β-半乳糖苷酶活性测定方法_第1页
β-半乳糖苷酶活性测定方法_第2页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

β-半乳糖苷酶活性测定（β-galactosidaseassays）1、将过夜培养的菌液按1%接种量到新鲜培养基中培养，待OD600至0.6时取出，放置于冰上；（或可检测不同OD600时，菌的酶活性）2、取50-100μl菌液至1.5ml的离心管中，加370-420μlZbuffer；3、加20μl氯仿和10μl0.1%SDS，振荡混匀，裂解细胞，放置于冰上30分钟；4、向离心管中加入100μl浓度4mg/ml的ONPG，混匀后立即置于30℃反应30-60分钟；5、待颜色变黄后，加入250μl1MNa2CO3中止反应，准确记录变色反应的时间；6、取200μl上清，测定420nm和550nm处的吸光度；7、计算β-半乳糖苷酶酶活力：MillerUnits=1,000×[(OD420－1.75×OD550)]/(t×V×OD600)，其中，OD420和OD550----显色后的反应液读数；OD600----用于显色分析的培养液的细菌密度；t----显色反应时间(单位min)；V----用于显色分析的培养液体积(单位ml)。Zbuffer(总体积100ml)：Na2HPO4·12H2O100mM3.5814gNaH2PO4·H2O40mM0.624gKCl10mM0.07455gMgSO4·7H2O1mM0.0246gβ-mercaptoethanol5.4μl/ml540μl加水到总体积90ml，待试剂溶解后调pH至7.0，最后定容到100ml，4℃储存。Substratesolution(总体积10ml)----现用现配Na2HPO4·12H2O60mM0.215gNaH2PO4·H2O40mM0.0624gONPG4mg/ml0.04g终止液（100m

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 辅导培训

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论