土壤微生物测定方法

土壤微生物测定土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态:C/N呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。测定指标：1、土壤微生物量(MierobialBiomass，MB)能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um3的生物总量。它与土壤有机质含量密切相关。()而放出CO2CO的量和微生物体矿化率常数Kc因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。(测定油污染土壤中的微生物量—碳。受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。熏蒸提取-容量分析法操作步骤：土壤前处理和熏蒸提取200mL100mL0.5mol·L-1K2SO4（图水比为1:30mi300remi-125mL熏蒸开始的同时，另称取等量的3份土壤于200mL聚乙烯塑料瓶中，直接加入100mlL0.5mol·L-1K2SO4提取；另作3个无土壤空白。提取液应立即分析。测定吸取10mL上述土壤提取液于150mL（24mх295m10mL0.018mol·L-1K2Cr2O7—12mol·L-1H2SO42~3磷酸浴中煮沸10mi（1717℃冷却后无损地转移至150mL3~5次使溶液体积约为0.05mol·L-1硫酸亚铁标准溶液滴定，溶液颜色由橙黄色变为蓝色，再变为红棕色，即为滴定终点。结果计算有机碳量（mg·C·kg-1）

124103M（V0W

-V）f式中M为FeSO4V0V分别为空白和样品消耗的FeSO4（m，fW为烘干土质量g；土壤微生物生物量碳：Bc=Ec/kEC式中Ec为熏蒸与未熏蒸土壤的差值；kEC为转换系数，取值0.382、菌种测定作用。细菌用牛肉汁蛋白陈琼脂培养基平板混菌法培养测定1定。3、土壤呼吸强度和纤维分解强度土壤呼吸强度和纤维分解强度是土壤微生物活性的重要标志呼吸强度采用碱吸收滴定法。用土壤呼吸CO2测定法310mL试剂瓶中，22℃24h用exH23os红外CO。直接测定土壤呼吸的方法基本可分为静态气室法、动态气室法和微气象法三种。密闭静置培养法原理：CO2+KOH K2CO3+H2OK2CO3+KOH KHCO3+KCl+KHCO3+HCl KCl+H2CO3操作步骤：20g新鲜土（500mL的50mL20mL0.1MKOH溶液，然后密闭广口瓶，于28℃恒温培养24h。然后取出，以酚酞为指示剂，用0.1M的HCl出消耗用于吸收CO2KOH量。4、酶活性测定土壤酶大多数来自土壤微生物，在土壤中已发现50—60种酶，它们参与并催化土壤中要有脱氢酶、磷酸酶、精氨酸酶及芳基硫酸酯酶等。脱氢酶活性的测定通过测定呼吸链脱氢酶活性可表征微生物代谢活力大小。郑志永等通过对氯化碘硝基四氮哇(INT)比色法反应条件的研究，确定了呼吸链脱氢酶活性的测定方法。过氧化氢酶活性的测定（本部做，需要冰箱）20min1g土壤消耗表示，或运用注入土壤中的过氧化氢在反应后剩余量的方法测定。操作步骤：5g100mL0.5mL0~4℃冰箱中放置半小时。取出，立刻加入25mL冰箱贮存的含3%H2O2中半小时。取出，迅速加入2NH2SO44mL，用0.1NKMnO4溶液滴定。根据对照和试样消耗高锰酸钾的差，求出相当于分解的H2O2的量，酶活性以1g1h内消耗KMnO4的量计算。尿酶活性的测定尿酶1g3724h(mg)操作步骤：标准曲线的绘制：分别取0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mL50ug/mL的氮标准溶液于25mL容量瓶中。用水稀释至10mL，摇匀，加入1mL酒石酸钾钠，0.8mL钠氏剂，摇匀。慢慢加入4mL1MNaOH溶液，稀释至刻度，显色10min后，测定吸光度值。5g100mL10mLpH6.70.5mL混合处理15min后，加入10mL10尿素溶液（对照以水代替，置于3℃恒温箱中，培养48h。培养结束后，取出，加入20mL1MKCl。将悬浊液用滤纸过滤，吸取经过稀释的滤液1mL根据标准曲线查出氨氮含量。计算土壤尿酶的活性。蛋白酶活性的测定(pH=7.4)铜盐比色法方法原理：定颜色深度。操作步骤：标准曲线的绘制0~20mL50ug/mL20mL20mL650nm处，测定吸光度。测定操作称取5g土壤置于100mL三角瓶中。加入甲苯2mL，放置15min。计入20mL1%精胶溶液。于37℃恒温箱中，培养24h。与此同时，以水代替基质作为对照。培