干货：细胞生长的检测方法大总结（二）

干货：细胞生长的检测方法大总结（二）在细胞生长的检测方法大总结（一）中，我们了解到在研究基因功能或者筛选药物在某种疾病中的作用研究中检测细胞生长增殖曲线的方法今天，医学方小编将继续向大家总结一下有关细胞生长状况的功能学实验。克隆形成实验克隆形成率细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大。一般来说，初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。并且克隆形成率与接种密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液，直接接种在碟皿中，持续一至两周，随时检查，换液，到细胞形成克隆时终止培养。1平板克隆形成试验基本步骤（1）取对数生长期的单层培养细胞，用胰酶消化并吹打成单个细胞，把细胞充分悬浮在培养液中备用。⑵将细胞悬液作梯度倍数稀释，以适当的细胞密度（根据培养细胞的增殖能力）接种于培养皿中。一般，每六孔板一孔以50、100、200个细胞的梯度密度分别接种，并放置于平面轻轻十字转动，使细胞分散均匀。置培养箱中，静置培养1〜3周。（3）经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。每孔加入预冷的纯甲醇1mL，室温固定15-30分钟。然后去固定液，加适量结晶紫染色液，染10〜30分钟，然后用PBS或者双蒸水缓慢轻柔洗去染色液，空气干燥。(4)将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。也可以用imageJ等计算机软件自动统计，最后计算克隆形成率。克隆形成率二克隆数/接种细胞数X100%注意事项平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。软琼脂培养克隆形成试验图片来源网络软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系，悬浮细胞一般用软琼脂培养克隆形成。基本步骤⑴取对数生长期细胞，用胰蛋白酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作活细胞计数，用培养液调整细胞密度根据实验要求作梯度倍数稀释。用蒸馏水分别制备出0.5-1.2%和0.3-0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在401中不会凝固。按1:1比例使0.5-1.2%的琼脂糖和2x细胞培养基混合后，取3mL混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加7〜10mL)，冷却凝固，可作底层琼脂置温箱中备用。按1:1比例让0.3-0.7%的琼脂糖和2x细胞培养基在无菌试管中相混以后，再向管中加入0.2mL的细胞悬液，充分混匀，注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中，形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后，置入细胞培养箱中培养10〜14天。⑸把平皿放置在倒置显微镜下，观察细胞克隆数。计算形成率。注意事项试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过401。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下