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文档简介

重庆医药高等专科学校佘玉罕蛋白质的理化性质

紫外吸收和颜色反应一、蛋白质紫外吸收原理：大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。这三种氨基酸在280nm附近有最大吸收。因此，大多数蛋白质在280nm附近显示强的吸收。实质：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸含有共轭双键，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。共轭双键（紫外吸收的实质）色氨酸苯丙氨酸酪氨酸CCCCCC﹦﹦﹦－－－－－－－－－HHHHHHCCCCCC－－﹦﹦﹦－－芳香族氨基酸：220240260280300320波长（nm）40,00020,000

10,000

5,000

2,000

1,000

500

200

100

50

2010吸光度（A）应用：此法适用于粗提取或粗分离的蛋白质检测。最大吸收波长＝280nm二、蛋白质的颜色反应

双缩脲反应

酚试剂反应→蛋白质定性、定量

茚三酮反应

蛋白质分子的肽键和分子中氨基酸残基上的一些基团可与相关试剂反应产生颜色。

（一）双缩脲反应是指双缩脲在碱性条件下与Cu2+反应生成紫红色络合物的反应。蛋白质能发生该反应，氨基酸无此反应。故既可用于蛋白质定性定量分析，也可用于检测蛋白质的水解程度。肽键反应实质：肽键（二）酚试剂（Folin-酚试剂）反应蛋白质分子中一般都含有酪氨酸，而酪氨酸中的酚羟基能将Folin-酚试剂中的磷钼酸及磷钨酸还原成蓝色化合物（即钼蓝和钨蓝的混合物）。此法可用于蛋白质定性定量分析，也可以用于微量蛋白质检测。优缺点：①灵敏度较双缩脲法高100倍；②可用于微克量级蛋白质的检测；③有腐蚀性；④不能做仪器分析酪氨酸+酚试剂蓝色化合物（三）茚三酮反应：α-氨基酸和过量水合茚三酮反应生成蓝紫色化合物。+茚三酮(无色)NH3CO2RCHO+还原性茚三酮紫色化合物(弱酸)加热+

2NH3+还原性茚三酮

茚三酮脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反

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