生物样本取样与保存方法试题及答案

生物样本取样与保存方法试题及答案一、单项选择题（本大题共20小题，每小题1.5分，共30分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的）1.在临床生化检验中，测定血清酶类（如ALT、AST）时，首选的抗凝剂是（）。A.肝素锂B.EDTA-K2C.氟化钠D.枸橼酸钠2.采集血培养样本时，为了提高阳性率并减少污染，通常推荐的采血量与培养基的比例约为（）。A.1:5B.1:10C.1:20D.1:23.用于血糖测定时，为了抑制糖酵解，常用的采血管添加剂是（）。A.肝素B.分离胶C.氟化钠-草酸钾D.EDTA4.在分子生物学检测中，提取高质量DNA的最佳血液样本保存条件是（）。A.室温放置24小时B.C冰箱保存3天C.−CD.−C5.尿液样本进行肌酐测定时，最佳的防腐剂是（）。A.甲苯B.浓盐酸C.甲醛D.麝香草酚6.采集静脉血时，如果止血带压迫时间过长（超过1分钟），会导致以下哪项指标显著升高？（）。A.钾离子()B.胆固醇C.乳酸D.钠离子(N)7.进行凝血功能检查（如PT、APTT）时，必须使用的抗凝剂及其与血液的比例是（）。A.EDTA-K2，1:9B.枸橼酸钠（3.2%或3.8%），1:9C.肝素钠，1:9D.草酸钾，1:48.痰液样本用于结核分枝杆菌检查时，为了提高检出率，通常需要连续采集（）。A.1次B.2次C.3次D.5次9.在低温保存生物样本时，为了防止冰晶形成对细胞结构的破坏，最关键的措施是（）。A.快速冷冻（速冻）B.缓慢冷冻C.先脱水后冷冻D.反复冻融10.下列关于全血样本在C环境下的保存时限，说法正确的是（）。A.血气分析必须在15分钟内完成B.血常规（CBC）可保存48小时C.糖化血红蛋白（HbA1c）可保存7天D.红细胞沉降率（ESR）可保存24小时11.进行血药浓度监测时，通常采集的样本类型是（）。A.全血B.血清C.血浆D.任意一种均可12.用于液基细胞学检查（TCT）的宫颈脱落细胞样本，其保存液通常含有（）。A.甲醛B.甲醇C.丙酮D.二甲苯13.在采集动脉血气分析样本时，采集完成后必须立即进行的操作是（）。A.离心分离血浆B.混匀抗凝C.排空气泡并封闭针头D.冷藏14.下列哪种抗凝剂会抑制PCR反应中的TaqDNA聚合酶活性？（）。A.肝素B.ACD（枸橼酸-枸橼酸钠-葡萄糖）C.枸橼酸钠D.草酸钾15.脑脊液（CSF）样本采集后，若需进行微生物培养，应优先将样本注入（）。A.真空无菌管B.肝素抗凝管C.EDTA抗凝管D.普通干燥管16.24小时尿蛋白定量测定中，常用的防腐剂是（）。A.甲苯B.浓盐酸C.甲醛D.碳酸锂17.全血样本离心分离血清或血浆时，推荐的相对离心力（RCF）和时间通常是（）。A.1000×B.1500−C.3000×D.5000×18.检测氨（N）时，样本采集后必须立即置于冰浴中并在（）内完成测定。A.10分钟B.30分钟C.1小时D.2小时19.组织样本进行石蜡包埋前，固定的目的是（）。A.脱水B.透明C.防止细胞自溶和腐败，保持细胞原有结构D.使组织变硬以便切片20.在生物样本库中，长期保存组织样本的最佳温度是（）。A.−B.−C.−D.液氮气相（−C至−二、多项选择题（本大题共10小题，每小题3分，共30分。在每小题给出的四个选项中，有二至四项是符合题目要求的。多选、少选、错选均不得分）1.导致溶血的因素包括（）。A.注射器针头过细B.采血过程中混入泡沫C.样本运输过程中剧烈震荡D.血液注入试管时用力过快2.下列关于真空采血管采血顺序的描述，正确的有（）。A.血培养管应最先采集B.凝血管（蓝管）应在血培养之后、血清管之前采集C.血常规管（紫管）应最后采集D.含分离胶及促凝剂的血清管（黄管）应在抗凝管之后采集3.下列哪些检测项目必须使用血浆作为检测样本？（）。A.凝血酶原时间（PT）B.环孢素浓度监测C.急诊生化电解质D.血氨4.影响样本检测前质量的生物学变异因素包括（）。A.采血体位（卧位vs坐位vs立位）B.运动状态C.进食时间（空腹vs餐后）D.采血时间（昼夜节律）5.下列关于尿液样本保存的说法，正确的有（）。A.尿液pH值较低时，细胞管型容易破坏B.尿液若不能及时检测，应冷藏保存C.冷藏保存尿液可能会析出结晶影响镜检D.做尿沉渣检查时，首选甲醛作为防腐剂6.用于分子病理诊断的FFPE组织样本，在处理过程中需注意（）。A.固定液通常使用10%中性缓冲福尔马林B.固定时间不宜过长，以免影响PCR扩增C.固定时间不宜过短，以免固定不充分D.脱蜡过程必须彻底7.下列情况属于样本拒收标准的有（）。A.样本容器破损B.样本标签与申请单信息不符C.溶血严重的脂血样本（对特定检测项目有影响）D.抗凝剂与检测项目不匹配8.检测全血铅时，对采集容器的要求包括（）。A.必须使用无重金属污染的专用容器B.通常使用肝素或EDTA抗凝C.可使用玻璃试管D.必须使用塑料试管（trace-metalfree）9.下列关于样本冷冻保存的描述，正确的有（）。A.−CB.−CC.反复冻融会破坏大分子结构D.酶类样本在−C10.粪便样本采集时需要注意（）。A.必须采集新鲜粪便B.应选取含有脓血、黏液的部分C.做隐血试验时应禁食肉类及维生素CD.做寄生虫检查时，需留取24小时粪便三、填空题（本大题共15空，每空1分，共15分）1.临床上测定糖化血红蛋白（HbA1c）时，推荐使用的抗凝剂是―，其作用原理是螯合血液中的钙离子。2.采集末梢血进行血常规检测时，成人通常在手指―侧采血，婴幼儿则在―处采血。3.在凝血活酶生成试验中，常用的抗凝剂是―。4.为了防止尿液样本中激素降解，常加入防腐剂―。5.血液样本采集后，若需分离血清，应在室温下放置―分钟后离心。6.进行血气分析时，肝素化注射器中肝素的浓度应控制在―IU/mL，以免稀释样本影响检测结果。7.长期保存病毒样本时，为了保持其感染力，通常在培养基中加入―作为低温保护剂。8.组织病理切片制作中，组织从固定液取出后，下一个步骤是―。9.采集24小时尿标本时，通常要求病人从早晨7点排空尿液弃去，之后所有尿液收集至次日早晨7点的―尿液。10.检测血清铁时，为防止铁离子被污染，严禁使用―材质的容器。11.在蛋白质组学研究中，为了防止蛋白质降解，裂解液中常加入蛋白酶抑制剂，如―。12.低温冰箱保存样本时，−C冰箱内的空气湿度要求较低，且开门时间应尽量缩短，以防止―13.脑脊液标本放置过久，细胞可发生变形或破坏，导致计数偏低和分类困难，故标本采集后应在―内计数完毕。14.检测血沉（ESR）时，抗凝剂与血液的比例必须严格准确，常用的抗凝剂是―。四、判断题（本大题共10小题，每小题1分，共10分。正确的打“√”，错误的打“×”）1.只要抗凝剂种类选择正确，采血量多一点或少一点对检验结果没有影响。（）2.所有的静脉采血管都必须在采集后立即颠倒混匀5-8次。（）3.进行微生物培养的血样本，通常不需要抗凝，直接注入培养瓶中。（）4.溶血的血清样本对钾离子测定结果无影响，因为红细胞内的钾离子浓度与血浆相近。（）5.冷藏是保存所有生物样本的最佳方式。（）6.使用分离胶采血管可以加速血清分离，并减少细胞代谢对血清成分的影响。（）7.采集动脉血气样本时，若进入少量空气，应立即排出，以免影响氧分压结果。（）8.做尿常规检查时，晨尿比随机尿更有利于发现病理成分。（）9.DNA样本在C条件下可以保存数年而不降解。（）10.液体活检中的循环肿瘤DNA（ctDNA）通常需要使用专用的Streck管保存以防止白细胞裂解污染。（）五、名词解释（本大题共5小题，每小题3分，共15分）1.溶血2.昼夜节律3.空腹采血4.分离胶5.冷链六、简答题（本大题共5小题，每小题6分，共30分）1.简述真空采血管采血顺序的正确排列及其理由。2.简述样本溶血对检验结果的主要影响（至少列举三项）。3.简述血液样本采集后发生溶血的常见原因及预防措施。4.简述−C5.简述尿液样本防腐的常用方法及其适用范围。七、综合应用与分析题（本大题共3小题，共20分）1.（6分）某患者被送至急诊科，需进行生化全项（肝肾功能、电解质、血糖、心肌酶谱）、血常规、凝血功能及血沉检测。护士在一次性静脉穿刺过程中需要采集多管血液。请根据临床检验标准化要求，设计出合理的采血管顺序及各管对应的检测项目，并解释为何凝血功能检测管要在血常规之前采集？2.（7分）某研究小组计划开展一项关于肺癌标志物的回顾性研究，需要使用生物样本库中保存了5年的组织样本。现有两种保存方式的样本：A组为−C3.（7分）某临床检验科收到一份生化急诊样本，检测项目包括钾、钠、葡萄糖、肌酐。样本在采集后2小时送达实验室，外观显示呈淡红色浑浊状。实验室人员发现该样本未使用促凝管，且在送检途中未进行任何温控处理。请分析：(1)该样本可能发生了什么变化？(2)这种变化对钾、葡萄糖、肌酐的检测结果有何具体影响（偏高、偏低或无影响）？(3)针对此情况，检验人员应如何处理该样本？参考答案与详细解析一、单项选择题1.【答案】A【解析】肝素是常用的抗凝剂，它不影响血清酶类（如ALT、AST）的活性测定。EDTA是强螯合剂，会结合某些酶的辅因子（如金属离子），抑制酶活性。氟化钠是强效的糖酵解抑制剂。枸橼酸钠主要用于凝血和血沉。2.【答案】B【解析】血培养瓶中培养基与血液的比例一般为1:10至1:20，充足的培养基可以稀释血液中的抑制物（如抗体、补体）并提供细菌生长所需的营养，从而提高阳性率。3.【答案】C【解析】氟化钠可以抑制烯醇化酶，从而阻断糖酵解途径，防止血糖在体外被细胞代谢分解。草酸钾在此处作为抗凝剂配合使用。4.【答案】D【解析】DNA在−C下长期保存可能发生缓慢降解，且反复冻融风险大。−5.【答案】B【解析】浓盐酸可保持尿液呈酸性，防止肌酐在碱性条件下分解或降解，同时有助于激素（如儿茶酚胺）的保存。6.【答案】C【解析】止血带压迫时间过长会导致静脉淤血、缺氧，局部细胞进行无氧代谢，导致乳酸升高；同时由于毛细血管内外压力差改变，液体外渗，血液浓缩，导致蛋白等大分子浓度相对升高。7.【答案】B【解析】凝血因子检测需要钙离子参与反应，枸橼酸钠能螯合钙离子抗凝。比例严格要求为1:9（抗凝剂:全血），比例不当会直接影响APTT、PT结果。8.【答案】C【解析】结核杆菌在痰液中分布不均，且排出具有间歇性。世界卫生组织推荐至少连续采集3次痰标本（夜间痰、晨痰、即时痰）以提高检出率。9.【答案】A【解析】快速冷冻（如投入液氮）能使细胞内的水分迅速形成微小的冰晶，避免大冰晶刺破细胞膜和细胞器，从而保护细胞结构的完整性。10.【答案】A【解析】血气分析中的pH值、p、pC11.【答案】C【解析】治疗药物监测（TDM）通常测定的是药物在血液中的总浓度（包括蛋白结合型和游离型），使用抗凝全血或血浆均可，但血浆最为常用，因为离心后纤维蛋白凝块可能包裹药物。12.【答案】B【解析】液基细胞学保存液主要成分是甲醇或乙醇，具有固定细胞形态、裂解红细胞、杀菌防腐的作用。13.【答案】C【解析】空气中的氧气分压高于动脉血，二氧化碳分压低于动脉血，接触空气会导致p升高，pC14.【答案】A【解析】肝素是PCR反应的强抑制剂，它与Taq酶结合或干扰引物退火。虽然可以通过商业化的肝素去除试剂盒处理，但通常首选EDTA或ACD抗凝。15.【答案】A【解析】脑脊液培养对无菌要求极高，必须注入无菌管中。肝素、EDTA等抗凝剂可能抑制某些细菌的生长。16.【答案】A【解析】甲苯可在尿液表面形成薄膜，阻止细菌接触尿液中有机物，起到防腐作用，适用于尿蛋白、尿糖等化学成分定量。浓盐酸用于激素、儿茶酚胺等；甲醛用于有形成分（管型、细胞）保存。17.【答案】B【解析】常规生化免疫检测离心条件一般为1500−18.【答案】B【解析】氨在血中极不稳定，离体后细胞代谢会持续产生氨，且氨易从血液中逸出。必须置于冰浴中停止酶活性，并在30分钟内完成测定。19.【答案】C【解析】固定的主要目的是利用固定剂（如福尔马林）使细胞蛋白质变性凝固，从而防止细胞自溶和组织腐败，保持细胞和组织原有的形态结构。20.【答案】D【解析】−C虽然常用，但长期保存（数十年）最佳方案是液氮气相（−C以下），可完全停止生化反应，避免二、多项选择题1.【答案】ABCD【解析】溶血原因包括：物理因素（震荡、针头过细导致剪切力过大）、化学因素（接触表面活性剂）、操作因素（注水过快产生泡沫）、代谢因素等。2.【答案】ABD【解析】标准顺序为：血培养（蓝/黄）→凝血管（蓝）→血沉管（黑）→促凝管/血清管（红/黄）→肝素管（绿）→EDTA管（紫）→糖酵解管（灰）。紫管不是最后，灰管通常最后。但选项中C说“紫管应最后采集”不完全准确，若没有灰管，紫管可能最后；若有灰管，灰管最后。但在一般选项中，若不含灰管，紫管常在最后。但在严格CLSI标准中，血培养最先，凝管其次，血清管第三，肝素/EDTA在后。本题C选项表述为“应最后采集”过于绝对，若存在氟化钠管则错误。但在常规组合（生化+免疫+血常规）中，紫管常最后。不过，更严谨的答案通常排除C。但在本题给出的选项中，A、B、D是绝对正确的。C在特定语境下常被选，但严格来说，含抑制剂的管（如灰管）应在最后。在此以CLSIH3-A6为准：血培养→凝血管→无添加剂管/促凝管→肝素管→EDTA管→血糖管。若无血糖管，EDTA管最后。若题目未提及血糖管，C可视为正确。但考虑到严谨性，通常多选题中，C常被视为正确（因为常做的组合中血常规是最后一管）。此处选择ABCD较为符合一般考试逻辑，但若严格按标准，C有争议。让我们看D，含分离胶及促凝剂（黄管）应在抗凝管（绿、紫）之前。所以D正确。C在无灰管情况下正确。本题选ABCD。（注：部分教材认为紫管在肝素管之后）。3.【答案】ABC【解析】PT必须用血浆（枸橼酸钠抗凝）。环孢霉素浓度监测常用全血（特异性高），但也可用血浆。急诊生化电解质为了快速检测，常使用肝素抗凝血浆（无需等待血液凝固）。血氨必须用血浆或全血（肝素化），且需冰浴。4.【答案】ABCD【解析】体位影响水分分布（立位蛋白、细胞计数升高）；运动影响酶（CK、LDH）、激素；进食影响血糖、血脂；昼夜节律影响皮质醇、铁、激素等。5.【答案】BC【解析】尿液pH偏酸时，细胞管型相对稳定，偏碱时易溶解。冷藏可抑制细菌生长，但会导致尿酸盐析出沉淀。甲醛用于保存有形成分，但干扰蛋白检测（如本周氏蛋白）。甲苯用于化学成分防腐。6.【答案】ABCD【解析】FFPE样本是分子病理的重要来源。固定液必须是中性缓冲福尔马林以保护DNA/RNA。固定时间过长会导致核酸交联，PCR扩增困难；过短则固定不佳。脱蜡不彻底会抑制酶切和扩增反应。7.【答案】ABCD【解析】拒收标准包括：标识错误、容器破损、样本量不足、严重溶血/脂血/黄疸（对结果有干扰时）、抗凝剂错误、采集时间不当等。8.【答案】ABD【解析】微量元素检测严禁使用玻璃管（金属溶出），必须使用专用的塑料采血管（经过去金属处理）。抗凝剂常用肝素或EDTA。9.【答案】ABC【解析】−C适合短期，−C适合长期。反复冻融破坏蛋白和核酸结构。酶类在−C10.【答案】ABC【解析】粪便应新鲜，选取异常部分。隐血试验需素食（不吃肉以免出现假阳性，不吃VitC以免出现假阴性）。寄生虫检查通常留取新鲜粪便，24小时混合会导致原虫失活。三、填空题1.【答案】EDTA-K2或EDTA-K32.【答案】左；足跟（或大拇指）3.【答案】草酸钠或枸橼酸钠4.【答案】浓盐酸5.【答案】30（或15-30）6.【答案】10-100（或低浓度，如<50）7.【答案】二甲基亚砜（DMSO）8.【答案】脱水9.【答案】最后一次10.【答案】玻璃11.【答案】PMSF（苯甲基磺酰氟）12.【答案】结霜或温度波动13.【答案】1小时14.【答案】枸橼酸钠（109mmol/L）四、判断题1.【答案】×【解析】抗凝剂与血液的比例必须严格准确，特别是凝血试验（蓝管），比例偏差会直接影响离子强度和凝血因子活性。2.【答案】×【解析】只有含抗凝剂和分离胶的试管需要混匀。无添加剂的血清管（红管）禁止混匀，否则会引起溶血。3.【答案】√【解析】血培养瓶内培养基含有抗凝剂（通常为SPS或聚茴香脑磺酸钠），且细菌生长需要全血，故直接注入。4.【答案】×【解析】红细胞内钾离子浓度（约150mmol/L）远高于血浆（3.5-5.5mmol/L），溶血会导致血清钾假性显著升高。5.【答案】×【解析】冷藏不适用于所有样本，如冷球蛋白、阵发性冷性血红蛋白尿症等，低温会导致沉淀或溶血。此外，某些微生物（如脑膜炎奈瑟菌、淋球菌）对冷敏感。6.【答案】√【解析】分离胶在离心后位于血清和血细胞之间，形成物理屏障，阻止细胞内外物质交换，减少细胞代谢对血清成分的影响。7.【答案】√【解析】空气会改变血气分压，必须立即排出。8.【答案】√【解析】晨尿在膀胱内停留时间长，成分浓缩，有利于检出管型、细胞等病理成分。9.【答案】×【解析】DNA在C下长期保存会被残留的DNase缓慢降解，长期保存必须−C或−10.【答案】√【解析】Streck管含有专用固定剂，可以稳定白细胞，防止其破裂释放基因组DNA，从而避免稀释ctDNA的浓度。五、名词解释1.【答案】溶血：指红细胞膜破裂，血红蛋白释放到血浆或血清中的现象。可由物理、化学或生物因素引起，会导致多项生化指标检测结果出现误差。2.【答案】昼夜节律：指人体内的某些物质（如激素、铁、白细胞计数等）在24小时内随时间呈现规律性波动的生理现象。采样时间需固定以保证可比性。3.【答案】空腹采血：指在禁食8-12小时后采集的血液样本。目的是消除饮食对血脂、血糖、肾功能等指标的影响。4.【答案】分离胶：一种具有特定粘度和密度的疏水性高分子聚合体，在离心力作用下移至血清和血细胞之间形成屏障，用于快速分离血清并原位保存。5.【答案】冷链：指从样本采集到检测分析的全过程中，通过采用制冷、保温等技术手段，使样本始终处于规定的低温环境（如2−C或六、简答题1.【答案】采血管顺序：血培养瓶（厌氧/需氧）→凝血管（蓝管）→血沉管（黑管）→无添加剂管（红管）或促凝管/分离胶管（黄管）→肝素管（绿管）→EDTA管（紫管）→糖酵解抑制剂管（灰管）。理由：(1)血培养应最先采集，以避免皮肤定植菌污染或采血过程中将其他管内的添加剂带入。(2)凝血管（蓝管）其次，因为其对采血量和抗凝比例要求最严，且其含有的钙离子螯合剂极少，若后采可能被前管携带的添加剂（如肝素、EDTA）污染，严重影响凝血结果。(3)其他抗凝管按添加剂对后续检测的潜在干扰程度排列。2.【答案】(1)钾离子（）：显著升高（红细胞内高钾释放）。(2)乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、谷草转氨酶（AST）、血红蛋白：显著升高（红细胞内酶释放）。(3)钠离子（N）、氯离子（C）：可能偏低（受细胞内低浓度液体稀释）。(4)颜色干扰：血红蛋白的颜色会干扰比色反应，导致某些项目（如总胆红素）测定结果假性偏高。3.【答案】常见原因：(1)采血器针头过细，抽吸力过大导致红细胞剪切破坏。(2)采血过程中产生泡沫（注入试管过快）。(3)样本运输过程中剧烈震荡。(4)离心速度过快或时间过长。(5)样本保存温度不当（如全血冷冻）。预防措施：(1)选择合适的针头型号。(2)采血后拔掉针头，沿管壁缓慢注入。(3)运输时避免剧烈震荡。(4)严格遵循离心参数。(5)全血禁止冷冻，及时检测。4.【答案】(1)温度监控：确保冰箱温度稳定维持在−C(2)避免反复冻融：样本应分装保存，避免单次大包装反复取出融化。(3)安全防护：操作时佩戴防冻手套和护目镜，防止冻伤。(4)样本存放：样本应清晰标记，存放在专门的冻存盒或架子上，并有详细记录。(5)除霜：定期清理冰箱霜层，保持散热效率。(6)备用电源：配备不间断电源（UPS），防止断电导致样本损坏。5.【答案】(1)冷藏（C）：适用于短期保存（如数小时内），可抑制细菌生长，但可能析出结晶。(2)甲苯：适用于尿蛋白、尿糖、尿肌酐等化学成分定量，表面形成薄膜防腐。(3)甲醛：适用于尿沉渣计数（Addi