(2025年)细菌室试卷及答案

(2025年)细菌室试卷及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.下列哪种细菌在革兰染色中呈紫色？A.大肠埃希菌B.铜绿假单胞菌C.金黄色葡萄球菌D.流感嗜血杆菌2.巧克力培养基主要用于分离培养哪种细菌？A.肺炎链球菌B.淋病奈瑟菌C.枯草芽孢杆菌D.变形杆菌3.进行血培养时，成人每瓶培养基的推荐接种量为？A.3-5mlB.5-8mlC.10-20mlD.20-30ml4.以下哪种试验可用于区分葡萄球菌和链球菌？A.触酶试验B.氧化酶试验C.凝固酶试验D.吲哚试验5.高压蒸汽灭菌的标准条件是？A.105℃，15分钟B.115℃，20分钟C.121℃，15-20分钟D.132℃，5分钟6.痰标本做细菌培养时，合格标本的标准是镜检每低倍视野鳞状上皮细胞数应？A.＜10个B.＜25个C.＜50个D.无要求7.肠杆菌科细菌的主要鉴定依据是？A.氧化酶阴性、发酵葡萄糖B.氧化酶阳性、氧化葡萄糖C.触酶阴性、发酵乳糖D.触酶阳性、氧化乳糖8.进行β-内酰胺酶检测时，最常用的底物是？A.头孢硝噻吩B.氨苄西林C.亚胺培南D.阿莫西林9.生物安全二级实验室（BSL-2）的基本要求不包括？A.配备生物安全柜B.实验区与非实验区严格分隔C.必须设置独立的空气净化系统D.工作人员需穿防护服10.下列哪种细菌需在微需氧环境（5%-10%CO₂）中培养？A.霍乱弧菌B.幽门螺杆菌C.产气荚膜梭菌D.结核分枝杆菌11.药敏试验中，纸片扩散法（K-B法）的培养基厚度应为？A.2-3mmB.3-4mmC.4-5mmD.5-6mm12.用于肠球菌属鉴定的关键试验是？A.胆汁七叶苷试验B.马尿酸水解试验C.尿素酶试验D.硝酸盐还原试验13.厌氧菌培养时，常用的指示剂是？A.美蓝B.酚酞C.甲基红D.溴甲酚紫14.以下哪种细菌可引起“卫星现象”？A.肺炎克雷伯菌B.流感嗜血杆菌C.嗜麦芽窄食单胞菌D.鲍曼不动杆菌15.进行血培养时，若怀疑为布鲁菌感染，培养时间应延长至？A.3天B.5天C.10天D.21天16.痰标本涂片革兰染色镜检见大量中性粒细胞（＞25个/低倍视野）及少量革兰阳性球菌，提示？A.正常菌群B.上呼吸道污染C.可能为致病菌D.需进一步做抗酸染色17.下列哪种培养基可用于筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）？A.麦康凯培养基B.甘露醇高盐琼脂C.SS琼脂D.中国蓝琼脂18.进行细菌鉴定时，MALDI-TOFMS技术的主要原理是？A.检测细菌代谢产物B.分析细菌核糖体RNA序列C.测定蛋白质指纹图谱D.观察细菌形态特征19.实验室生物安全中，“锐器伤”的主要预防措施不包括？A.使用安全型移液器B.禁止用手直接接触锐器C.操作后立即将锐器放入防刺容器D.戴双层乳胶手套20.以下哪种细菌对万古霉素天然耐药？A.屎肠球菌B.鹑鸡肠球菌C.金黄色葡萄球菌D.粪肠球菌二、填空题（每空1分，共20分）1.革兰染色的步骤依次为______、______、______、______。2.血培养瓶通常包括______瓶和______瓶，分别用于培养需氧菌和厌氧菌。3.痰标本接种时，需同时接种______平板、______平板和______平板（或选择性培养基）。4.药敏试验结果判读的标准主要依据______（机构缩写）发布的指南，2024年版中规定肠杆菌科细菌对头孢他啶/阿维巴坦的敏感折点为______μg/ml。5.实验室质量控制中，培养基的质控应包括______检查、______试验和______试验（用标准菌株验证）。6.厌氧菌分离培养时，常用的气体置换法是______，需将环境中的氧气浓度降至______以下。7.结核分枝杆菌涂片染色常用______法，其抗酸性是由于细胞壁含大量______。8.细菌室生物安全等级应为______级，操作结核分枝杆菌时需在______级生物安全柜中进行。三、简答题（每题8分，共40分）1.简述痰标本细菌培养的完整处理流程。2.列举5种常见的革兰阴性杆菌及其主要鉴定特征。3.说明血培养阳性报警后的处理步骤及注意事项。4.实验室如何进行细菌鉴定的质量控制？请从人员、设备、方法三方面阐述。5.简述β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制及实验室检测方法。四、案例分析题（每题10分，共20分）案例1：患者男性，58岁，因“发热伴寒战3天”入院，临床怀疑血流感染。细菌室接收2套血培养标本（共4瓶），接种后第2天需氧瓶报警阳性。问题：（1）血培养标本采集时应注意哪些关键点？（2）阳性报警后需进行哪些检测？（3）若涂片镜检见革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，下一步应如何鉴定？案例2：某患者痰培养结果回报：草绿色链球菌（++）、奈瑟菌属（+）、肺炎克雷伯菌（+++），镜检鳞状上皮细胞8个/低倍视野，中性粒细胞30个/低倍视野。问题：（1）该痰标本是否为合格标本？依据是什么？（2）如何判断培养结果中的优势菌？（3）若肺炎克雷伯菌对头孢曲松耐药，可能的耐药机制是什么？需进一步做哪些检测？答案一、单项选择题1.C2.B3.C4.A5.C6.A7.A8.A9.C10.B11.C12.A13.A14.B15.D16.C17.B18.C19.D20.B二、填空题1.结晶紫初染；碘液媒染；95%乙醇脱色；稀释复红复染2.需氧；厌氧3.血；巧克力；麦康凯（或中国蓝/伊红美蓝）4.CLSI；≤45.外观；无菌；性能6.厌氧罐法（或厌氧袋法）；0.5%7.萋-尼染色（抗酸染色）；分枝菌酸8.BSL-2；BSL-3三、简答题1.痰标本细菌培养处理流程：①标本接收与审核：观察标本性状（脓性/黏液性），镜检判断是否合格（鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野，中性粒细胞＞25个/低倍视野）；②前处理：用无菌生理盐水稀释或胰酶消化，减少黏液干扰；③接种：分区划线接种血平板、巧克力平板、麦康凯平板（或选择性培养基）；④培养：血平板和巧克力平板置35℃、5%-10%CO₂环境培养18-24小时，麦康凯平板置35℃需氧环境培养；⑤观察：记录菌落形态、溶血情况等，挑取可疑菌落进行革兰染色和生化鉴定；⑥根据鉴定结果和药敏试验回报最终报告，注明“合格痰标本”或“不合格标本（可能污染）”。2.常见革兰阴性杆菌及鉴定特征：①大肠埃希菌：发酵乳糖（麦康凯平板上呈红色菌落），IMViC试验（++--）；②铜绿假单胞菌：产生绿色色素（绿脓素），氧化酶阳性，42℃可生长；③肺炎克雷伯菌：菌落黏稠（拉丝试验阳性），尿素酶阳性，动力阴性；④流感嗜血杆菌：卫星现象（需V、X因子），巧克力平板生长，血平板不生长；⑤鲍曼不动杆菌：氧化酶阴性，动力阴性，对多种抗生素耐药（需结合API20NE等系统鉴定）。3.血培养阳性报警后处理步骤及注意事项：①记录报警时间、瓶号，立即从培养仪中取出；②消毒瓶塞（75%酒精擦拭），无菌抽取培养液涂片革兰染色，镜检记录细菌形态、染色性；③转种：取培养液接种血平板、巧克力平板（必要时厌氧平板），需氧菌置35℃、5%-10%CO₂培养，厌氧菌置厌氧环境培养；④快速鉴定：可采用MALDI-TOFMS或快速生化试验（如触酶、凝固酶）初步判断；⑤注意事项：严格无菌操作，避免交叉污染；若为双瓶（套）阳性，提示感染可能性大；若仅单瓶阳性需考虑污染（尤其是皮肤正常菌群如凝固酶阴性葡萄球菌）。4.细菌鉴定质量控制：①人员：定期参加培训（如CLSI指南解读、新型设备操作），通过室间质评（如CAP、卫生部临检中心）验证能力，操作时双人核对关键步骤；②设备：定期校准培养箱（温度±1℃）、生物安全柜（气流速度0.38-0.5m/s）、全自动鉴定仪（每日做功能测试），记录维护日志；③方法：使用标准菌株（如ATCC25922金黄色葡萄球菌、ATCC25923大肠埃希菌）进行培养基性能验证，每批新培养基使用前做阳性（生长）和阴性（无菌）对照；鉴定卡/条需在有效期内使用，严格按说明书操作，疑难菌株需通过分子生物学方法（如16SrRNA测序）复核。5.β-内酰胺类抗生素耐药机制及检测方法：①产生β-内酰胺酶（如ESBLs、AmpC酶、碳青霉烯酶）：水解β-内酰胺环，检测方法包括头孢硝噻吩纸片法（快速检测β-内酰胺酶）、双纸片协同试验（ESBLs）、三维试验（AmpC酶）、改良Hodge试验（碳青霉烯酶）；②青霉素结合蛋白（PBPs）改变（如MRSA的PBP2a）：通过头孢西丁纸片法或mecA基因检测；③外膜通透性降低（如铜绿假单胞菌OprD蛋白缺失）：需结合MIC测定和基因检测；④主动外排系统（如嗜麦芽窄食单胞菌的Sme系统）：通过MIC梯度试验或外排泵抑制剂试验辅助判断。四、案例分析题案例1：（1）采集关键点：①时机：寒战或高热初期（未用抗生素前）；②消毒：皮肤用2%碘酊或2%葡萄糖酸氯己定-70%酒精消毒，待干后穿刺；③血量：每瓶接种10-20ml（成人），2套/次（间隔30分钟）；④标识：注明患者信息、采集时间、是否使用抗生素。（2）阳性后检测：涂片革兰染色（观察形态、染色性），转种血平板和巧克力平板，做触酶试验（区分葡萄球菌和链球菌），若触酶阳性进一步做凝固酶试验（区分金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌）。（3）革兰阳性葡萄状球菌，触酶阳性，凝固酶阳性→金黄色葡萄球菌；若凝固酶阴性→凝固酶阴性葡萄球菌（需结合菌落计数和临床判断是否为污染）。案例2：（1）合格标本：鳞状上皮细胞8个/低倍视野（＜10个），中性粒细胞30个/低倍视野（＞25个），符合合格痰标本标准。（2）优势菌判断：以培养结果中菌落数量最多（