流式多因子检测技术课件

1、流式高通量多因子检测技术及应用 题纲II. AimPlex多因子检测技术的原理和特质III.需具备什么样的实验条件，才能开展AimPlex检测工作？ VI. AimPlex产品应用 I.多因子检测技术在生物医药研究中的应用 流式多因子检测技术在生物医药研究中的应用细胞因子与疾病免疫调节作用：调节着每个细胞乃至组织活动；直接参与了细胞间相互作用以及细胞外微环境的变化参与疾病发生：类风湿性关节炎； 强直性脊柱炎SLE； 银屑病； 细胞因子风暴以Th淋巴细胞为枢纽的细胞因子调节网细胞因子与疾病治疗多因子检测技术xMapR&DMillplexBioplexLuminex平台CBAFlowcytomix

2、流式基础上AimPlex流式多重定量技术 检测细胞表面蛋白或胞内蛋白多因子检测与疾病研究肿瘤生物学免疫相关代谢心血管疾病干细胞研究神经生物学肿瘤移植细胞凋亡更少样本高通量更短时间多因子检测涵盖了很多研究领域多因子检测产品广泛应用于疾病的研究 肿瘤 (如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌等) 心血管疾病 (如高血压、动脉粥样硬化) 糖尿病、肥胖症 自闭症、老年痴呆症 自身免疫性疾病 (系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、哮喘、 过敏反应等) 炎症感染 (如结肠炎、克罗恩氏病、败血症等) 传染性疾病 (如艾滋病、肝炎等) 其它 (如多发性硬化症、营养不良、青光眼、阻塞性肺病、银 屑病等)多因子检

3、测应用领域开发研究大学政府专业管理机构医学中心药物研发生物技术企业药物公司临床研究医院医学中心早期诊断临床实验室大学检测测试中心实验室诊断医院专业检测机构所有流式细胞仪客户 基础医学、生物学研究 基础免疫学研究 细胞生物学如信号传导、凋亡 癌症研究、传染病等药物开发和疗效研究什么是AimPlex多因子检测技术？AimPlex多因子检测技术：利用不同尺寸、不同荧光强度的多个微球群实现多因子的检测利用该技术，配合任何一台配备488nm激发光的流式细胞仪，即可实现24个指标的同步检测。 AimPlex技术原理流式细胞仪检测荧光，从而实现对蛋白抗原的检测；结合抗原标准品的标准曲线，可实现对蛋白抗原的定

4、量检测。 一系列荧光强度不同的微球包被有特异性捕获抗体，与待测样本孵育后，加入检测抗体，形成“三明治”复合物45123不同大小，不同荧光强度的捕获微球，在FCM FL4检测不同的目标蛋白PE 荧光强度即为靶蛋白量456123微球FL2 (Reporter Parameter)FL4(Differentiator Parameter)不同大小种类微球分布AimPlex检测过程60分钟的抗原抗体孵育30分钟生物素化检测抗体孵育20分钟链霉素亲和素-PE孵育具有488nm激发光源AimPlex结果的提取和分析流式细胞仪： 几乎所有流式细胞仪都可以使用，只要FCAP Array 3.0 软件可计算被测

5、样本中待检物的浓度标准曲线分析FCAP array 3.0 Software曲线自动生成线性或对数形式显示回归曲线拟合Human Th1/Th2 Standard: Blank样本检测举例Human Th1/Th2 Standard: 14 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 42 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 123 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 370 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 1,111 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 3,333 pg/mlHuman

6、Th1/Th2 Standard: 10,000 pg/mlHuman Th1/Th2 unknown 1Human Th1/Th2 unknown 2AimPlex优势 高通量，多指标同时检测一个标本多达24个指标 需要标本量少节省样品（25 L）、试剂、实验空间、仪器设备 选择灵活研究人员可以根据实验需要，自由组合检测指标 耗时短整个过程只需3个多小时 要求低 - 适用于所有含488激发光的流式细胞仪 宽范围，高灵敏 -更宽检测范围，高灵敏度，高特异性，高重复性更宽的检测范围Lower concentration range standard curve for better calcul

7、ation of samples with very low AFP concentration药明康德客户需求：检测小鼠肝癌模型的AFP浓度AimPlex and Luminex产品对比人外周血不同处理后分别用Aimplex Th1/Th2/Th17 (7个指标）检测和Luminex试剂盒检测结果对比AimPlex ELISAAimPlexELISA样本量15uL 350-700ul 所需检测板 1块 7块 操作时间4h47h 检测范围2-5000pg/mL 2 - 1500pg/ml 反应体系同一 不同 价格 10800元18000元VS例子：40个样本 7个指标：IFN-gamma,IL

8、-10,IL-17A,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha可供测试的样品来源高度多样化血清血浆脑脊液条件培养基各种细胞裂解液各种组织裂解液 - 肺、支气管、子宫内膜组织、肝、脾、脑、宫颈等组织。 泪液前列腺液初乳、羊水各种脓肿液腹水、肝囊肿液支气管肺泡灌洗液骨裂解液、滑液等龈沟液、唾液、痰液血凝块普通常见样品非常规样品几乎所有液质(fluids)的生物样本！小鼠血凝块样本检测Serum and blood clot lysate samples of mice treated with or without (Con) LPS were tested using AimPlex m

9、ouse cytokine assays. This experiment indicates that besides serum, blood clot (after lysed with AimPlex lysis buffer) can be used for measurements of many cytokines in blood and precious serum samples can be saved for other assays. Page 35AimPlex产品形式预混多因子单因子抗原标准品单因子检测试剂盒预混多因子检测试剂盒种属：人、小鼠、大鼠、灵长类，狗低价

10、定制 Th1/Th2/Th17 7-plex kitT辅助细胞对免疫系统的建立和功能健全起重要作用。AimPlex人和鼠及NH PTh 17多重检测系列产品可同步定量检测由Th1， Th2，Th17和Treg细胞分泌的细胞因子，为Th细胞功能鉴定提供有效的检测工具。IFNgamma, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A and TNFalpha需具备什么样的实验条件，才能开展多因子检测工作？ AimPlex易于在普通实验室开展AimPlex Filter Plate WasherAimPlex不同应用领域试剂盒应用分组名称候选待检物呼吸道炎症组sCD30, sE-s

11、electin, sICAM-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, , IFN-gamma, MCP-1, TNF-alpha, sVCAM-1, NGF特应性皮炎组sCD30, sICAM-1, IL-4, IL-5, IL-13, TNF- alpha扩充的心血管组Adiponectin, sCD40L, CRP, sE-selectin, sICAM-1, IL-1beta, IL-6, IL-8, , MCP-1, MPO, PAI-1, sP-selectin, TNF-alpha, t-PA, sVCA

12、M-1糖尿病组Adiponectin, CRP, sICAM-1, IFN-alpha, IFN-gamma, Iso-Insulin, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, , Leptin, MCP-1, MIP-1alpha, MIP-1beta, NGF, PAI-1, Resistin, TNF-alpha, TNF-beta, t-PA生长和分化组G-CSF, IFN- alpha, IFN-gamma, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, , IL-23, MCP-1,

13、 NGF, TNF-alpha免疫调控组sCD30, sCD40L, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-23, IFN-alpha, IFN-gamma, TNF-alpha炎症组sCD30, sCD40L, CRP, sE-selectin, G-CSF, sICAM-1, IFN- alpha, IFN-gamma, IL-1beta, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, , IL-23, MCP-1, MIG, MIP-1alpha, MIP-1beta, sPECAM-1, sP

14、-selectin, TNF-alpha, sTNF-R1, sVCAM-1多发性硬化症组sCD30, sICAM-1, IFN-gamma, IL-4, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-17A, , MCP-1, MIP-1beta, TNF-alpha, TNF-beta, sVCAM-1AimPlex不同应用领域试剂盒扩充的肥胖症组Adiponectin, sCD40L, CRP, sICAM-1, IL-6, , Leptin, MCP-1, MPO, NGF, OPG, PAI-1, Resistin, TNF-alpha, sTNF-R1疼痛组sICAM-1,

15、IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IFN-gamma, MCP-1, MIP-1 alpha, MIP-1beta, NGF, TNF-alpha, sVCAM-1先兆子痫组Adiponectin, IFN-gamma, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, , TNF-alpha类风湿性关节炎组sCD30, sE-selectin, sICAM-1, sICAM-3, IFN-alpha, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A

16、, , IL-23, MCP-1, MIP-1alpha, sP-selectin, TNF-alpha, sVCAM-1脓毒症/败血性休克症组Sepsis (CRP, sE-selectin, IL-1beta, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, , MCP-1, MIP-1 alpha, MIP-1beta, PAI-1, TNF- alpha, sVCAM-1), Septic shock (IL-1beta, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, IFN-gamma, G-CSF, MCP-1, PAI-1, TNF-alpha)系统性红斑狼疮组sCD30, sCD40L, IFN- alpha, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, , NGF, TNF-alpha, sVCAM-1肿瘤坏死因子/肿瘤坏死因子受体组sCD30, sCD40L, NGF, OPG,TNF-alpha, TNF-beta, sTNF-R1移植组CRP,ICAM and VCAM, sVCAM-1,sCD30, sICAM-1, IFN- alpha, IFN-gam