病理论文集 内毒素 病理 论文集 致病 大肠杆菌 病理学

1、- PAGE 89 -中国畜牧兽医学会西南地区兽医病理学分会第五次学术讨论会论文集云南昆明目 录 TOC o 1-1 h z u HYPERLINK l _Toc78429908 大肠杆菌对藏鸡的致病性研究 PAGEREF _Toc78429908 h 1 HYPERLINK l _Toc78429909 山羊痘的病理形态学观察 PAGEREF _Toc78429909 h 6 HYPERLINK l _Toc78429910 山羊痘病变的超微病理学观察 PAGEREF _Toc78429910 h 11 HYPERLINK l _Toc78429911 贵州山羊痘的病原学研究与血清学检测 P

2、AGEREF _Toc78429911 h 16 HYPERLINK l _Toc78429912 三种不同药性中药制剂对内毒素性肾衰的防治作用及其机理的比较研究 PAGEREF _Toc78429912 h 22 HYPERLINK l _Toc78429913 奶牛类乙型肝炎组织病理学观察 PAGEREF _Toc78429913 h 24 HYPERLINK l _Toc78429914 内毒素介导的动物急性肾功能衰竭及其发生机理的实验研究 PAGEREF _Toc78429914 h 26 HYPERLINK l _Toc78429915 内毒素致兔红细胞膜ATP酶活性改变及阳离子A的

3、保护作用 PAGEREF _Toc78429915 h 27 HYPERLINK l _Toc78429916 抗内毒素治疗研究进展 PAGEREF _Toc78429916 h 32 HYPERLINK l _Toc78429917 内毒素的信号转导 PAGEREF _Toc78429917 h 39 HYPERLINK l _Toc78429918 细胞凋亡信号转导途径及调控的研究进展 PAGEREF _Toc78429918 h 44 HYPERLINK l _Toc78429919 内毒素信号转导机制的研究进展 PAGEREF _Toc78429919 h 50 HYPERLINK l

4、 _Toc78429920 线粒体与细胞凋亡 PAGEREF _Toc78429920 h 57 HYPERLINK l _Toc78429921 针对内毒素的治疗策略 PAGEREF _Toc78429921 h 62 HYPERLINK l _Toc78429922 一种全新的感染机制Prion PAGEREF _Toc78429922 h 66 HYPERLINK l _Toc78429924 杂交瘤技术在病理学中的应用 PAGEREF _Toc78429924 h 73 HYPERLINK l _Toc78429925 二重RT-PCR同时检测VSV与BVDV 核酸 PAGEREF _

5、Toc78429925 h 76 HYPERLINK l _Toc78429926 电子显微镜在病理学中的应用 PAGEREF _Toc78429926 h 81 HYPERLINK l _Toc78429927 电子显微镜技术在病理学的应用 PAGEREF _Toc78429927 h 84大肠杆菌对藏鸡的致病性研究纪素玲，强巴央宗，田发益，索朗斯珠，何玛丽（西藏农牧学院牧医系，林芝，860000）摘 要 大肠杆菌病对藏鸡危害比较严重，可发生任何日龄的藏鸡，给西藏养鸡业造成较大损失。该病的发生涉及很多因素，常见的因素有致病因子诱发，多种感染途径感染和机体的抵抗力下降等。本文对藏鸡大肠杆菌的致

6、病性及其感染机理进行探讨，对藏鸡大肠杆菌病提出更合理的防制措施。关键词 藏鸡；大肠杆菌；致病性；感染机理西藏目前约有藏鸡30余万只，由于藏鸡的生产性能低，且善于飞行，大部分饲养户已开始淘汰藏鸡品种。藏鸡肉品质优良，口味极佳，市场前景广阔，但藏鸡的分布范围日益缩小、数量减少，各种疫病经常发生，以致该品种面临灭绝的危险。藏鸡大杆菌病是由大肠埃布氏菌的某些血清型菌株引起的一类疾病，该病的临床症状表现复杂多样，其中最常见的呈急性败血症和卵巢性腹膜炎1，大肠杆菌的血清型众多，西藏各地区流行的血清型不一。常见的01、02、078，但目前已报道的鸡致病性大杆菌血清型有50多个，其中有12个优势致病血清型2常

7、易致病，最易发病于雏鸡，但成年鸡发病也较多。影响发病因素较多，如与致病因子的强弱、感染途径、机体的抵抗力等因素都有很大关系。本文就对藏鸡大肠杆菌的致病性及感染机理进行分析。藏鸡大肠杆菌病的症状及剖检变化1.1 急性病例无明显症状而突然死亡，多数病雏脐孔红肿并常破溃，粪便粘稠、黄白色、腥臭。全身衰弱、闭眼、昏睡、垂翅、不愿走动，采食减少或废绝，一般出现症状后12天死亡。剖检可见卵黄吸收不良，充满黄绿色稀薄液体，胆囊肿大，质地呈暗红或士黄色，有点、斑条状出血；小肠膨气，粘膜充血，有出血点或出血斑。1.2 藏鸡体温升高43以上，精神萎靡，缩头闭眼蹲于一边，饮水增多，采食量大减。有的腹泻，排绿色粪，有

8、的发病初期出现打喷嚏、咳嗽、喘嘘等上呼吸道感染症状；随后单侧眼结膜充血，流浆液性眼泪，后期结膜肿胀，结膜严重充血，鼻孔流出大量鼻液。剖检藏病鸡常出现心包炎，肝周炎，腹膜炎，腺胃乳头间及腺胃与食道，肌胃交界处有出血点；小肠粘膜炎性充血、出血，心包积液，心外膜有纤维蛋白覆盖物，肝脏充血、肿大、易碎，肝被膜增厚；脾脏肿大，色灰暗；肾肿大；喉头及气管充血，内有粘液；肺呈粉红色或紫红色，气囊混浊，眼睑内有脓性分泌物，鼻内有分泌物堵塞。大肠杆菌对藏鸡的主要致病机理大量研究表明，藏鸡大量杆菌病存在有多种致病因子，较为严重的有毒素、大肠杆菌素、外膜蛋白等，这些致病因子通过不同的机理导致大肠杆菌在机体特定部位异

9、常增殖，并可引起相应的组织损伤，呈现出明显不同的病理变化，病变较严重的是气管气囊、肺、脾、肝、肠等脏器。2.1 粘附作用定居因子;也称粘附素，即大肠杆菌的菌毛。致病大肠杆菌须先粘附于宿主肠壁，以免被肠蠕动和肠分泌液清除。定居因子具有较强的免疫原性，能刺激机体产生特异性抗体。但在特定环境下可以致泻，从而引起发病。2.2 毒素的致病作用以前人们认为藏鸡大肠杆菌内毒素与致病力无关，但最近实验研究证实，藏鸡大肠杆菌内毒素对鸡有一定的致病作用，可引起藏鸡的组织细胞损伤及生物学效应。如发热、白细胞渗出及白细胞穿越内皮细胞3等 。细菌内毒素的主要成份为脂多糖（LPS）。LPS能够激活体内多种细胞成份合成和释

10、放一系列炎性介质，并使机体释放这些内源性生物活性因子表现出内毒素的种种作用，藏鸡大肠杆菌内毒素主要是破坏肠粘膜屏障完整性，从而造成肠源性细菌感染。实验证明，藏鸡大肠杆菌内毒素可增高小血管的通透性，从而引起藏鸡的肠急性炎症，甚至能引起鸡急性死亡，并表现以出血和坏死为特征的出血性和坏死性炎症，结果表明，大肠菌内毒素对藏鸡有不同程度的致病作用。一般情况下，肠毒素分为两类，（1）不耐热肠毒素：对热不稳定，65经30分钟即失活。为蛋白质，分子量大，有免疫原性。由A、B两个亚单位组成，可导致小肠液体过度分泌，超过肠道的吸收能力而出现腹泻。（2）耐热肠毒素：对热稳定，100经20分钟仍不被破坏，分子量小，免

11、疫原性弱。在空肠部分改变液体的运转，使肠腔积液而引起腹泻。2.3 外膜蛋白大肠杆菌的外膜蛋白也是一种致病因子，电泳时发现外膜蛋白约有4条带组成，相对分子质量在3040KD之间，认为大肠杆菌的外膜蛋白在菌株的致病作用中具有重要意义，并且其有一定的免疫抗原性4，可以加快巨噬细胞对抗原的摄取，激活淋巴细胞的增殖反应，刺激机体体液免疫和细胞免疫，从而抵抗同源菌和异源菌的攻击。大肠杆菌感染藏鸡的主要途径大肠杆菌分布广泛，引起机体感染途径有多种方式，致病机理也不尽相同，一般说来主要有以下几种感染机理。3.1 条件性致病菌的感染作为藏鸡机体正常菌群之一的大肠埃希氏杆菌在正常情况下，它的数量相对稳定，而且对于

12、某些侵入的病原微生物具有拮抗作用5。但当机体受到外界刺激导致机体抵抗力下降或正常菌群失调时，如：支原体病、新城疫、禽流感、传染性支气管炎、传染性法氏囊炎等病毒，数量积累到一定程度时，强毒首先攻击鸡体，使鸡体抵抗力下降；继而强毒在鸡体内发作，出现典型症状。此时，环境中的大肠杆菌，或随强毒之后进入鸡体感染，或待鸡体衰弱后进入鸡体发病。这些构成了机体内大肠杆菌的条件致病菌6，有些血清型大肠杆菌可牢固地粘附于呼吸道、消化道的粘膜上皮上，短时间内大量繁殖，并产生毒素，引起动物腹泻，若侵入血液，则可引起全身败血症。此外，滥用抗生素，肠道条件致病菌可能在抗生素诱导下变成致病力很强的耐药变异菌，引起新的传染病

13、暴发流行。3.2 外源性大肠杆菌的感染消化道和呼吸道是外源性大肠杆菌侵入机体的门户，同时这些部位又是条件性大肠杆菌定居的场所。大多数大肠杆菌是非致病性的，但血清型为O1、O2、O35、O78等这些大肠杆菌菌株具有较强的致病性。大肠杆菌从鸡粪中飘逸出来，就有可能落在呼吸道粘膜上，借助菌毛粘附，得以在上皮“定居”，从而获得入侵“通道”。首先从气管开始，然后扩大到气囊，并在感染部位定居和繁殖，继而侵入其它组织引起败血症4或亚急性心包炎、肝周炎、气囊炎等。经致病性大肠杆菌污染的饲料和饮水可经消化道感染，在消化道产生肠毒素，引起急性出血性肠炎。此外，长期饲喂大量含有抗生素的饲料，破坏了鸡肠道的正常菌群，

14、此时若有外源性大肠杆菌侵入也会导致机体发病。3.3 肠道细菌引起内源性感染肠道细菌是肠道内的微生物及其产物穿过完整的肠壁到达相应部位，大量的研究表明，肠道的主要致病性菌的侵入是大肠杆菌，引起肠道正常菌群改变（消化道微环境失调，生物屏障破坏，肠道致病菌增殖），使机体免疫防御功能削弱以及肠道生理功能紊乱，此时外环境及其它菌乘机侵入定植生长，同时引发多种疾病。大肠杆菌产生的内毒素诱导肠粘膜损伤从，可导致肠源性细菌全身播散，引起内源性感染而发生败血症。藏鸡对大肠杆菌感染的应答感染病原菌对机体的致病物质主要是通过不同的感染途径对机体造成损害，机体通过非特异性及特异性免疫作用来消除病原菌及其毒性产物，以维

15、持机体的平衡和稳定。机体抗感染过程的发展与转归取决于机体的抵抗力的强弱，就大肠杆菌感染来说，存在两个主要特征。4.1 胃肠道正常菌群的拮抗作用藏鸡的外屏障之一是体内的正常菌群，它们在某些特定部位定居繁殖，种类与数量其本稳定，这些菌群对许多致病菌具有拮抗作用。如竞争靶器官，阻止定植和增殖以及产生某些化学物质，如大肠菌素等，直接抑制病菌的生长。正常菌群的存在，对维持机体完整的抗感染免疫具有重要意义。当正常菌群与宿主之间的微生态平衡在某种条件下被破坏时，原来不致病的正常菌群可以变为致病菌而导致发病。4.2 粘膜免疫的抗感染作用粘膜免疫是在区别于全身免疫的局部免疫，以局部产生抗体为特征。抗体在所有粘膜

16、表面的分泌物中具有相当高的浓度，是粘膜局部抗感染的重要因素。藏鸡粘膜分泌的抗体可对细菌毒素发挥作用，促进巨噬细胞和消除病原，同时可与进入粘膜表面的藏鸡致病性大肠杆菌等抗原结合，具有中和藏鸡致病性大肠杆菌抗原的生物活性，使其不能对粘膜进行粘附而发挥抗粘附作用，同时增加粘液蛋白酶对藏鸡致病性大肠杆菌与抗原的降解。此外，部分抗体进入血液，参与全身免疫。5 讨论和建议5.1 藏鸡是原始品种，长期适应于野外生存，但近年来由于圈养或笼养，发病率较高。大肠杆菌本是鸡肠道内的正常菌群，这些细菌一般情况下并不引起疾病。当鸡的机体在外诱因的作用下，如其它病原菌感染，配合饲料营养成份不全，鸡舍潮湿，卫生差，鸡群拥挤

17、及体力衰竭时，大肠杆菌开始大量繁殖；当细菌不断增加时，出现大肠杆菌病。同时，增殖的大肠杆菌改变了肠道内的微环境，引起各种生理功能紊乱，治疗不及时，可导致鸡只死亡。5.2 由于菌株的血清型比较复杂，且易产生耐药性，在治疗该病时应进行药敏试验，选择高敏药物。同进，大肠杆菌与霉形体、支原体等常混合感染，治疗时应做全面治疗。5.3 通过研究得出，藏鸡大肠杆菌内毒素经皮内注射时发现，藏鸡大肠杆菌内毒素可增高小血管的通透性，从而引起某些器官充血、出血的现象。根据这一研究结果，我们采用朱中武7等方法，给藏鸡静脉和腹腔注射途径将致病性大肠杆菌内毒素大剂量接种于产蛋藏鸡，能引起藏鸡急性死亡，并表现以出血、坏死为

18、特征的出性和坏死性炎症。5.4 通过实验研究表明，大肠埃希氏菌血清型繁杂，同场不同期的血清型不一，且不同血清型产生的抗体间很少有交叉保护作用。因此，在药物防治难以控制的情况不，使用当地分离出的大肠埃希氏菌菌株制苗，是一种经济有效的办法，应进行利用当地不同血清型的菌株进行菌苗生产，也可以起到较好的预防效果。因此我们利用当地藏鸡感染的特定埃希氏菌株的血清型，已制成了Al(OH)3胶体浓缩菌苗（单位体积内的细菌含量1800亿个/毫升），对藏鸡进行了免疫试验，取得了较好的预防效果。藏鸡致病性大肠杆菌引起机体发病的致病因素，机体感染和抗感染的详细机理，目前只能对它是个初步探讨，随着对藏鸡大肠杆菌各种致病

19、因素和机体抗感染免疫的机制的研究，能够对藏鸡大肠杆菌提出更为科学和合理的控制措施，在藏鸡大肠杆菌病防制方面取得突破性的进展。注：需参考文献可向作者联系山羊痘的病理形态学观察许乐仁1, 阴正兴1，周碧君1，虞天德2，乐正中2（1贵州大学动物医学系，贵阳，550025）（2贵州省兽疫防治站，贵阳，550003）摘 要 对发生在贵州省的山羊痘的进行了病理形态学观察。山羊痘以全身皮肤，呼吸道及消化道粘膜出现痘疹为特征。皮肤疹最初为红斑，红斑肿胀隆起形成结节状丘疹，然后丘疹发生凝固性坏死，脱落而形成痂皮。组织学检查早期皮肤病变可见充血，水肿和多量的巨噬细胞和中性白细胞浸润，随着病变的发展可见更多的巨噬细

20、胞，淋巴细胞，浆细胞和一些体积较大的所谓“山羊痘细胞”出现。在真皮的病变细胞和山羊痘细胞中可见嗜酸性胞浆内包涵体。引起水肿和坏死的血管炎常伴有血栓和梗死。上皮的变化包括棘细胞增生，空泡变性，不全角化，过度角化和坏死等。其他器官的病变也有相似的细胞浸润和血管炎变化。但发生在上呼吸道及上消化道时常出现溃疡。关键词 山羊痘；病理形态学山羊痘（goat pox）是由山羊痘病毒（goat poxvirus，GPV）引起的一种高度接触性的地方流行性传染病。其特征是在皮肤、呼吸道及消化道粘膜出现痘疹，病羊发热，眼、鼻分泌物显著增多1-3。本病的发病率及死亡率较高，常给养羊业，特别是集约化山羊养殖业，带来巨大

21、经济损失，并严重影响国际贸易。山羊痘在所有的动物痘病中是最为严重的一种，被国际兽疫局（OIE）列为A类重大传染病，其动物和动物产品被严格限制进出口。本病的流行已有很长的历史，现主要分布在北非和中非、印度次大陆和西南亚，特别是养羊业作为重要农业经济结构成分的地区。亚洲的印度、伊拉克、伊朗、科威特、黎巴嫩、斯里南卡、约旦、马来西亚、尼伯尔、阿曼、巴基斯坦、卡塔尔、塔吉克斯坦、土耳其、也门、俄罗斯、蒙古、阿富汗、巴林、孟加拉、阿联酉等国均有本病的流行，其中不少国家与我国接壤2，3。我国的黑龙江、辽宁、吉林、河北、河南、山西、宁夏、青海、甘肃、江西、福建、四川、云南等省均有本病的发生3-7。最近贵州省

22、的一些地区也相继发生山羊痘的流行1。山羊痘在我国的广泛流行，给我国养羊业的发展带来极大的损失。特别是给我国西部山区近年来蓬勃兴起的山羊养殖业的发展带来了很大的威胁。根据本病典型的流行病学、临床病理学特征，血清学检测和病原鉴定，山羊痘的诊断并不困难。山羊痘的皮肤痘疹是该病最显著和最有证病意义的病变。国内外文献虽然已有一些有关山羊痘病理形态学的描述，但有关本病的组织病理学资料多不够详尽。本文对发生在贵州省的山羊痘病变进行了比较详细的大体形态和组织病理学观察。1 材料与方法1.1 贵州省山羊痘的流行与诊断近年来，贵州省八个县市的一些山羊饲养场相继发生一种以全身皮肤、呼吸道及消化道粘膜出现痘疹的传染病

23、。病羊发热，体温升高41-42，眼、鼻粘液脓性分泌物显著增多（图1）。成年羊发病率高达66.4%（2,940/4,429），病死率达63.4%（1,863/2,940），羔羊病死率达100%。不同性别、年龄、品种的山羊都可受感染。怀孕母羊多流产或产弱羔1。通过流行病学调查，典型的临床症状和病理组织学特征，以透射电镜在病变细胞观察到大量典型的痘病毒颗粒（图2）,确诊为山羊痘。感染鸡胚绒毛尿囊膜的接种部位上出现灰白色大小不等的痘斑，绒毛尿囊膜显著增厚，胚体严重出血。接种BHK21单层细胞出现明显的细胞病变且这种现象可被山羊痘参考血清所抑制。血清学检测结果表明，病羊痘疹材料中山羊痘抗原阳性率为66.

24、7%（12/18），血清样品中山羊痘抗体阳性率为47.5%（18/38）。也完全支持山羊痘的诊断1。1.2 病理形态学观察1.2.1 大体病变观察 对贵州省八个县市发生山羊痘的饲养场中的共100多只病羊进行了临床检查及体表皮肤病变观察。并对10只病死羊进行了尸体剖解以检查内脏器官的病变。1.2.2 病理组织学观察从10只尸体剖解的病死羊中采集不同部位，不同形态的皮肤病变的组织，肺，气管，瘤胃等有肉眼病变的组织，以及肝，脾，肾，心，淋巴结等材料。 另从4只病羊采集皮肤活检材料。10%中性缓冲福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，HE染色供组织学检查。2 结果2.1 大体病变皮肤 根据对100多只病羊进

25、行的临床检查及体表病变观察，患病山羊发热后1d左右，山羊皮肤，特别是尾内侧皮肤可见直径23cm红斑，后再经24h后，红斑肿胀形成半球形隆起的硬的丘疹，有时几个丘疹互相融合成片状突起。丘疹可见于全身皮肤，特别是头、颈、腋窝、腹股沟、会阴、眼、阴茎、包皮等被毛稀疏或无毛的皮肤（图3，4）。尸检可见丘疹病变累及皮肤全层。口腔，阴道和鼻的外粘膜上也可见丘疹形成。但这些部位粘膜上的丘疹可迅速溃破（图5）。耐过本病急性期的动物,痘疹可发生凝固性坏死而形成痂皮，从丘疹到痂形成约为5-10d，而痂皮形成后可持续30-50d后，然后开始脱落遗留一个红斑此后颜色变淡形成一个白色的痕迹。本病的病程从第一批患羊出现症

26、状到皮肤病变消失约为2个月左右。呼吸道 气管及支气管粘膜显著地充血水肿、可见水泡样大小不等的痘疹及溃疡形成，粘膜表面有多量的粘液性分泌物附着。肺表面及切面可见黄豆大小结节或白色斑块状病灶呈岛状分布，有时可见多个病灶融合成一片，以肺的尖叶，心叶及膈叶的前部比较显著（图6）。肺门淋巴结不同程度肿胀，切面多汁，部分周边出血的病变。消化道 口腔内齿龈、舌面、硬颚、咽喉粘膜分布大小不等、圆形或椭圆形丘状隆起痘疹，有的破溃、出血、化脓，形成脐状凹陷的溃疡灶（图5）。瘤胃和真胃的粘膜和浆膜面可见黄豆大小，质地坚硬的痘疹，与皮肤的痘疹十分相似。十二指肠及部分小肠有不同程度的充血及出血现象，呈卡他性出血性肠炎的

27、病变。其它 淋巴结肿胀，切面多汁。脾稍肿胀。肝，心，肾等实质器官未见明显的肉眼病变。2.2 组织学病变皮肤 镜下可见病变早期皮肤呈现上皮组织轻度增生，皮下组织中小血管充血，水肿和多量的巨噬细胞和中性白细胞浸润，偶尔可见少量嗜酸性白细胞；随着病变的发展皮肤痘疹形成，上皮组织显著增生，特别是棘细胞增生变厚，表层细胞出现不全角化，过度角化和坏死脱落，形成无结构的坏死痂皮。棘细胞层常可见严重的空泡变性，细胞高度肿账，胞浆内有大量空泡形成导致胞浆空疏，胞核边移，状似气球，甚至崩解坏死（图7）。此时在病变部皮下结缔组织中，毛囊周围及肌间可见更多的巨噬细胞，淋巴细胞，浆细胞浸润和一些所谓“山羊痘细胞”(go

28、at pox cell) 出现。山羊痘细胞体积较大，形态不规则，甚至带星状胞突（图810）。在真皮的病变细胞和山羊痘细胞中可见嗜酸性胞浆内包涵体（图10）。引起水肿和坏死的血管炎常伴有血栓形成和梗死。血管周围常常有大量炎症细胞浸润集聚而形成“袖套”现象（图8，11）。呼吸道 气管及支气管粘膜上皮增生，杯状细胞增多（图12）。气管粘膜发生痘疹和溃疡的病灶可见上皮细胞高度增生而显著增厚，可达5-10倍。其间可见大量小的坏死灶形成（图13）。粘膜表面的粘液性分泌物中含有多量脱落坏死的上皮细胞及变性坏死的炎症细胞。粘膜下结缔组织显著充血，出血和多量的巨噬细胞和中性白细胞浸润（图12，13）。肺组织可见

29、充血、渗出及凝固性坏死，病灶周有明显的炎症反应带，且可见肺小叶间隔增宽。一个典型的病变是肺泡上皮细胞化生为立方的和矮柱状的细胞，状似腺瘤样改变（图14）。肺泡膈毛细血管充血并可见巨噬细胞和中性白细胞浸润。肺泡腔中见有淡红色的浆液性渗出物，含有多量脱落坏死的上皮细胞及变性坏死的炎症细胞（图14）。部分病例同时可见明显的化脓性肺炎改变，在细支气管和肺泡中见有大量变性坏死的中性白细胞。消化道 口腔粘膜及舌面的发生痘疹和溃疡的病灶的组织病理学形态与气管粘膜病变的性质十分相似。而发生在瘤胃和真胃的痘疹，其组织病理学形态则与皮肤的痘疹病变十分相似。其它 脾和淋巴结的皮质区淋巴细胞减少，生发中心缺乏。肝，心

30、，肾等实质器官未见明显的有意义的组织病理学改变。3 讨论山羊痘在世界上的流行已有100多年以上的历史，对山羊痘的病理形态学已有一些经典的描述1，2。可能是由于典型的流行病学和临床特征，以及多种血清学试验的特异性，山羊痘的诊断似乎并不困难。不少研究集中到山羊痘的病原学及预防学，而有关病理形态学资料多不够详尽。本病在我国的不少地区也有暴发流行的报告，但缺乏比较详尽的组织病理学资料4-7。通过对贵州省的山羊痘的病理形态学观察,与经典的描述相似的是2，3，8，9，发生在贵州省的山羊痘也是以全身皮肤，呼吸道及消化道粘膜出现痘疹为特征。皮肤由最初的红斑到肿胀隆起形成结节状丘疹，丘疹发生凝固性坏死到脱落而形

31、成痂皮。皮肤的结节状丘疹质地坚硬，符合结节型（nodular form）山羊痘的所谓石头痘（stone pox）的描述,但我们未能在皮肤上发现丘疹-水泡型 (papulo- vesicular form) 病变。皮肤组织学检查可见早期的充血，水肿和多量的巨噬细胞和中性白细胞浸润发展到更多的巨噬细胞，淋巴细胞，浆细胞和一些体积较大的所谓“山羊痘细胞”(goat pox cells) 出现。这些所谓“山羊痘细胞”应该是吞噬了大量山羊痘病毒的巨噬细胞。在真皮的病变细胞和痘细胞中可见嗜酸性胞浆内包涵体则是很有证病意义的。值得注意的是山羊痘病毒的感染明显的血管病变，供应丘疹的血管出现血栓而引起局部的水肿

32、和坏死。导致丘疹上皮出现包括棘细胞增生，空泡变性，不全角化，过度角化和凝固性坏死等变化。包括呼吸道及消化道在内的其他器官的病变也有相似的细胞浸润和血管炎变化。发生在瘤胃和真胃的痘疹仍然是类似发生在皮肤的结节型的所谓石头痘。但发生在上呼吸道及上消化道时常发生溃疡。丘疹-水泡型病变主要发生在口腔，舌和气管粘膜，可能与上呼吸道及上消化道的解剖生理学特点有关，或许也可能与山羊痘病毒的毒株有关。山羊痘病羊的淋巴器官的变化与Saha(1991)报道的一致10，但淋巴里组织中淋巴细胞的减少与山羊痘病变发生发展的关系还不很清楚。山羊痘的肺炎病变似乎很有意义，肺上皮细胞化生为立方的和矮柱状的细胞而状似腺瘤样改变

33、。有报告山羊痘类似的肺炎病变11，有认为是扁平的I型肺上皮细胞化生为立方的II型肺上皮细胞。但缺乏有力的证据，进一步研究仍然是必要的。山羊痘严重的全身皮肤，呼吸道及消化道病变，以及病变部显著的炎症细胞浸润和血管炎变化，提示了山羊痘病毒感染后可能导致病毒血症，侵犯血管内皮细胞，诱发血栓形成。感染的上皮细胞和吞噬了病毒的巨噬细胞可能出现嗜酸性胞浆内包涵体并发生变性坏死。供应丘疹的血管出现血管炎，血栓和梗死无疑是而丘疹部出现变性和坏死的病理学基础。MORPHOPATHOLOGICAL OBSERVATION OF GOAT POXXU Le-ren 1, YIN Zheng-xing1，ZHOU B

34、i-jun1，YU Tia-de1, LE zhen-zhong1（1 Department of Animal Medicine, Guizhou University, 550025 Guiyang2 Station for Animal Epidemic Prevention of Guizhou Provence,550003, Guiyang）Abstract Lesions of goat pox in Guizhou were observed morphopathologically. Goat pox is characterized by pox lesions on th

35、e skin, respiratory tract and gastro- intestinal tract. Cutaneous eruption beginning with macules and papules give rise to nodules, followed by coagulation necrosis and sloughing of nodules leaves a scar. On histological examination the early stage skin lesions are congestion, oedema and a massive c

36、ellular infiltrate by macrophages, neutrophils and as the lesion progresses, by more macrophages, lymphocytes and plasmas and some large cells so called “goat pox cells”. Intracytoplasmic inclusion bodies are present in infected cells of the dermis and these pox cells. Vasculitis is accompanied by t

37、hrombosis and infarction, causing oedema and necrosis. Epidermal changes consist of acanthosis, vacuolar degeneration, parakeratosis，hyperkeratosis and necrosis. Changes in other organs are similar, with a predominant cellular infiltration and vasculitis. But lesions in the upper respiratory tract a

38、nd upper gastrointestinal tract are usully characterized by ulceration.Key words goat pox; morphpathology注：1、基金项目：2003年贵州省科技厅年度攻关项目（黔科合农社字20NGY8007号）。2001年贵州省省长专项基金。作者简介：许乐仁（1944-），男，山东日照人，教授。研究方向：动物病理学与动物细胞生物学。Email: HYPERLINK mailto:xuleren xuleren2、需图版和参考文献可向作者联系。山羊痘病变的超微病理学观察许乐仁，周碧君，阴正兴，何光志，刘忠伟

39、（贵州大学动物医学系，贵阳, 550025）摘 要 对发生在贵州省的山羊痘病变进行了电镜观察。在感染的皮肤和肺上皮细胞的胞浆内发现有大量不同成熟阶段的典型的山羊痘病毒颗粒。病毒颗粒也可见于巨噬细胞,成纤维细胞，血管内皮细胞的胞浆内，甚至少量在血管腔内。受感染的细胞除可见胞浆内散在的病毒颗粒或形成病毒包涵体外，通常可见细胞水肿，线粒体肿胀，内质网和高尔基氏复合体扩张。一个有趣的发现是，有髓神经纤维也被病毒和被感染的巨噬细胞所波及，并可见节段性脱髓鞘以及轴索和神经膜细胞的变性。在山羊痘痘疹材料感染鸡胚绒毛尿囊膜痘斑的上皮细胞和成纤维细胞中也可见成熟和不成熟的的病毒颗粒。关键词 山羊痘；超微病理学山

40、羊痘（goat pox）是由山羊痘病毒（goat poxvirus，GPV）引起的一种高度接触性的地方流行性传染病。其特征是在皮肤、呼吸道及消化道粘膜出现痘疹。本病的流行已有很长的历史，现主要分布在北非和中非、印度次大陆和西南亚1。与我国邻近的不少国家和我国的一些地区均有本病的发生2。最近贵州省的少数地区也发生了山羊痘的流行3。根据典型的流行病学、临床及病理学特征，病原学和血清学检测，山羊痘的诊断并不困难。国内外文献虽然不少有关山羊痘病理形态学的描述1-4，但有关本病的超微病理学研究却比较少。本文对发生在贵州省的山羊痘病变进行了比较详细的透射电镜观察。1 材料与方法1.1 贵州省山羊痘的流行与

41、诊断贵州省八个县市的一些山羊饲养场相继发生一种以全身皮肤、呼吸道及消化道粘膜出现痘疹的传染病。病羊发热，眼、鼻粘液脓性分泌物显著增多。发病率和死亡率很高3。组织学检查可见皮肤和粘膜的痘疹病灶上皮组织明显增生，细胞呈空泡变性及凝固性坏死，并可见嗜酸性胞浆内包涵体。病变部组织有血管炎改变并巨噬细胞和中性白细胞等炎症细胞浸润。肺上皮细胞化生为立方状细胞而似腺瘤样改变4。感染鸡胚绒毛尿囊膜的接种部位上出现灰白色大小不等的痘斑，绒毛尿囊膜显著增厚，胚体严重出血。接种BHK21单层细胞出现明显的细胞病变且这种现象可被山羊痘参考血清所抑制。血清学检测结果表明，病羊痘疹材料中山羊痘抗原阳性率为66.7%，血清

42、样品中山羊痘抗体阳性率为47.5%3。结合本病典型的流行病学及临床表现，确诊为山羊痘。1.2 透射电镜技术从4只病羊皮肤，口鼻粘膜，肺脏和瘤胃病变部多点采集材料，组织块修切至1 mm3大小。并从接种感染山羊痘痘疹材料的鸡胚绒毛尿囊膜采集出现的灰白色的痘斑。材料先后经3%戊二醛和1%锇酸固定，丙酮系列脱水，环氧树脂618包埋，瑞士产LKB-5型超薄切片机切片，硝酸铅和醋酸铅染色，日本产JEOL- 2000EX透射电镜观察。2 结果2.1 病毒的形态特征在所检查材料的多种细胞中，特别是在痘疹皮肤的上皮细胞的胞浆内发现有大量不同繁殖阶段的典型的山羊痘病毒颗粒。初期的病毒颗粒呈卵圆形，长径大约为250

43、-350nm,外膜完整或不完整，呈C形状或花瓣状；中期的病毒颗粒形状和大小与初期病毒相似，只是在中央或偏中央部位可见致密的类核体； 而成熟的病毒颗粒致密，多呈卵圆形，大小约为（150-180 nm）（220-280 nm），病毒颗粒中央可见两面凹陷呈哑铃形的核酸芯髓和两个侧小体。 2.2 鳞状上皮组织的变化皮肤和瘤胃的鳞状上皮细胞明显水肿，胞浆稀疏。线粒体肿胀变圆，基质电子密度降低，嵴变短或断裂变成小泡，有的线粒体明显肿胀形成泡状物。内质网扩张，可见小管泡状增生。高尔基氏复合体扩张，甚至破裂解体。胞浆内有大量散在的多为卵圆形的成熟病毒颗粒。有的细胞中可见到病毒包涵体形成，包涵体内的病毒浆中有大

44、量成熟的和部分不成熟的病毒颗粒积聚。个别细胞的胞浆内可见角质丝。皮下组织可见巨噬细胞和中性白细胞浸润。巨噬细胞的线粒体肿胀，内质网扩张，胞浆内可见数量不等的病毒颗粒，病毒颗粒也见于溶酶体内。有时可见细胞的裂解和细菌的并发感染。2.3 肺上皮细胞的变化肺上皮细胞水肿，胞浆稀疏, 线粒体肿胀，内质网扩张。胞浆内散在大量卵圆形的成熟的或不成熟的病毒颗粒。肺上皮细胞具有型肺泡细胞特征性的板层小体（lamella body）样结构，其内稀疏的无结构基质中有泡状或管状物及正在形成的病毒颗粒。有的细胞可见核内假包涵体。2.4 毛细血管内皮细胞的变化毛细血管内皮细胞肿胀，线粒体肿胀，内质网扩张。胞浆内可见少量

45、病毒颗粒，偶尔也可见少量病毒颗粒存在于血管腔内。2.5 有髓神经纤维的变化有髓神经纤维可见轴索变性呈空泡状，其内神经微丝和微管等细胞器结构模糊。髓鞘板层结构模糊，并可见节段性脱髓鞘(segmental demyelination)现象。神经膜细胞肿胀，胞浆稀疏，线粒体肿胀，溶酶体增多。胞浆中有少量病毒颗粒，也可见成熟的病毒颗粒游离于神经膜细胞外。 神经外膜和神经内膜之间见有巨噬细胞浸润，其内见有大量病毒颗粒散在。2.6 感染鸡胚绒毛尿囊膜痘斑的变化鸡胚上皮细胞明显水肿，胞浆稀疏，胞浆内散在卵圆形的成熟病毒颗粒。线粒体肿胀变成圆形，基质电子密度降低，嵴变短或断裂变成小泡，有的线粒体明显肿胀形成泡

46、状物，甚至退变的膜性结构形成皱纹纸样结构或髓鞘样结构。内质网扩张，可见小管泡状增生。高尔基氏复合体的扁平囊、大泡及小泡扩张，甚至破裂解体。内质网和高尔基氏复合体中可见不成熟的病毒颗粒，这些病毒颗粒似乎可以从内质网和高尔基氏复合体突出而直接进入胞浆并形成有囊膜的成熟病毒颗粒。有的细胞内可见较丰富的张力丝束。鸡胚成纤维细胞胞核的核周隙不规则增宽。线粒体不同程度肿胀。内质网不规则扩张，有时可见小管泡状增生。胞浆稀疏，胞浆内有成熟和不成熟的病毒颗粒。细胞外胶原原纤维间质中也可见成熟的病毒颗粒。3 讨论山羊痘病毒（goat poxvirus，GPV）在分类上属痘病毒科（poxviridae）的羊痘病毒属

47、（Capripoxvirus）。是可以在宿主细胞胞浆中增殖的DNA病毒。山羊痘病毒在易感山羊群中主要通过呼吸道传播，也可能通过皮肤粘膜损伤而感染5,6。但无论通过何种途径侵入机体，均可引起病毒血症并在其皮肤和粘膜上皮细胞繁殖从而引起一系列的炎症过程和特异性的痘疹病变。除皮肤和粘膜上皮细胞的病变外，病毒也可见于巨噬细胞和成纤维细胞等其他细胞的胞浆中7。有关山羊痘组织病理学变化已有不少经典的描述1,2,7。最近作者等（2004）也对贵州省发生的山羊痘进行了比较详细的病理形态学观察4。本研究对山羊痘病变进行的透射电镜观察有助于为组织病理学变化的发生提供有力的超微病理学基础，并有助于认识山羊痘病毒感染

48、与山羊痘病变发生发展的相关性。皮肤、呼吸道及消化道粘膜出现痘疹和病变部上皮组织明显增生，细胞呈空泡变性，凝固性坏死及嗜酸性胞浆内包涵体的出现是山羊痘最显著和最有证病意义的病变1-4。在透射电镜观察下，上皮细胞的明显水肿而胞浆稀疏，线粒体肿胀变成圆形或形成泡状物，内质网和高尔基氏复合体扩张甚至破裂解体以及胞浆内大量山羊痘病毒颗粒的存在是光镜下上皮细胞空泡变性和坏死性变化的亚微基础。上皮细胞中的嗜酸性胞浆内包涵体在电镜观察下是病毒浆中含有大量成熟的和部分不成熟的病毒颗粒积聚，很显然包涵体是痘病毒繁殖复制和积聚的重要场所,这与Murry (1973)的报告一致 7。大量病毒在胞浆内的繁殖与破坏无疑是

49、导致和加重细胞变性与坏死的重要因素。山羊痘病毒不但在皮肤粘膜上皮细胞和肺上皮细胞大量繁殖，而且也可见于巨噬细胞，成纤维细胞，血管内皮细胞的胞浆内，甚至少量在血管腔内。巨噬细胞在病变部组织中的浸润显然是在山羊痘的炎症反应中发挥其强大吞噬功能。光镜下体积较大，形态不规则的所谓“山羊痘细胞”(goat pox cell)实际上主要是吞噬了大量痘病毒颗粒后发生变性而体积增大的巨噬细胞4,7。至于光镜下肺上皮细胞呈立方状而似腺瘤样的改变4，本研究在电镜下证实是型肺泡细胞(typealveolar cell)的增生。型肺泡细胞具有潜在的增生能力8，但其山羊痘病毒感染时出现这种腺瘤样增生的意义有待进一步阐明

50、。山羊痘病毒侵犯血管内皮细胞并出现在血管腔内是山羊痘病变部的血管炎变化和导致病毒血症的超微病理学基础和直接的证据。而血管炎时血管内皮细胞的损伤性变化是山羊痘病变部血栓形成和梗死，并进一步导致痘疹病变部细胞变性和发生凝固性坏死的重要病理学基础4。至于山羊痘病毒侵犯成纤维细胞的意义还不是很清楚。虽然山羊痘病毒是亲上皮细胞性的，但进一步的检查还很有可能发现山羊痘病毒的其他类型的宿主细胞。有关痘病毒在细胞内的复制繁殖过程已有不少研究5-8。一般认为痘病毒在细胞浆内复制组装先形成无结构的病毒浆，而后在病毒浆内出现不同繁殖期的病毒颗粒。本研究也在感染的细胞中观察到了不同繁殖期的山羊痘病毒颗粒。如前所述，胞

51、浆内包涵体内积聚了大量成熟的和部分不成熟的病毒颗粒，很显然包涵体是痘病毒繁殖、复制、成熟和积聚的重要场所。但本研究在感染细胞的内质网和高尔基氏复合体中也见到的不少病毒颗粒且多处于不成熟阶段，而胞浆内散在的却多为成熟的病毒颗粒。而且似乎可见到病毒直接从内质网和高尔基氏复合体突入胞浆形成成熟病毒颗粒的现象。因此很有可能是，大多数病毒是在胞浆内或病毒包涵体内复制、组装、繁殖并成熟，通过细胞裂解释放出无囊膜的病毒颗粒。而胞浆内有的病毒则可移至内质网和高尔基氏复合体，在其内繁殖成熟并获得囊膜，通过胞吐或细胞表面微绒毛释放出有囊膜的病毒颗粒。但不排除这些有囊膜的病毒颗粒有直接进入胞浆而后再通过细胞裂解释放

52、的可能性。虽然有囊膜的和无囊膜的痘病毒颗粒均具有感染性，但一般认为有囊膜的病毒似乎更易侵入宿主细胞并在宿主体内传播扩散5,6。痘病毒侵犯有髓神经纤维是本研究中一个偶然但有趣的发现。游离的成熟病毒颗粒和被病毒感染的巨噬细胞出现在神经外膜和神经内膜之间，有髓神经纤维发生节段性脱髓鞘并可见轴索和神经膜细胞的变性，神经膜细胞胞浆中见有少量病毒颗粒。其病理生物学意义有待进一步的研究与证实。山羊痘痘疹材料感染鸡胚绒毛尿囊膜的接种部位出现的灰白色痘斑在透射电镜观察下发现了痘病毒的存在。在鸡胚上皮细胞和成纤维细胞中，成熟和不成熟的病毒颗粒广泛见于细胞的内质网，高尔基氏复合体中和散在于胞浆内，成熟的病毒颗粒也见

53、于细胞外间质中。感染的细胞也发生水肿变性。进一步证实了鸡胚绒毛尿囊膜的接种和痘斑的出现是山羊痘诊断可靠方法之一 1-3。ULTRA-STRUCTURAL PATHOLOGICAL OBSERVATION ON THE LESIONS OF GOAT POXXU Le-ren , ZHOU Bi-jun, YIN Zheng-xing, HO Guangzi, LIU Zhongwi （Department of Animal Medicine, Guizhou University, 550025 Guiyang）Abstract The lesions of goat pox in Guiz

54、hou Province were observed under electronic microscopy. Numerous typical goat poxvirus in different mature stages were found in the cytoplasma of the affected epithelial cells in skin and lung, and some also could be found in the cytoplasma of macrophages, fibroblastic cells and vascular endothelial

55、 cells with a few within the blood vessels. Beside the virus diffused or restricted as a virus inclusion body in the cytoplasm the affected cells are usually swelling with enlarge of mitochondrion, endoplasmic reticulum and Golgi complex, An interesting finding is that myelinated nerve fibers were a

56、lso involved by the virus and affected macrophages and demyelination with degeneration of axon and Schwann cells were noted. The typical matured or maturing virus particles were also found in the epithelial cells and the fibroblastic cells in the affected chorioallantoic membrane of chick embryo.Key

57、 words Goat pox; ultra-structural pathology致谢 重庆第三军医大学中心实验室协助进行透射电镜观察，特此感谢。注：需参考文献可向作者联系贵州山羊痘的病原学研究与血清学检测周碧君1 ，何光志1，虞天德2，许乐仁1( 1.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳，550025；2.贵州省兽防站，贵州 贵阳，550003)摘 要 2002年10月以来,贵州省8个养羊场相继发生一种以皮肤、呼吸道和消化道粘膜出现痘疹的传染病。通过电镜观察在痘疹材料中发现大量典型的痘病毒粒子；感染鸡胚后绒毛尿囊膜增厚、充血和出现痘斑;接种BHK21单层细胞引起明显的细胞病变效应，而且这种现

58、象能够被山羊痘参考血清所抑制。血清学检测结果表明，患病羊痘疹材料中山羊痘抗原的阳性率为66.7%；血清样本中山羊痘抗体的阳性率为47.4%。根据对本次疫病的病原学研究和血清学检测，可以确诊贵州省发生了山羊痘暴发流行。关键词 山羊痘；电镜观察；绒毛尿囊膜；细胞病变效应；血清学检测山羊痘（goat pox）是由山羊痘病毒属（capripoxvirus）、山羊痘病毒（goat poxvirus，GPV）引起的一种呈地方流行、高度接触性传染病，1997年OIE将其列为A类动物传染病。本病一年四季均可发生，但春秋常见，不分性别、年龄、品种，主要流行于北非、中东、欧洲、亚洲及澳大利亚1。近年来，我国福建2

59、、陕西3、南京4、江苏5等地均有暴发流行，贵州省属首次发生6。自2002年10月以来，在贵州省修文、镇远、铜仁和遵义等8个地（县）养羊较为集中的乡（镇）相继暴发流行一种全身皮肤及部分粘膜出现痘疹的传染病，患病羊主要表现发热、体温升高4142，食欲减退乃至废绝，精神萎顿，眼结膜潮红、流泪，鼻和眼流脓性分泌物。大部分病羊在眼、唇、鼻、颊，腹部和尾内侧无毛处出现大小不等的红疹，严重时病变波及全身皮肤和部分内脏器官。14d后形成小的丘疹突出于皮肤和内脏器官表面，逐渐扩大为灰白色石头样的硬结节。在舌面和气管粘膜形成丘疹水疱型，水疱破溃后形成痂块，最后痂块脱落遗留白色的痕迹。在疫区随机剖检10只病羊：皮肤

60、痘疹（10/10）、瘤胃痘疹（4/10），气管和支气管有黄豆大小卵圆形水疱（4/10），肺部可见融合的实变区和大量分布于肺表面的硬结节（6/10）。多数养殖场是从外地引种或购进山羊混群后，陆续发病并很快蔓延至全群，发病率和死亡率较高。对8个疫区4429只山羊调查，成年羊发病率66.39%（2940/4429），死亡率42.06%（1863/4429），羔羊发病率和死亡率达100%，怀孕母羊大多流产或产弱羔。 根据本次疫病的流行病学、临床症状和剖检病变特征，作出怀疑山羊痘的假定性诊断。通过电镜超薄切片观察、鸡胚绒毛尿囊膜接种和细胞病变效应测定，对本次疫病进行了病原学研究；同时自行研制山羊痘沉淀抗