电针不同经穴治疗心肌缺血的机制研究

电针不同经穴治疗心肌缺血的机制研究

近年来，预防针灸效果的中央控制机制在国内外科学研究中引起了越来越多的关注。研究表明,下丘脑可通过调控自主神经的功能、精氨酸加压素(argininevasopressin,AVP)的合成和释放以及压力感受器反射等方面调节心血管功能活动,其内诸多神经递质均可通过改变自主神经活动引起心血管反应。本研究通过观察电针手厥阴心包经络穴“内关”、手少阴心经原穴“神门”、手太阴肺经原穴“太渊”对心肌缺血模型大鼠下丘脑室旁核区单胺类递质NE含量的影响,探索下丘脑在针刺抗心肌缺血过程中的作用机制及其物质基础,研究经脉脏腑相关与脑联系的中枢调控机制。1材料表面1.1实验动物动物健康清洁级SD大鼠80只,雌雄各半,体质量(200±20)g,由江苏省南京安立默实验动物有限公司提供,合格证号SCXK苏(2006-005)。同等条件适应性饲养1周。1.2elisa试剂盒大鼠去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)试剂盒,RB公司产品,批号08090412;氨基甲酸乙酯(乌来糖),中国上海曹杨第二中学化工厂生产,批号050708;实验用水均为超纯水。1.3仪器、试剂和仪器Powerlab16导生理记录仪,澳大利亚AD公司;PCE-A型程控电针治疗仪,安徽天恒科技实业有限公司;ALLEGRA64R冷冻离心机,美国BECKMAN公司;ELX800UV酶标仪,美国BIOTEK公司;CM1900型切片机,德国LEICA公司;针灸针,苏州医疗用品厂。2方法2.1模型大鼠的分组按照《卫生统计学》中的随机数字表法从80只大鼠中随机选取10只作为正常对照组,其余大鼠进行模型复制。将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、电针“神门”组(简称“神门”组)、电针“内关”组(简称“内关”组)、电针“太渊”组(简称“太渊”组),每组10只,剩余模型大鼠在同等条件下饲养,以备补充实验。存在心电图异常、实验手术或记录失败、麻醉过量死亡、功能状态不良或术中死亡者,均未列为实验分析对象。2.2心肌缺血模型的复制模型复制前记录正常心电图,心电图异常者剔除不用。参照文献的改良方法复制模型。大鼠乙醚麻醉后固定于手术台上,左胸部备皮,常规无菌操作。沿胸骨左缘剪开皮肤,用止血钳游离大鼠左侧的胸大肌,暴露左侧第2~4肋,以便清晰地观察到心脏暗影,用弯头止血钳沿胸骨左缘第3、第4肋间撑开肋骨,挤出心脏,充分暴露心脏及其表面的血管,用4/0医用缝合线在冠状动脉左前降支下1/3处快速结扎,心脏复位后立刻关闭胸腔。根据模型复制前后心电图变化情况,评判心肌缺血模型复制成功与否。心电图记录采用针形电极插入大鼠四肢皮下,常规连接Powerlab16导生理记录仪,记录标准II导联心电图,观察分析T波、J点的变化。以心电图出现J点抬高、T波高耸或倒置为模型复制成功的标志。2.3模型电针治疗在各电针组大鼠左侧“内关”“神门”和“太渊”穴区用不锈钢28号0.5寸毫针直刺入穴位,均在无菌操作下完成,针柄连接PCE-A型程控电针治疗仪输出端,参考电极置于穴区沿经脉纵向近端约2mm处,接电针仪的另一输出端。电针刺激,刺激电压5V,电流强度1.1mA,频率为2Hz,波宽300ms,正负向交替方波刺激,每次刺激10min,模型复制后第3d开始电针治疗,每天1次,电针3d。模型组大鼠只固定不电针。穴位定位参照林文注《实验针灸学》。2.4动物脑剖面观察针刺治疗结束后在大鼠麻醉状态下活体取材,距第1次针刺时间50h左右。予30mg/L水合氯醛腹腔麻醉,活体开颅取出完整脑组织,参照Paxinos和Watson大鼠脑解剖图谱,在冰盘上用无菌刀片切取下丘脑室旁核区2mm×2mm×2mm脑组织,称质量后立即标记置于3mL冻存管,液氮冷藏保存,每只动物取材时间不超过2min。正常对照组、模型组取材时间,范围和方法与针刺组相同。标本检测严格按照ELISA实验操作说明进行。2.5系统统计分析连续型变量用表示,使用SPSS17.0forWindows统计软件进行数据分析。多组间均数比较采用单因素方差分析,其中P<0.05为差异具有统计意义,P<0.01为差异具有高度统计意义。3结果3.1心肌缺血模型复制根据模型复制前后心电图变化情况判断、评价心肌缺血大鼠模型复制成功与否,见图1~8。图2,3,5,7与图1对比,结扎后大鼠心电图出现了明显改变,可见T波倒置,J点抬高,证明心肌缺血模型复制成功;图4,6,8分别与各组模型复制后心电图对比,“内关”组、“神门”组大鼠心电图显著改善,J点抬高和异常T波出现率降低,“太渊”组略有改善。3.2内关、神门、太渊、脑室旁核区控制显著提高见表1。结果表明,与正常对照组比较,模型组NE含量显著降低,2组比较差异有高度统计意义(P<0.01);与模型组比较,各电针组NE含量显著升高(P<0.01或P<0.05),提示电针“内关”“神门”“太渊”穴都有升高心肌缺血大鼠下丘脑室旁核区NE含量的作用;各电针组之间比较,“神门”组NE含量显著高于“内关”组和“太渊”组(P<0.05或P<0.01),“内关”组NE含量显著高于“太渊”组(P<0.05),提示电针“神门”穴促进NE含量恢复的作用显著优于“内关”穴及“太渊”穴。4针刺辅助治疗的作用中枢单胺类神经递质NE与心血管活动有着极为密切的联系。动物实验发现,NE作用于中枢α受体可引起血压下降和心率减慢,兴奋中枢β受体则出现相反的效应,使血压升高和心率加快。刘俊岭等采用家兔急性心肌缺血模型,在胸髓蛛网膜下腔微量注射NE,发现NE能显著加强电针“内关”穴促进ST段、T波恢复的作用。李伊为等实验证实,NE参与电针促进急性心肌缺血的恢复,电针可能通过兴奋α受体、抑制β受体起作用。本实验结果显示,针刺不同经穴对心肌缺血大鼠下丘脑室旁核区单胺类神经递质NE含量变化的影响不同。其中,电针手少阴心经穴“神门”、手厥阴心包经穴“内关”促进NE含量的恢复作用显著优于手太阴肺经穴“太渊”。提示下丘脑室旁核区单胺类神经递质NE可能