上海科华HBsAgELISA两步法

1、医院检验科免疫室乙型肝炎病毒外表抗原诊断试剂盒酶联免疫法标准操作规程文件编号：生效日期： 年 月 日版本：第1版第页,共页1、检验申请单独检验工程中请：乙型肝炎病毒外表抗原缩写 HBsAg测定；组合工程 申请：肝炎标志物检查组合.临床医生根据需要提出检验申请.2、 样本采集与处理2.1 样本采集2.1.1 常规静脉采血约2ml,不抗凝,置普通试管中,或采用含别离胶的真空采 血管.也可采集血浆,用肝素、EDTAIE枸檬酸盐抗凝.2.1.2 检验申请单和血样本试管标上统一且唯一的标识符.2.1.3 急诊样本采集后,在检验申请单上填写样本采集时间.2.1.4 样本采集后与检验申请单一起及时运送至检验

2、科.专人负责样本的接收 并记录样本的状态,对不合格样本予以拒收.2.1.5 以下样本为不合格样本2.1.5.1 样本量缺乏：少于0.3ml的全血样本,或少于0.1ml的血清或血浆.2.1.5.2 对检测结果可能有干扰的样本,包括严重溶血、严重浑浊的样本.2.1.5.3 无法确认样本与申请单对应关系的.2.1.5.4 其他如标识涂改、样本试管破裂等.2.2 样本保存2.2.1 接收样本后放置1-2h后将样本离心别离出血清或血浆,防止溶血.离心 必须到达3000rpm 15min,离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白.2.2.2 样本保存时间：室温15-25 C下可稳定48h,普通冰箱中2-

3、8 C稳 定7d,在-20 C最多可保存4周.防止反复冻融.不可使用热灭活的样本.2.2.3 已完成测试的样本保持完整的识别号,置4-8 C冰箱内保存7d.2.3 样本采集的考前须知采血前使受检者保持平静、松弛,防止剧烈活动.医院检验科免疫室乙型肝炎病毒外表抗原诊断试剂盒酶联免疫法标准操作规程文件编号：生效日期： 年 月 日版本：第1版第页,共页3.检验原理本试剂盒采用抗-HBs包被反响板,参加待测样本,经孵育后,参加抗-HBs-HRP；当样本中存在 HBsAg寸,该HBsAgf包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP 结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物,参加TMB

4、74;物产生显色反响,反之 那么无显色反响.4 .试剂及其他用品4.1 试剂：乙型肝炎病毒外表抗原诊断试剂盒上海科华生物工程股份生产,试剂盒药品批准文号：国药准字S1091011448人份；国药准字S1091011396人份.未翻开的试剂盒保存于2-8 C,不可冻存.开启的包被反应板放入枯燥剂密封后在4.2 试剂盒组分微孔反响板HBsAg阳性对照显色剂A终止液封片纸4.3 其他试剂及用品加液器：型号离心机：型号2-8 C保存并尽快使用.HBsAg阴性对照酶结合物显色剂B洗涤液蒸储水1: 25稀释说明书温箱或水浴箱：型号.洗板机：型号.酶标仪：型号.5 .室内质控与室内质控规那么5.1 质控品：

5、采用卫生部临床检验中央临床免疫室或其他单位提供的免疫质控 血清,浓度 IU/ml医院检验科免疫室乙型肝炎病毒外表抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程文件编号：生效日期： 年 月 日版本：第1版第页,共页5.2 质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装 -20 C冻存,复融后充分 颠倒混匀.5.3 质控品测定：在每一次(板)样本中测定质控血清.5.4 质控规那么：绘制质控图,求出 SD和CV值.6 .检测步骤(1)洗涤液配制： 将浓缩洗涤液用蒸储水(或去离子水)作 1: 25稀释.(2)加样参加75微升待测样本和阴、阳性对照于反响孔中(共预留阴性对照3孔、 阳性对照1孔、建议预留空白对照

6、1孔.),用封片纸覆盖反响板后,将 反响板置37c孵育60分钟.(3)取出反响板,撕去封片,在已参加待测样本和阴、阳性对照的孔中参加50微升酶结合物；在微孔震荡器上震荡 10秒钟,或手工轻轻震荡10秒 钟；用封片纸覆盖反响板后,将反响板置 37 c孵育30分钟.(4)洗板手工洗板：弃去孔内液体,用洗涤液注满各孔,静置 30-60秒,甩干, 重复5次后,在干净的吸水纸上拍干.洗板机洗板：采用 洗板机洗板,选择洗涤 5次程序,用配置的工 作浓度洗涤液注满每孔,每次工作浓度洗涤液在反响微孔 中的停留时间为30-60秒,并保证每次吸净无残留,洗完 后在干净的吸水纸上拍干.5 5) 显色每孔加显色剂A液

7、、B液各50微升,充分混匀后封板,置 37 C 孵育30分钟.6 6) 终止每孔参加50微升终止液,震荡反响板5秒钟,使之充分混匀医院检验科免疫室乙型肝炎病毒外表抗原诊断试剂盒酶联免疫法标准操作规程文件编号：生效日期： 年 月 日版本：第1版第页,共页7比色使用 酶标仪,波长450ns 建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm或630nm相近的波长.假设需扣除显色剂空白,那么先用显色剂空白对照孔校零,然后读取各孔 ODfi.7 .结果判断Cutoff值计算：COV阴性对照平均ODfi +0.100当S/CO诊1.0,说明该待测样本HBsAg吉果为阳性.当S/COV： 1.0,说明该待测样

8、本HBsAg吉果为阴性.8 .检验结果的报告及范围8.1 结果的报告8.1.1 结果经审核后,确认准确无误后发出报告.8.1.2 报告单上标明结果的参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名, 并有与申请单相同的信息.8.1.3 如收到样本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出.8.2 临界值：对临界值样本或阳性样本再以双孔重复试验确定它的结果.如果重复检测都是临界性结果的样本建议对其进行跟踪检测.9 .操作性能9.1 从冷藏环境中取出的试剂盒需平衡至室温前方可使用,余者应按前述方法保存和使用.在平衡试剂的同时,待测样本需平衡至室温后再行测试.9.2 使用前试剂应摇匀.9.3 显色过程

9、必须封片.所有封片纸不能重复使用.9.4 结果判断须在反响终止后10分钟内完成.9.5 不同批号的试剂不可混用.9.6 洗板机洗板时应时常检查加液头,保证其畅通无堵塞；洗板时所用的吸水 纸请勿反复使用.洗板机的管路用纯化水冲洗,以防堵塞和腐蚀.医院检验科免疫室乙型肝炎病毒外表抗原诊断试剂盒酶联免疫法标准操作规程文件编号：生效日期： 年 月 日版本：第1版第页,共页9.7 待测样本不可用NaN防腐.9.8 本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程处理10 .参考范围及医学决定水平阴性结果：提示没有检测到与乙型肝炎病毒感染相关的HBsA璐度水平.11 .临床意义11.1 乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病,据估计全球范围内目前大 约有3亿乙型肝炎病毒携带者.感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝 脏疾病,流行病学研究已经清楚地说明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系.11.2 感染乙型肝炎病毒后,机体会产生各种不同模式的抗原、抗体血清学免疫 应答反响.通过监测这些标志物,不仅可以诊断感染,而且还可以判断疾病的 进程和预后.HBsA谓HBV感染后第一个出现的标志物,是提示血清有潜在传染 性的最好的间接指标.12 .结果审核以及分析与相关工程的联系12.1 由资深专业人员负责检验结果的审核.12.2 审核者认真审核每一个测定结果,对发出报告结果的可靠性