一种pH响应的荧光探针的合成与表征VIP

化学与环境科学学院研究与创新实验化学与环境科学学院研究与创新实验一种 pH 响应的荧光探针的合成与表征摘 要苝是一类具有强烈荧光的芳香化合物，它具有优异的化学稳定性、光电性质，受到人们的广泛关注，以苝酰亚胺为发光中心，以 PEO 链为增溶基团，可以合成一种水溶性荧光染料。本文具体内容如下：在酰胺位上接入了具有水溶性的树状多肽 PEO 链的基础上，将苝酰亚胺的海湾位置上再引入响应基团，最终合成了一种新型 pH 响应荧光探针。并通过紫外、荧光分光光度计测定这种化合物的光谱性能。关键词：苝酰亚胺；pH 响应；荧光探针化学与环境科学学院研究与创新实验Synthesis and characterization of a pH-responsible fluorescent probeAbstractPerylene is a kind of compound with a strong fluorescence, which received great attention for its remarkable chemical stability and optoelectronic properties. We can synthesize a water-soluble fluorescent probe without any responsiveness when the luminescence center is perylene and The PEO chain is a modified group.This paper shows that after inserting the PEO chain in the amide position, a modified group is inserted into the gulf position and we finally synthesize a pH-responsible fluorescent probe.In addition,we used UV and RF to characterize the spectral properties of the compound.Key Words: perylene; pH-responsible; fluorescent probe化学与环境科学学院研究与创新实验目 录 前言1.1 苝系荧光化合物11.1.1 苝系荧光化合物概述11.1.2 苝系荧光化合物应用11.1.3 苝系荧光化合物的溶解性 21.2 pH 荧光探针的发展 31.3 论文基本设计思路 32 实验部分2.1 引言42.2 主要试剂及仪器 42.3 实验步骤 52.4 结果讨论 6附图参考文献致谢化学与环境科学学院研究与创新实验1 前言1.1 苝系荧光化合物1.1.1 苝系荧光化合物概述苝系化合物是一类有强烈荧光的芳香烃化合物，具有大的共轭体系，苝四羧酸二酰亚胺母体分子（PDI）可以看作是两个萘分子单元组合后又连着一个酰亚胺，萘单元通过 sp2杂化键合形成的一个大平面芳香体，而大的芳香体连着酐单元即是 3，4，9，10- 苝四羧酸二酐（简称苝酐）。图 1-1 苝酐的分子结构苝具有一定的致癌性，又由于在酰亚胺区域引入取代基一般不会影响苝系物质的光物理性质，所以近年来的研究主要集中在取代的苝酰亚胺（PBI）上，该化合物毒性相对较小，分子结构如图所示，是一个封闭的发色团，其荧光量子产率也非常高（接近于 1） ，是一个较为安全的母体荧光化合物。图 1-2 苝酰亚胺的分子结构 1.1.2 苝系荧光化合物应用苝系化合物是一个大的缺电子体系，非常容易被还原，而难以被氧化，所以苝系化合物是一类光热稳定性和耐久性好、光谱吸收范围宽、光电转换效率高的有机半导体材料，在可见光的吸收带位于 450-600 nm 的范围内，广泛应用于颜料和染料 1、光电导材料、电致发光材料、太阳能电池材料、液晶材料 2、激光染料等领域。化学与环境科学学院研究与创新实验2（1）有机颜料苝系分子具有很好的分子共平面性及刚性，因此具有很高的化学稳定性，具有优异的耐热、耐光、耐候性，同时耐高温、耐溶剂、耐酸、碱。苝系化合物较为古老，从1913 年起就作为还原染料被人们的使用。其作为高档有机颜料主要用于汽车涂料、金属表面涂料、粉末涂料、外墙涂料及合成纤维原浆着色及塑料着色等。（2）生物荧光探针苝系化合物从可见区到红外区的光有很强的吸收，是一类性能优异的分子荧光材料，被广泛应用于分子开关设计及离子识别中。例如，苝酰亚胺的 N 取代基为脂肪族长链时，结构的特殊性使它能够插入细胞膜中，分子两端的亲脂性脂肪族长链分布于细胞膜两边的磷脂层中，苝母核则横穿细胞膜。分子的荧光特性不受影响，同时苝酰亚胺也不会诱导磷脂的非特异性相互作用。（3）太阳能电池与无机太阳能电池相比，有机太阳能电池虽有转换效率较低，结构无序，体电阻高等问题，但是有机半导体材料重量轻、成本低、加工性好、能吸收可见光且易于制备大面积电池等优点，使其成为很有潜力的电池。1.1.3 苝系荧光化合溶解性由于苝酰亚胺类化合物具有大的平面环状共轭体系，分子间 - 相互作用非常强，具有很大的晶格能，其溶解性很差。经过科学家们一系列的研究表明，经过化学修饰后的苝酰亚胺类化合物的溶解性能得到很大程度的提高。而且，在日常的生活中，常常需要将染料溶于水中使用。因此，合成苝酰亚胺类水溶性衍生物是很有必要的研究工作。通常增加苝酰亚胺的溶解性可以通过以下两方面对苝酐核的化学位置进行修饰，使共平面性降低，破坏结晶，增加溶解能力。第一方面：在苝核上引入亲水性的基团；第二方面：在苝核上连接上带有电荷的基团，从而将电荷转移至苝核，以抑制苝平面间 - 堆积 3作用。针对以上两方面，对于如何提高苝酰亚胺衍生物溶解性，学者们的方法通常有两种：其一是 Langhals 教授提出的，在酰亚胺的氮原子上引入增溶性的基团 4，以喹啉、咪唑或吡啶为溶剂，以醋酸锌为催化剂，苝四羧酸二酐和伯胺，在惰性气体的保护下回流。虽然这种方法得到的化合物在溶解性方面得到显著改善，但是荧光量子产率却没有太大变化。近年来主要通过第二种方法：就是 Seybold 教授首次提出的在海湾处引入取代基，即在苝四羧酸二酐和苝四羧酸二酰亚胺的 1,7 或 1,6,7,12 位上引入增溶性取代基团的方法。 （见图 1-2、1-3）化学与环境科学学院研究与创新实验31.2 pH 荧光探针的发展pH 荧光探针是随 pH 变化而荧光性质随之变化的一类物质。通过 pH 探针在某特定pH 值范围内荧光强度的增强或者减弱可以实现对 pH 的定性测量。另一种方法是“比例计量型(ratiometric)”检测。随着 pH 的变化,探针分子由于发生质子化/去质子化过程而导致激发(或发射 )波长发生明显移动,对激发(或发射) 光谱的比例变化能够实现对 pH 值的定量检测,这称之为“ 比例计量”, 这类探针为比例计量型荧光探针。比例计量型检测方法要求探针至少在两个激发( 或发射) 波长对被分析物(如 H+)有不同的敏感度。例如,对于某一特定的pH 荧光探针,一个选定的激发(或发射)波长的荧光强度相对于另一个激发 (或发射)波长可增强或降低。这些信号之间的比例通过校准可以指示 pH 值。比例计量方法的优点在于其与光学路径长度、探针浓度、光漂白和探针从细胞内流失等参数无关,因为这两个信号数据是从完全相同的环境中得到的,所以能够更好地做到定量检测和识别。 81.3 论文基本设计思路综上所述，苝酰亚胺具有较大的平面共轭结构，这不仅仅赋予其优异的光电性能和化学稳定性，而且作为智能探针发光中心，具有较宽的吸收光谱范围、强光学稳定性和较高的荧光量子产率。在苝酰亚胺酰胺位置上接入了 PEO 链之后，通过继续在海湾位置进行修饰引入识别基团，达到对 pH 的响应。故本文主要工作是合成带有修饰（响应）基团的化合物并将修饰（响应）基团接入到苝酰亚胺的海湾位置上。NOONOObbaaa酰 亚 胺 位b港 湾 位图 1-2 PDI重 要 反 应 位 图 示图 1-3 PDI 反应位图示化学与环境科学学院研究与创新实验42 实验部分2.1 引言最近，我们合成了一种苝酰亚胺探针（APBI） ，是一种两亲性并与生物素配体相连的探针 9。APBI 是在苝酰亚胺的两个酰胺位置接上水溶性 PEO 链，这使得探针具有高度水溶性和非常低的细胞毒性 10。为了后续修饰基团的接入，我们还在其海湾位置上接入了两个溴原子(命名 APBI-dBr)。以此为基本原料之一，可以在海湾位置接上修饰基团使之成为具有 pH 响应的荧光探针。修饰基团的合成路线如下：使对羧基苯硼酸与 N,N-二异丙基乙二胺发生酰胺化反应，得到的缩合产物与 APBI-dBr 进行 Suzuki 反应。从而接上修饰基团。图 2-1 APBI 结构2.2 主要试剂及仪器2.2.1 主要试剂：N,N-二异丙基乙二胺 分析纯 北京百灵威科技有限公司对羧基苯硼酸 分析纯 北京百灵威科技有限公司EDCI 分析纯 上海共价化学科技有限公司1-羟基苯并三唑（HOBt） 分析纯 上海共价化学科技有限公司DMF 分析纯 天津市科密欧化学试剂有限公司二氯甲烷 分析纯 天津市科密欧化学试剂有限公司无水乙醇 分析纯 天津市华东试剂厂柱层层析硅胶 工业品 天津市海洋化工厂图 2-2 APBI-dBr 结构化学与环境科学学院研究与创新实验5三乙胺 分析纯 天津市科密欧化学试剂有限公司APBI-dBr 自制甲苯 分析纯 天津市科密欧化学试剂有限公司无水碳酸钾 分析纯 天津市福晨化学试剂厂无水硫酸钠 分析纯 天津市科密欧化学试剂有限公司Pd(PPh3)4 自制2.2.2 试剂的纯化DMF：加入适量氢化钙，搅拌 24h 之后减压蒸出甲苯：加热回流 1h 后蒸出2.2.3 测试仪器1）核磁1H-NMR 测试在 Bruker 600 MHz NMR 波谱仪上进行。2）紫外光谱采用岛津 UV-2550 型紫外可见分光光度计。3）荧光光谱采用岛津 RF-5301PC 荧光分光光度计对样品进行测定.2.3 实验步骤2.3.1 合成路线B CONHOO NB COOH2OO NH2NNNOOOOO O O OO O O OOO OOOO OOCONHHNOCNNI II IIIVab图 2-3 合成路线图反应条件 a：EDCI 冰浴活化 40min，常温化学与环境科学学院研究与创新实验6反应条件 b：Pd(PPh 3)4，K 2CO3，N 2保护，80。2.3.2 化合物 III 的合成向 50mL 二口反应瓶中加入对羧基苯硼酸（化合物 I）0.1g，少量 DMF 溶解，冰浴条件下加入 EDCI 92.8mg，冰浴活化 40min。加入 69.8mgN,N-二异丙基乙二胺（化合物 II） 、74mgHOBt，搅拌，室温下反应 12h 后停止。取样，以 DCM：乙醇= 40:3 作为展开剂点板，第一个点即为所要产物 III。后处理：1、将 DMF 抽干，用水和 DCM 萃取、分液，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥、过滤并旋干。2、过硅胶柱：用 DCM：乙醇=25:1 作淋洗剂，且每 100mL 淋洗剂中加入 10 滴三乙胺。发现得到的产品不纯，爬大板（DCM：乙醇=40：3，80mL 中加入9 滴三乙胺） ，分离并旋干得到浅黄色粘稠液体，即为化合物 III，附录中附有核磁图可验证。2.3.3 化合物 IV 的合成称取 APBI-1 30.7mg，化合物 III 27mg，加入到 50mL 二口烧瓶中，加入 14mL 新蒸甲苯，溶解，加入 0.7mL 无水乙醇，0.7mL 2mol/L 的 K2CO3 溶液，抽换气三次用 N2 保护，加入 1.5mg Pd(PPh3)4 ，抽换气三次， N2 保护，加热到 80开始反应，反应时间约 11h。后处理：1、用水和 DCM 萃取分液，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥 2h，过滤旋干并真空干燥。2、过硅胶柱，在配制硅胶的时候在 DCM 中加入少量三乙胺，搅拌处理；淋洗剂为 DCM：乙醇=20:1 ，每 100mL 加入 8 滴三乙胺，旋干后得深红色固体。2.4 结果讨论2.4.1 产物的合成1）合成路线合成路线中共计两步反应。第一步是常见的酰胺化反应，EDCI 的作用是除去反