HPLC法测定大黄碳酸氢钠片中的大黄素和大黄酚的含量

1、HPLC法测定大黄碳酸氢钠片中的大黄素和大黄酚的含量 10-08-17 11:04:00 作者：曹锦红 潘渭樵 林黎编辑：studa20【摘要】 目的建立高效液相色谱法测定大黄碳酸氢钠片中大黄素和大黄酚的含量。方法 采用高效液相色谱法;色谱柱为Shimpack clcODS（1506.0mm，5.0um），流动相为甲醇0.1%【关键词】 高效液相色谱法; 大黄碳酸氢钠片;大黄素;大黄酚Abstract：Objective TO establish an HPLC method for the determination of emodin and chrysophanol in rhubarb

2、 sodium bicarbonate tablets.Methods An HPLC method was applied; Chromatographic column was Shimpack clcODS（1506.0mm，5.0um）;The mobile phase was methanol0.1% phosphoric acid （85：15）;Velocity of flow was 1.0ml/min;The detaction wavelength was 254nm.Resulet The linearty of this method was well.Emodin a

3、nd chrysophanol average recovery rates were 98.5%，99.3%;RSD=2.75%，2.83%（n=9）.Conclusion This method is simple,accurate with strong reproducibility，and can be used for the quality control of rhubarb sodium bicarbonate tablets.Key words：HPLC; rhubarb sodium bicarbonate table; emodin; chrysophanol 大黄碳酸

4、氢钠片是复方制剂，主要成份是由大黄、碳酸氢钠、薄荷油等组成，是助消化药及抗酸药类非处方药药品，主要用于食欲不振、胃酸过多1。大黄碳酸氢钠片的质量标准收载于卫生部药品标准化学药品及制剂第一册中1，并没有对大黄进行含量测定的内容，本文采用高效液相色谱法对其大黄素与大黄酚的含量进行测定。1 仪器、样品及试药 Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent Technologies 1200 DAD检测器，Agilent chemststion工作站。大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110756200110），大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110796200513），

5、大黄碳酸氢钠样品（市售，上海黄海制药有限责任公司，批号：070610、070912、080417）；甲醇为色谱纯，水为纯化水。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Shimpack clcODS（1506.0mm）；流动相：甲醇0.1%磷酸（8515）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；柱温：25；进样量：10l。2.2 溶液的制备 10-08-17 11:04:00 作者：曹锦红 潘渭樵 林黎编辑：studa202.3 专属性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10L，注入色谱仪，记录色谱图（见图14）。由图14可见，大黄素和大黄酚两色谱峰分离良好，且其他各味药材及辅料对含

6、量测定无干扰。 2.4 线性关系考察分别精密吸取大黄酚（浓度为121.7g/ml）和大黄素（浓度为113.0g/ml）对照品溶液1ml、2ml、3ml、5ml、10ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以大黄酚峰面积积分值（A）为纵坐标，浓度（x）为横坐标绘制标准曲线，结果见表1。表1 大黄酚、大黄素含量测定线性试验（略）注：结果表明：大黄酚和大黄素线性关系良好。2.5 精密度试验精密吸取同一大黄酚（浓度为121.7g/ml）和大黄素（浓度为113.0g/ml）对照品溶液10L，重复进样6次，记录峰面积，测定结果见表2。结果表明：大黄酚和

7、大黄素峰面积积分值的相对标准偏差分别为1.23%和0.14%表明精密度良好。表2 大黄酚、大黄素对照品的精密度试验（略）2.6 重现性实验取大黄碳酸氢钠片（批号070610）按2.1供试品溶液的制备项下制备6份样品，按照色谱条件注入高效液相色谱仪，测定大黄酚和大黄素的含量，结果见表3。结果表明：采用本方法测定大黄碳酸氢钠片中大黄酚和大黄素的含量，结果6份样品的峰面积积分值RSD分别为0.47%和1.32%，重现性良好。表3 大黄碳酸氢钠片中大黄酚、大黄素含量重复性试验（略）2.7 稳定性试验取同一供试品溶液（批号：070610），按2.1供试品溶液的制备下制备样品，分别在0、2、4、8、12、

8、24小时内测定大黄酚和大黄素的峰面积积分值，结果见表4。结果表明：RSD分别为0.11%和0.47%，表明大黄碳酸氢钠片样品在24小时内稳定。表4 样品大黄酚、大黄素的稳定性试验（略）2.8 加样回收率试验2.9 样品含量测定取批号（070610）的样品，按照2.1供试品溶液的制备项下方法分别制得供试品溶夜和对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定即得。见表7。表7 样品大黄酚、大黄素含量测定结果（略）3 讨论3.1 本品为片剂1。其中大黄主要含蒽醌类成分，游离性蒽醌不易溶解于水，结合性蒽醌和蒽醌苷类溶解于水2。本品中的大黄的主要提取成分是结合性蒽醌和蒽醌苷

9、3，故供试品溶液先采用甲醇超声提取，溶解出蒽醌类成分，然后进行水解和氯仿萃取，试验结果表明，本法提取完全，简单易行。3.2 本实验还对多种流动相条件4。结果发现以甲醇-0.1磷酸（85：15）作为流动相，所得色谱图中大黄素与大黄酚分离较好，柱效较高，样品测定无干扰，是比较理想的色谱条件。3.3 检测波长的选择，根据文献记载5，蒽醌类成分在254nm有最大吸收，故选择254nm作为检测波长。 采用HPLC法测定大黄碳酸氢钠片中大黄素和大黄酚的含量，方法简便、准确、重现性好，可以作为大黄碳酸氢钠片质量控制的方法.【参考文献】 1国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准化学药品及制剂S.第一册.中华人民共和国卫生部药典委员会出版社，1989：8.2国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）S.北京:化学工业出版社，2005：17.3匡海雪，董小萍.中药化