细菌与病毒的病原学检查法

1、第七章 细菌与病毒的病原学检查法,诊断方法： 形态学检查 分离培养和鉴定 检测抗原 检查基因序列 检测抗体 标本的采集与运送： 无菌操作 部位 时间 用抗生素前 双份血清：急性期、恢复期 尽快送检：冷藏运送、做好标记,第一节 细菌感染的微生物学检查法,一、细菌学诊断 形态学检查 1.普通光学显微镜检查法： 2.暗视野显微镜检查法：检查活菌、 螺旋体及其动力 3.荧光显微镜检查法： 病原菌的分离培养 生化试验 血清学鉴定:玻片凝集试验 动物实验：毒力、致病性 毒力检测：LD50、ID50，毒素 药物敏感试验：纸片扩散法,二、检测病原菌成分 抗原检测： 凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光

2、技术 核酸检测： 1.核酸杂交技术:Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、原位杂交 2.PCR技术 3.基因芯片 4.16rRNA基因序列分析：编码rRNA，保守区、可变区,三、抗体的检测（血清学诊断） 凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集 沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳 补体结合试验： 酶联免疫吸附试验（ELISA）： 取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意义。,第二节 病毒感染的微生物学检查法,一、形态学检查 1.电子显微镜检查 直接镜检法：107颗粒/ml，电镜观察病毒颗粒的形态和结构 免疫电镜法（IEM）： 标本+特异性抗体 病毒颗粒聚集 电镜观察 轮状病毒的粪便、

3、HAV、HBV的血清、疱疹病毒的疱疹液，可早期诊断。 2.光学显微镜检查 痘病毒、观察包涵体、CPE,二、病毒分离培养的方法 1、动物接种 常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴等； 接种途径：皮下、皮内、脑内、腹腔、静脉等接种； 观察：动物出现感染症状，取病变组织进一步检查,2、鸡胚培养：孵化914天的鸡胚 接种途径有：绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊。 鉴定：血凝和血凝抑制试验,尿囊腔接种,羊膜腔接种,卵黄囊接种,绒毛尿囊膜接种,3、组织培养 器官培养、组织培养、细胞培养 细胞培养： 单层细胞培养、悬浮细胞培养； 原代细胞培养：由新鲜组织制备 二倍体细胞：二倍体性质，传4050代，人胚肺成

4、纤维细胞 传代细胞系：由突变的二倍体细胞或肿瘤细胞建立的，HeLa细胞,三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标 细胞的变化：CPE 红细胞吸附（HAd）： 红细胞凝集： 病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero细胞。 中和试验（NT）：是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验 空斑形成试验：蚀斑形成单位（PFU），感染性病毒的滴度用PFU/ml表示。 四、病毒成分的检测 病毒抗原的检测：HIV和HBV抗原 病毒核酸的检测,A B C A：未感染的成纤维细胞。 B：单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆。 C：呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融合。,五、病毒抗体的检测： 中和试验： 阳性：可能以前有过隐性感染，用于流行病学调查。 补体结合试验： 用已知病毒的可溶性抗原检测病人血清中有无相应抗体，作为近期感染的指标。,血凝抑制试验 病毒+红细胞 血凝现象 病毒+抗体+红细胞 血凝现象消失 用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行病学调查及鉴定病毒的型和亚型。 ELISA法：HSV、CMV、EB病毒等 蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未知病毒,小结,细菌