电针对震颤麻痹大鼠黑质Bcl

电针对震颤麻木大鼠黑质Bcl〔〕:

摘要：目的研究电针对震颤麻木大鼠黑质内Bcl-2、Bax表达的影响，探究电针治疗震颤麻木的作用机制。方法36只造模成功的雄性SD大鼠按随机数字表法分为模型组、电针组和左旋多巴药物组，另设正常组、假手术组，每组12只，共60只大鼠。应用免疫组化法观察大鼠黑质内Bcl-2、Bax的表达情况。结果与正常组、假手术组相比拟，模型组、电针组、左旋多巴药物组Bcl-2和Bax蛋白的表达均上调〔P

1资料与方法

1.1一般资料

100只雄性成年SPF级SD大鼠，〔25020〕g体重。实验动物由黑龙江中医药大学动物实验管理中心提供。所有实验用鼠常规适应性饲养1周，自由饮食、饮水，实验所有过程符合动物伦理实验标准。

1.2方法

1.2.1实验分组

利用行为学挑选造模成功的大鼠36只，随机分为模型组、电针组、左旋多巴药物组3组，每组12只，并设立正常组及假手术组2组，每组12只大鼠。正常组给予常规饲养；假手术组仅手术，不注射6-OHDA；模型组造模完成后不给予治疗；电针组给予电针治疗；左旋多巴药物组给予口服左旋多巴治疗。

2.1.1动物模型建立

采用右侧偏侧帕金森模型，造模前用0.3%戊巴比妥钠进展腹腔麻醉，待大鼠角膜反射消失后，将大鼠固定于立体定位仪上。在无菌环境中沿正中矢状线切开大鼠颅顶部皮肤，剥离皮下组织及骨膜，暴露前囟、人字缝，按PellegrinoLJ【1】等编著的大鼠脑立体定位图谱确定右侧黑质两注射点位坐标：第1点为前囟后3.0mm，正中线右侧2.5mm，硬脑膜腹侧8.6mm；第2点为前囟后2.4mm，正中线右侧2.7mm，硬脑膜腹侧8.6mm。以鼠颅骨钻按上述坐标钻直径为5mm的孔。用10L微量进样器以1L/min速度向嘴侧注射4L6-OHDA、向尾侧注射3L6-OHDA，每次注射完成后留针10min，然后以1.0mm/min的速度缓慢退针，再用明胶海绵填塞颅骨孔，对切开进展缝合。造模完成后2周腹腔注射APO诱发旋转行为〔向健侧旋转〕，注射10min后开始记录，共记录30min，旋转速度到达6转/min视为模型制备成功【2】。

2.1.2治疗方法

电针组大鼠给予电针治疗。在右侧舞蹈震颤区上点与下点采用0.25mmx25mm毫针进展针刺，连接KWD-808Ⅱ型全能脉冲电疗仪，电针波形选择疏密波〔频率为1Hz〕，调节电流强度至头部皮肤细微颤抖，每次治疗30min，每日治疗1次，共治疗20天。左旋多巴药物组给予左旋多巴1.0mg灌胃给药，每日治疗1次，共治疗20天。

2.1.3标本制备

治疗完毕后用0.3%戊巴比妥钠〔10mL/kg〕进展腹腔麻醉，灌注固定后，取脑内黑质置于4%多聚甲醛中固定，石蜡包埋备用。

2.2检测指标

2.2.1行为学检测

治疗完毕后进展行为学检测，所有实验用鼠给予腹腔注射APO，以诱发大鼠向左侧旋转，APO注射10min后开始记录，记录30min内旋转圈数。

2.2.2HE染色

在40x10倍光镜下观察实验大鼠脑内黑质病理形态学改变。

2.2.3免疫组化

在40x10倍光镜下观察实验大鼠脑内黑质Bcl-2及Bax蛋白的表达情况。

2.3统计学处理

统计分析处理采用SPSS19.0软件进展，用均数标准差表示所有数据，分析不同组采用单因素方差，采用t检验组间比拟，P0.05〕。见表1。

2.2病理形态学检测

正常组、假手术组大鼠黑质内神经细胞数量较多，组织构造明晰可见，细胞形态正常，无变性、坏死；模型组大鼠黑质内神经细胞数量明显减少，胞体皱缩，胞核固缩，可见炎性细胞浸润；电针组、左旋多巴药物组大鼠黑质内神经细胞数量较模型组增多，细胞变性程度减轻。

2.3黑质内Bcl-2、Bax蛋白的表达

与正常组、假手术组相比拟，模型组、电针组、左旋多巴药物组Bcl-2和Bax蛋白的表达均上调〔P

3讨论

目前，震颤麻木的发病机制尚未完全明确。大量实验研究说明，震颤麻木与多巴胺能神经元凋亡亲密相关【3】。Bcl-2和Bax参与细胞凋亡的过程，并发挥各自不同的作用。Bcl-2是抑制凋亡的因子，对神经细胞具有保护作用，而Bax是一种促凋亡蛋白，可以加速凋亡的进程。本实验研究发现，与模型组相比拟，电针组大鼠黑质内Bcl-2的表达明显升高，Bax的表达显著降低，说明电针可以通过上调Bcl-2及下调Bax的表达起到治疗震颤麻木的作用，这可能是电针治疗震颤麻木的作用机制。且电针组与左旋多巴药物组相比拟，对上述二者的影响不具有统计学意义，说明电针治疗与药物治疗的疗效接近。相比应用左旋多巴治疗，电针治疗不存在耐药性及毒性等问题，因此日后在临床治疗中可采用电针疗法治疗震颤麻木。

参考文献

【1】PellegrinoLJ,PellegrinoAS,CushmanAJ.Astereotaxicatlasoftheratbrain[M].PlenumnPress,1979:43.

【2】赵宇辉,黄亮,孙忠人.电针对震颤麻木大鼠行为学和细胞凋亡的影响[J].针灸临床杂志,2