磷脂在不同溶剂中的稳定性研究 论文

毕业论文（设计）题目磷脂在不同溶剂中的稳定性研究指导老师专业班级生物技术及应用071姓名学号2010年5月31号A1A0A2A3A4A5A6A7A9A10A8A12I摘要本文对磷脂在甲醇、氯仿、氨水按不同比例配制成溶剂中的稳定性进行了研究，为卵磷脂的生产工艺提供参考。研究结果表明，在考察的28天内，三乙胺和氨水的加入使得磷脂含量均随着时间的延长呈现下降的趋势，且三乙胺和氨水的加入量越大，这种变化的趋势越明显。这说明在三乙胺或者氨水存在的有机溶剂中PE和PC是不稳定的。此结果可以为卵磷脂和脑磷脂的制备工艺工业化提供了基础数据。关键词卵磷脂；稳定性；甲醇；氯仿；氨水A1A0A2A3A4A5A6A7A9A10A8A12II目录引言11实验材料211原料与试剂212仪器22实验方法221卵磷脂的测定方法222卵磷脂稳定性的测定方法33结果与分析331洗脱液的不同组成对PE含量的影响332洗脱液的不同组成对PC含量的影响433洗脱液的不同组成对未知物G17148X含量的影响434G7621G4630析G8981G1998G7691G2709的G11713G7411稳定性研究64结G16782741卵磷脂在三乙胺或氨水中是不稳定的742卵磷脂在G1660存G17819G12255中G1998现了未知物G17148743卵磷脂在G1660存G17819G12255中PC和PE稳定性研究8参考文G104989A11A13A14A15A16A17A18A19A20A21A22A231引言磷脂G7234G17953存在G1122G2172G7905物G13466G14002的原生G17148和生物G14192中，对生物G14192的生G10714G8975性和机G1319的G8503G5132G1207G16886有G18337G16213的G16855G14422G2163G14033，同时G4439G1867有G14403G3921的G1095化性和G6251G8699化性，G3252G13792G15999G5203G8879G5224G11004G1122G20147G2709、G2319G14659、化G3930G2709G12573行业。卵磷脂1和脑磷脂是G1866中G1016种G18337G16213的磷脂，化G4410G2529G12228分G2047为磷脂G18244G13978G11909G708PHOSPHOTIDYLCHOLINE，G12628G12228PCG709和磷脂G18244乙醇胺G708PHOSPHATIDYLETHANOLAMINE，G12628G12228PEG709。G20652G13443G5242磷脂产G2709G1867有G7092G5334G2631、G1095化性G14033G5390G12573G10317G9869，G5224G11004G7368为G5203G19432，G3281内G3818G19668G8726量在G17892G5192G3698加。G11458G2081G6117G3281G21493G15519G1039G16213为G20147G11004，加工G10587G1314G2460不G1427G1122G17828G17767，G17908成大G16280G8181G12177G15519G20294G1871G3332G3926G1008三G11477的G21493G15519供G17819G1122G8726，G1227G7696G1571G1314，加G990G17829G5192G7481G20294料G1227G7696G990G9084，使G980G1135G1237业G1998现G1123G6451。G8611G1022G21493G15519中大G13434含有6G磷脂且G2494存在G1122卵G21656中，G5647卵G21656G5190物G17148中G14279G458166的脂肪，G3252此卵G21656G15999认为是极G1867潜力的G18337G16213磷脂G7481源。同时卵G21656卵磷脂G1867有G20652收集G10587、稳定性G3921，G1867有大豆卵磷脂所不G1867备的G980G1135优G9869。G3252此开发G1998适合G6117G3281G3281情的G20652G13443G5242G15519G21656磷脂2制备方法G1867有G18337G16213的意义。卵磷脂G4439由极性脂G708磷脂、糖脂G709、非极性脂G708甘油三酸脂、固醇、游离脂肪酸G709以及极G4581量的G1866G4439物G17148组成的复杂混合物36。但由G1122卵磷脂富含不饱和脂肪酸，易G15999G8699化从G13792产生G980系列G17819G8699化脂G17148，影响G1866生G10714G8975性。G3252此，关G1122卵磷脂稳定性方面的探讨对G1122提G20652G1866G2709G17148有G18337G16213现实意义。磷脂由G1122G1866G10317殊的结构，使之G1867有可反G5224性，G1039G16213表现在酯键、脂肪酸和磷脂的X基G708即CH2CH2NCH33G709G990，可发生水解、G8699化、羟基化、氢化G12573反G5224。卵磷脂含有的不饱和脂肪酸结构使G1866易G1122发生自G2172G8699化79。PORTERETAL发现磷脂中不饱和脂肪酸的自G2172G8699化与游离酸或甲酯相似。初始产物是自由基引发形成的二烯氢G17819G8699化物。极谱分析表明链反G5224产物依次为氢G17819G8699化物、G17819G8699烃类、不饱和脂肪醇G708不确定G709和醛、酮。ORLOVETAL发现PCG15999G8699化后的荧光光谱类似G1122G8699化的脂肪酸。G8699化作G11004是影响卵磷脂稳定性的G1039G16213G3252素。在卵磷脂的提取和精制G12573生产G17819G12255中G19668G11004到丙酮、乙醇G12573各种有机溶剂，并且各工艺中的各种G1867G1319的影响G3252素G708介G17148、含水量、温G5242及PH值G12573G709差G2047较大，G3252此G19668G16213开展工艺条件对PC稳定性影响的研究。G11458G2081这G980方面的研究报道较G4581。G3252此，本实验通G17819研究不同溶剂中的卵磷脂的稳定性为G1866生产工艺提供G10714G16782指导。A11A13A14A15A16A17A18A19A20A21A22A2321实验材料11原料与试剂卵磷脂粗G2709G708溶剂提取法自制G709；G15519G21656PC、PE标G7691G708SIGMA公司G709；粗提磷脂G708实验室自制G709；乙腈G708色谱G13443，MERCKG709；甲醇G708色谱G13443，MERCKG709；氯仿G708色谱G13443，MERCKG709；氨水G708色谱G13443，MERCKG709；超G13443水。配制下列组成的溶剂G708均为G1319积比G709G7081G709甲醇氯仿80120G7082G709甲醇氯仿氨水801202G7083G709甲醇氯仿氨水801205G7084G709甲醇氯仿氨水8012010G7085G709甲醇氯仿氨水8012015G7086G709甲醇氯仿三乙胺801202G7087G709甲醇氯仿三乙胺801205G7088G709甲醇氯仿三乙胺8012010G7089G709甲醇氯仿三乙胺801201512仪器仪器AGILENT1100型G20652效液相色谱仪G708包括四元梯G5242泵、在线脱气机、自G2172进G7691器、G7621温箱、UV检测器G709；LICHROSORB5SI60色谱G7621G70846250MMG709。棕色、透明钳口密封小瓶G708G4445G6475G1274G12197G6228公司G709。2实验方法21卵磷脂的测定方法色谱G7621为LICHROSORB5SI60色谱G762110G70846250MMG709；G7621温为室温，检测G8886长取206NM；G8981G17907为10ML/MIN。G8981G2172相配比为乙腈甲醇水652510V/V11。G18331G11004G3818标法定量，G7693据不同组分的G4804面积G13484制G8981G1998G7366线，进G13792对PC、PE进行G3250收G10587的G1284G12651。22卵磷脂稳定性的测定方法A11A13A14A15A16A17A18A19A20A21A22A233G4570自制粗磷脂分G2047溶解在G990G17860溶剂中，配成100MG/ML的溶液。G4570这G1135溶液分G16025G3921，各G1602520瓶，密封，在室温下G6930G13634在G19464G1949G18003光G3800。G19560G980G8585时间各取2G1022G7691G2709进行HPLC分析，G1582G5191行对G10043。通G17819对各组PC、PEG4804面积比较，考察G7691G2709中PC、PE含量随时间的变化情G1929，并取G4804面积G5191均值，作变化G7366线12。3结果与分析31洗脱液的不同组成对PE含量的影响洗脱液的不同组成对PE含量的影响G16277G328231、G328232。由G328231和32可以G11487G1998，甲醇氯仿溶剂对PE的稳定性G8821有影响，这与G5062有的稳定性研究结果相G2575合。G5415加入G980定量的三乙胺和氨水，PE含量随着时间的延长G13792不G7041G1955G4581。并且随着三乙胺和氨水加入量的G3698大，这种G1955G4581的G5145G5242G1075G17892G8505G3698大。这表明，在含有三乙胺和氨水的洗脱G1319系中，脑磷脂PE是不稳定的，并且三乙胺和氨水越G3822越不稳定。A24A25A25A25A26A25A25A25A27A25A25A25A28A28A25A25A25A28A29A25A25A25A28A24A25A25A25A28A26A25A25A25A28A27A25A25A25A30A28A25A25A25A25A30A31A32A33A28A25A28A30A28A31A28A32A28A33A30A25A30A30A34A35A36A37A38A39A40A41A42A43A44A30A45A46A47A48A49A24A45A46A47A48A49A28A25A45A46A47A48A49A28A24A45A46A47A48A49图31不同三乙胺加入量的洗脱液中PE含量的变化曲线A50A51A50A50A50A52A50A50A50A50A52A51A50A50A50A53A50A50A50A50A53A51A50A50A50A50A53A54A55A56A52A50A52A53A52A54A52A55A52A56A53A50A53A53A57A58A59A60A61A62A63A64A65A66A67A53A68A69A70A71A51A68A69A70A71A52A50A68A69A70A71A52A51A68A69A70A71图32不同氨水加入量的洗脱液中PE含量的变化曲线32洗脱液的不同组成对PC含量的影响洗脱液的不同组成对PC含量的影响G16277G328233、G328234。由G328233和34可以G11487A11A13A14A15A16A17A18A19A20A21A22A234G1998，甲醇氯仿溶剂对PC的稳定性G8821有影响，这与G5062有的稳定性研究结果相G2575合。G5415加入G980定量的三乙胺和氨水，PC含量随着时间的延长G13792不G7041G1955G4581。并且随着三乙胺和氨水加入量的G3698大，这种G1955G4581的G5145G5242G1075G17892G8505G3698大。这表明，在含有三乙胺和氨水的洗脱G1319系中，卵磷脂PC是不稳定的，并且三乙胺和氨水越G3822越不稳定。A72A73A74A74A74A72A75A74A74A74A72A76A74A74A74A72A77A74A74A74A73A74A74A74A74A73A73A74A74A74A73A75A74A74A74A73A76A74A74A74A74A73A75A76A77A72A74A72A73A72A75A72A76A72A77A73A74A73A73时间/天PC峰面积A78A79A73A80A81A82A83A84A85A80A81A82A83A84A72A74A80A81A82A83A84A72A85A80A81A82A83A84图33不同三乙胺加入量的洗脱液中PC含量的变化曲线A86A87A86A86A86A88A86A86A86A86A88A87A86A86A86A89A86A86A86A86A89A87A86A86A86A90A86A86A86A86A86A89A91A92A93A88A86A88A89A88A91A88A92A88A93A89A86A89A89时间/天PC峰面积A94A95A89A96A97A98A99A87A96A97A98A99A88A86A96A97A98A99A88A87A96A97A98A99图34不同氨水加入量的洗脱液中PC含量的变化曲线33洗脱液的不同组成对未知物质X含量的影响在稳定性试验中，随着时间的延长，在G15519G21656磷脂溶液中G1998现了G980种未知物G17148X。在HPLC谱G3282中可以G11487到G4439的存在。G3926G328235，在G17329PEG4804不G17840的G2503G1403有G980G1022小的A100A101A102A103A104A105A106A107A108A109A110A1115G4804。这G1022G4804在G7044G21104的粗磷脂溶液，G3926G328236和溶剂的HPLC谱G3282中G18129是不存在。G4439可G14033是PC或PE的降解产物。图35第28天时，甲醇氯仿三乙胺8012015的100MG/ML蛋黄磷脂溶液的HPLC谱图图36第0天时，甲醇氯仿三乙胺8012015的100MG/ML蛋黄磷脂溶液的HPLC谱图MIN024681012141618MAU0250500750100012501500175020001829211223362402757289230953783PE4646X6585PC32991443118995I64646658513299PEPCA112A113A114A115A116A117A118A119A120A121A122A1236A124A125A124A124A126A124A124A124A126A125A124A124A127A124A124A124A127A125A124A124A128A124A124A124A128A125A124A124A124A127A129A130A131A126A124A126A127A126A129A126A130A126A131A127A124A127A127时间/天X峰面积A132A133A127A134A135A136A137A138A125A134A135A136A137A138A126A124A134A135A136A137A138A126A125A134A135A136A137A138图37不同三乙胺加入量的洗脱液中未知物质X含量的变化曲线A139A140A139A139A141A139A139A139A141A140A139A139A142A139A139A139A142A140A139A139A143A139A139A139A143A140A139A139A139A142A144A145A146A141A139A141A142A141A144A141A145A141A146A142A139A142A142A147A148A149A150A151A152A153A154A155A156A157A158A159A160A161A162A158A159A160A161A163A164A158A159A160A161A163A162A158A159A160A161图38不同氨水加入量的洗脱液中未知物质X含量的变化曲线G16825未知产物的含量随着时间的变化G8821有G13491G980的G16280G5471，G7693据分析，有可G14033是磷脂与G11909反G5224的产物。34柱层析流出样品的短期稳定性研究在实验G17819G12255中，对比较G1868型的G7691G2709G708同时含有较G3822的PC和PEG709进行G17842G13505G17331G17406考察，以确定磷脂含量变化的G7380G11713时间，并且验G16789以G990的稳定性实验结果。基G1122以G990的磷脂稳定性考察结果，认为含有10ML氨水的洗脱G1319系变化G7380为明显，G1122是G17885G6333了配比分G2047为甲醇氯仿氨水1208010和甲醇氯仿氨水8012010G1016G1022洗脱G1319系的G7588G980G7691G2709进行了G11713G7411稳定性考察，考察G2620G7411分G2047为85和65小时。A165A166A167A168A169A170A171A172A173A174A175A1767A177A178A179A180A181A182A183A184A185A179A180A181A186A187A184A177A179A180A181A188A189A190A191A190A190A190A192A190A190A190A190A192A191A190A190A190A193A190A190A190A190A193A191A190A190A190A194A190A190A190A190A190A191A192A190A192A191A193A190A193A191A194A190A194A191A195A190A195A191A191A190A191A191A196A190A196A191A197A190A197A191A198A190A198A191A199A200A201A202A199A203A204A205A206A207A206A208A209图39实际样品的短期稳定性考察A210A211A212A213A214A215A216A217A218A211A212A213A219A220A216A217A211A212A213A221A222A223A224A223A223A223A223A225A223A223A223A223A226A223A223A223A223A227A223A223A223A223A228A223A223A223A223A229A223A223A223A223A230A223A223A223A223A223A228A224A223A224A228A225A223A225A228A226A223A226A228A227A223A227A228A228A223A228A228A229A223A229A228A231A232A233A234A231A235A236A237A238A239A238A240A241图310实际样品的短期稳定性考察从G328239、G3282310的实验结果G7481G11487，脑磷脂PE在氨水存在的有机溶剂中是G5468不稳定的。考察的G12544G980G1022分析G9869分G2047为G1254414小时和12小时，这时的PE含量G4613有明显的下降。PC在实验G14551G3272内的含量变化G5468小，说明卵磷脂相比较G1122脑磷脂稳定G980G1135。未知物G17148X在实验的G12544G980G1022分析G9869G4613可以检测到，据此G6117G1216可以G6524G7041，G16825物G17148G5468有可G14033是PE的反G5224或者降解产物；这G19668G16213进G980G8505的实验研究进行验G16789。4结论41卵磷脂在三乙胺或氨水中是不稳定的在本实验考察的28天内，三乙胺和氨水的加入使得PC、PE的含量均随着时间的延长呈现下降的趋势，且三乙胺和氨水的加入量越大，这种变化的趋势越明显。这说明在三乙胺或者氨水存在的有机溶剂中PE和PC是不稳定的。42卵磷脂在储存过程中出现了未知物质随着时间的延长，G15519G21656磷脂溶液中G1998现了未知物G17148X。G4439可G14033是在氨水和三A165A166A167A168A169A170A171A172A173A174A175A1768乙胺存在的条件下PE的降解或者反G5224产物。关G1122未知物G17148X的产生机G10714、G10714化性G17148以及生G10714G8975性G12573G17836G19668G16213进G980G8505的实验研究。43卵磷脂在储存过程中PC和PE稳定性研究对生产实践具有指导意义对G1016种G7621G4630析G8981G1998液G7691G2709的稳定性进行了G11713G7411的稳定性研究。发现PE在较G11713的时间内G4613G1262发生含量的明显变化，G13792PC相比较稳定G980G1135。磷脂在不同组成溶剂中的稳定性研究对G6521下G7481的实验以及生产实G17353G1867有指导意义。A165A166A167A168A169A170A171A172A173A174A175A1769参考文献1G19484G2347G13713,封G12120G11012卵磷脂的G5224G11004与开发J化G4