 是100KD的降解产物 两区带一般同时出现 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 临床意义四 抗SSA抗体 抗RO抗体 1 SS为干燥综合症 Sjogren ssyndrome 的缩写 A为抗原子序列号2 曾以最先查到此抗体患者名字命名 又称抗RO抗体 3 对干燥综合症 SS 诊断有意义 阳性率70 80 合并SLE30 50 单纯SLE8 10 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 临床意义四 抗SSA抗体 抗RO抗体 4 可见于其它多种自身免疫性疾病 包括SLE 硬皮症 多发性肌炎和类风湿关节炎等疾病 5 该抗体阳性也可引起亚急性皮肤狼疮的皮损与SLE的广泛光过敏性皮炎也相关 IgG类抗SSA抗体通过胎盘进入胎儿后可引起新生儿狼疮综合症 6 个别因抗体与心脏的传导系统相结合可造成先天性心脏传导阻滞 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 临床意义五 抗SSB抗体1 抗SSB抗体常伴随抗SSA抗体同时出现 2 抗SSB和抗SSA抗体并存 对诊断SS 干燥综合症 有特异性 3 48KD 47KD 45KD三区常不仅同时出现 也与52KD区带同时出现 但48 47KD有时很弱 不易分辨 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 临床意义六 抗JO 1抗体1 是Pm Dm 肌炎 皮肌炎 公认的标记抗体 阳性率25 40 2 主要见于多发性肌炎 Pm 在皮肌炎 Dm 中阳性率较低 3 抗JO 1抗体该抗体阳性患者常会同时出现肌炎 肺部间质性病变的关节炎等症状 易被临床误诊为慢性肺部感染或类风湿关节炎 4 确定55KD需要慎重 因为临床意义不明为54 56KD和55KD在位置上相差不到1毫米 第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 临床意义七 抗Rib抗体 抗核糖体抗体 1 抗Rib抗体又称抗核糖体抗体 rRNP 抗rRNP抗体 2 主要见于SLE 是SLE的另一血清学标记抗体 阳性率20 30 该抗体阳性与SLE的中枢神经系统病变相关 谢谢 后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用 主要经营 网络软件设计 图文设计制作 发布广告等公司秉着以优质的