第14章+免疫学应用

第十四章免疫学应用主要内容第一节免疫学检测（重点）一、抗体的制备（已讲述）二、抗原抗体的检测三、免疫细胞的检测（自学）第二节免疫学预防（重点）一、人工主动免疫二、人工被动免疫第三节免疫学治疗（自学）第一节、免疫学检测二、抗原抗体的检测1抗原抗体反应的特点3抗原或抗体的检测方法2抗原抗体反应的主要因素一、抗体的制备（已讲述）三、免疫细胞的检测（自学）1.抗原抗体反应的特点二、抗原抗体的检测♪（1）特异性♪（2）可见性♪（3）可逆性♪（1）特异性问题思考：1、抗原分子表面与抗体特异性结合的化学基团称为____？A、共同抗原B、同种异型抗原C、交叉抗原D、表位2、抗体分子与抗原表位特异性结合的结构区域称为____？A、FcB、CH

C、CDRD、CL

E、铰链区F、骨架区G、HVR特异性抗原A抗原C抗原B特异性反应交叉反应无反应Ab过剩Ag过剩比例适当，交联成网络♪（2）可见性♪

（3）可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAgAbǾ

疏水作用力*：两个疏水基团对水排斥而趋向聚集范德华力：原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化发生的引力氢键结合力：氢原子与氢受体原子间的引力静电引力：带相反电荷的氨基和羧基，与距离有关2.抗原抗体反应的主要影响因素♪

（1）抗原和抗体的浓度、比例♪

（2）电解质♪

（3）温度♪

（4）酸碱度0.85%的NaCl37℃pH6~8

♪（1）凝集反应♪（2）沉淀反应♪（3）补体参加的反应（自学）♪（4）免疫标记技术3.抗原或抗体的检测方法①直接凝集反应颗粒性Ag与相应Ab，出现肉眼可见的凝集团玻片法♪（1）凝集反应细菌、细胞等颗粒状物质在电解质存在的情况下YYYY血型ABABO测ABO血型颗粒性Ag与相应Ab，出现肉眼可见的凝集团试管法细菌、细胞等颗粒状物质在电解质存在的情况下YYYY诊断布氏菌病临床诊断伤寒（肥达氏反应，Widalreaction）+Y②间接凝集反应YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY+可溶性Ag/Ab先吸附在某些颗粒载体上，形成致敏颗粒，再与相应Ab/Ag产生凝集反应可溶性Ag类风湿因子检测致敏颗粒颗粒性Ag红细胞聚苯乙烯乳胶颗粒活性碳脑膜炎检测可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物抗体浓度不变，抗原浓度不断上升免疫沉淀反应变化图♪（2）沉淀反应出现沉淀量最多的管为最适比例管可溶性抗原：毒素、组织浸液及血清中的蛋白等试管法之一：环状沉淀实验课堂思考：

试管法的主要优缺点？刘奥付新文韩浏抗体+琼脂抗原倾注平板①、单向免疫扩散试验打孔加样放置37℃24～48h观察24～48h观察如何使扩散变快？②、火箭电泳⑤、免疫比浊④、免疫电泳③、双向免疫扩散“凝集反应和沉淀反应”小结凝集反应沉淀反应补体参与的反应直接凝集间接凝集单向免疫扩散火箭电泳免疫比浊补体结合试验等颗粒性抗原与抗体形成肉眼可见的凝集团块可溶性抗原包被在颗粒或细胞表面形成颗粒体抗原，与抗体形成凝集反应含已知抗体/抗原的琼脂板，以相同大小小孔为中心的圆形沉淀圈与加入的抗原/抗体浓度成正相关免疫电泳双向免疫扩散间接凝集抑制等Ag荧光素Ag放射性同位素酶荧光显微镜酶标检测仪射线测量仪化学发光物、金属颗粒等用荧光素、放射性同位素、酶、金属颗粒及化学（或生物）发光剂等作为追踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应♪（4）免疫标记技术Ag硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜利用吸附载体作为固相进行抗原抗体反应吸附载体聚苯乙烯微量反应板（酶标板）Ag聚苯乙烯微量反应板（酶标板）封阻/封闭（block）包被（coat）AgAg①免疫荧光标记法直接法原理示意图标记抗体荧光光源问题思考：直接法会给我们的检测工作带来什么不方面？常用荧光素：异硫氰荧光素罗丹明抗原间接法原理示意图荧光标记抗抗体（二抗）抗体光源抗原②放射免疫标记法（radioimmunoassay，RIA）胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及IgE等灵敏度达pg水平，常用于微量物质测定③酶免疫标记法——Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，（ELISA)酶联免疫吸附测定法检测体液中微量物质的固相免疫测定方法直接酶标法间接酶标法horseradishperoxidase，HRPalkalinephosphatase，AP四甲基联苯胺蓝色常用酶底物显色辣根过氧化物酶邻苯二胺橙黄色碱性磷酸酶对硝基苯磷酸脂黄色a、夹心法（sandwichassay）双抗体夹心法固相载体抗体抗原酶抗体酶标记抗体1.将抗体包被在固相载体上2.如样品中含有抗原，则结合为抗原抗体复合物3.再加入酶标记抗体，则结合为抗体-抗原-酶标记抗体复合物4.酶催化底物并显色双抗原夹心法1.将抗原包被在固相载体上2.如样品中含有抗体，则结合为抗原抗体复合物3.再加入酶标记抗原，则结合为抗原-抗体-酶标记抗原复合物4.酶催化底物并显色酶抗原酶标记抗原抗体抗原固相载体包被待测抗原测定加底物显色封阻/封闭加已知抗体加酶标二抗洗涤/洗脱洗涤/洗脱洗涤/洗脱洗涤/洗脱b、间接法（indirectELISA）“免疫标记技术”小结荧光标记法酶联免疫吸附试验放射性标记法直接荧光法间接荧光法夹心法间接法SAS—ELISA已知抗体包被于固相载体，加待测抗原，再加酶标抗体，显色；反之亦然（先加已知抗原）免疫印迹法标记抗原或者一抗流式细胞术抗原包被于固相载体，加酶标一抗，再加酶标二抗，显色标记二抗标记物与未标记的待测物和对应的抗原或抗体竞争性结合，测定剩余的带放射性标记的免疫复合物的量。灵敏度极高第二节免疫学预防老问题思考第一次患严重疾病而病愈，第二次遭受同一严重疾病，患病结果会怎样？怎么解释？物理、化学是给机体输入抗原性物质，剌激机体产生特异性免疫力一、人工主动免疫人工变异1.死疫苗2.减毒活疫苗病原菌（致病性）、抗原（毒性）杀死的微生物减毒或无毒的活的病原微生物从自然界筛选1.死疫苗2.减毒活疫苗病原菌（致病性）、抗原（毒性）除去病原体中与诱发保护性免疫无关或有害成分只保留有效的免疫原成分3.亚单位疫苗流感病毒：血凝素、神经氨酸酶7.类毒素某些病原菌生长繁殖过程中分泌到菌体外的一种代谢产物，主要为可溶性蛋白质。以革兰氏阳性菌为主

革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，主要为脂多糖外毒素内毒素失去毒性，保留抗原性0.3-0.4%甲醛“人工主动免疫”小结人工主动免疫：给机体输入抗原性物质（疫苗或类毒素等），剌激机体产生特异性免疫力，分为：1、死疫苗：用物理或化学的方法将病原微生物杀死制备而成的制剂2、减毒活疫苗：用人工变异