毕业论文一种新型杀菌剂制备及性能研究

1、.新型杀菌剂的制备及性能完成日期：讲师签名：答复小组成员签名：新型杀菌剂的制备及性能摘要本论文对高分子质量的壳聚糖进行分子修饰，在水箱条件下，使一定数量的壳聚糖、甲基、碘甲烷在碱性环境中适当的时间反应，合成了用N代替铵盐的壳聚糖抗菌剂、4级铵盐壳聚糖。水溶性四级铵盐壳聚糖(TMC)利用傅立叶红外频谱检测(FT-IR)进行表征和分析。TMC对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌性能进行研究，对比未修饰的壳聚糖。结果表明，TMC对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有一定的抑菌效果，而壳多糖对两种试菌没有明显的抑菌效果。对TMC筛选了中华试剂，卵磷脂。TMC研究与细菌的接触作用5分钟，10分钟，15分钟，20分钟

2、的抑菌效果。结果表明，接触时间越长，TMC的抑菌效果越好。牙齿研究对更好的开发、利用第四级铵盐外壳聚糖制作成熟杀菌剂具有十分重要的意义。关键词：壳聚糖；4级铵盐杀菌剂中和剂the preparation of a new fungicide and its propertiesAbstractIn this paper，The polymer molecular mass of chitosan modified conditions under The water bath A certain amount of chitosan，Dimethyl sul foof unmodified c

3、hitosan as a control . the results showed that 3360 TMC for Escherichia coli and staphy locous aureus has certain inhibitory effer Whilestudy for a better exploitation of the quaternary ammonium salt of chitosan，making it a proven fungicide has very important significance .key words : chitosan:Quate

4、rnary ammonium salt；GermicideNeutralizing agent目录0前缀41实验材料和工具61.1实验材料和试剂61.2实验仪器62实验方法82.1 4级铵盐壳聚糖的合成82.2壳聚糖和4级铵盐壳聚糖的红外频谱特性82.3 4级铵盐壳聚糖的抗菌活性2.3.1培养基的制备和试剂准备82.3.2菌株接种和培养92.3.3测量和分析102.4 4 4级铵盐壳聚糖的中和剂筛选102.5 4级铵盐壳聚糖抗菌活性评价113分析实验结果123.1 4级铵盐壳聚糖的红外光谱表征123.2 4级铵盐壳聚糖抗菌活性的检测123.3 4级铵盐壳聚糖的中和剂筛选143.4 4 4级铵盐

5、壳聚糖抗菌活性评价153.4.1 4级铵盐壳聚糖对金黄色葡萄球菌的抗菌作用153.4.2 4级铵盐壳聚糖对大肠杆菌的杀菌效果174汇总194.1论文的主要结论194.2现有问题和可持续研究问题194.3 4级铵盐壳聚糖作为杀菌剂的前景19工具书20审计22.零前缀自然界有大量有害微生物，不仅危害人们的健康，还导致各种材料的分解、变质、腐败，危害环境和工业生产，造成重大经济损失1。防止有害微生物的最有效方法是依赖化学试剂，即杀菌剂2。杀菌剂被称为杀生剂、杀菌剂、杀菌剂等，一般指能有效控制或杀死水系微生物细菌、真菌、藻类的化学剂3。外壳(CS)是资源丰富的天然氨基多糖，从节肢动物外壳和真菌类细胞壁

6、中广泛提取的甲壳素可以通过脱乙酰化进行制造，具有优良的生物降解性、生物体积合成、无毒副作用4，具有优越的生物活性功能，良好的生物膜特性，较强的抗菌防腐保存能力，引起了国内外研究人员的广泛关注和重视但是壳聚糖在分子中含有大量-OH和-NH2，形成复杂的氢键作用，只能在酸性条件下使用，壳聚糖不能溶于水和大部分有机溶剂，受到抑菌应用的极大限制6。第四级铵盐化合物在1915年首次合成后，发现该化合物有一定的杀菌作用7。进一步研究表明，季铵盐的氨基与微生物的细胞膜有静电吸附作用，可以杀死细菌、真菌和病毒8。第四级铵盐化合物具有广谱高效杀菌性能、使用范围、水溶性、性质稳定、安全低毒、低成本价钱等多种优点，

7、广泛应用于自然环境、医院消毒、机械设备表面、防生材料等9。之后的实验表明，将4级铵盐侧链引入外壳聚糖分子，可以增加正电荷的量，大大提高水溶性，更强地抑制细菌。革兰氏阳性和阴性均有良好的抑菌效果。在自然环境、医院消毒、机械设备表面、防腐材料等方面有很广泛的应用。因此，第四级铵盐壳聚糖作为生物杀菌剂具有广泛的应用价值11。研究结果表明，4级铵盐消毒液的抑制作用很强，但杀菌实验中必须有效地消除残留药物的干扰，才能真正检测到实际杀菌效果，牙齿问题一直没有很好地解决。随着消毒剂配方的复杂，去除残留消毒剂已成为评价这种消毒剂的技术难题12。本论文合成了一种4级铵盐壳多糖，检测了4级铵盐壳多糖对其他菌种的抑

8、制作用，研究了4级铵盐壳多糖水溶液的稳定性，确定其是否可以用作一种生物抑制剂，同时筛选了4级铵盐壳多糖杀菌剂的中和剂，为产品开发奠定了理论基础。1实验材料和工具1.1实验材料和试剂第四级铵盐壳聚糖：实验室自制；壳低聚糖分析顺青岛鸿海生命工程学科有限公司购买；碘甲烷分析顺从上海山浦化学有限公司购买；二甲基亚砜分析顺天津广成化学试剂有限公司购买；磷酸氢钠分析顺江苏强化工有限公司购买；盐酸分析顺从莱阳经济技术开发区精细化工厂购买；蛋黄卵磷脂、营养琼脂粉、营养肉汤粉从北京奥博星生命工程学科有限责任公司购买；氢氧化钠，乙醇国药集团化学试剂有限公司购买；培养基：(1)液体培养基：利用营养肉汤粉和蒸馏水，制

9、造浓度为1.9%(w/v)的液体培养基。(2)固体培养基：使用营养琼脂分和蒸馏水制作浓度为3.3%(w/v)的固体培养基。菌株：(1)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，s . aureu)；(2)大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)都由本实验室提供1.2实验设备电子秤型号：AB104-N上海梅特勒托利多振动培养箱型号：HZQ-X100哈尔滨东电子技术有限公司磁力混合器模型：RO10德国伊卡公司电热恒温培养箱型号：DHP-9052上海奇新科学仪器有限公司垂直流式台式机超清洁工作台型号：SCW-CZ-650烧酒宏瑞净化技术有限公司集热式恒温加热磁搅拌

10、器。型号：DF-101S河南一华乐器有限公司立式压力蒸汽灭菌锅型号：GI45DS上海博勋产业有限公司傅里叶红外光谱仪型号：Nicolet-380美国热电集团移动器德国Eppendor公司数字酸度计俄亥俄乐器(上海)有限公司冷冻干燥机美国SIM有限公司2实验方法2.1 4级铵盐壳聚糖的合成15%NaOH溶液的赵霁：测量3g氢氧化钠，将其溶解在17毫升水中，形成氢氧化钠溶液。确切地说，将2g外壳聚糖粉放入包含12ml 15% NaOH溶液的扁平烧瓶中，在室温下溶解10min，然后加热到80ml二甲基亚砜，12ml碘甲烷，60水浴，反应60分钟。60分钟后，在烧瓶中加入6ml 15%的NaOH溶液和

11、6ml碘甲烷，继续反应60min。反应结束后添加无水乙醇，会出现白色沉淀，反应中断，透析进行3天，用冷冻干燥机冷冻产品，可以获得水溶性4级铵盐外壳糖。2.2壳聚糖和四级铵盐壳聚糖的红外频谱特性用Nicolet-380型红外光谱分析。外壳聚糖和4级铵盐壳糖和溴化钾1:5比例分别充分混合，压缩5分钟，制成碎片。频谱分辨率2厘米-1，测量范围：420-4000厘米-1，扫描次数：30次。2.3 4级铵盐壳聚糖的抗菌活性采用平面涂片法，将仅含菌液的PBS溶液作为空对照，以壳多糖或4级铵盐壳多糖的菌液作为实验组添加，观察相同时间后菌落的生长情况，检测4级铵盐壳多糖的抑菌性能13。2.3.1培养基的制备和

12、试剂制备将一定量的营养阵地放入500毫升的三角瓶中，加入适量蒸馏水，配制浓度为3.3%(w/v)的固体培养基，然后放入磁力搅拌机溶解，以300rpm的速度混合。用精密pH测试条测定营养汤的pH值。如果pH小于7.6，在搅拌状态下，在营养肉汤中加入1毫升/L NaOH溶液，用pH试纸检测pH值，直到培养基PH值为7.6牙齿。相反，用1moL/L HCL溶液调节，pH调节到7.6。完全溶解后，放入立式蒸汽灭菌锅内，在121C处放入高温灭菌20min。灭菌后趁热倒入培养皿，冷却，准备营养琼脂固体培养基。准确地取0.1g壳糖，放在紫外线灭菌带灭菌备用。准确地取0.1g 4级铵盐外壳聚糖，准备在紫外线灭

13、菌带(UV灭菌带)中。PBS缓冲液的赵霁：取正确的7.9gNaCl、0.2gKCl、0.24gKH2PO4(或1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，在800mL无菌蒸馏水中溶解，完全溶解。用精密pH测试条测定溶液汤的pH值。如果pH低于7.4，则在PBS溶液中加入1moL/L NaOH溶液一滴混合，并经常用pH试纸测量，直到培养基PH达到7.4为止。相反，用1moL/L HCL溶液调节，pH调节到7.4。最后，将蒸馏水放入1L，结果溶液用PBS溶液(磷酸缓冲盐溶液)保存在4冰箱即可。2.3.2菌株的接种和培养用接种针接种适量金黄色葡萄球菌，浸泡在装有10毫升无菌营养肉汤的试管中，迅速震动2min，取出接种针的细胞，均匀地进入液体培养基，定植20-30s，振动培养24h。培养后，用灭菌移动器将0.5毫升的菌液吹进含有4.5毫升无菌凝结水的试管，均匀混合管内的菌液，制成10-1的菌显液，然后重复牙齿步骤，调整菌液浓度，每毫升稀释液中的细菌数为106个。将三个