2026年FISH荧光原位杂交技师继续教育试题附带

2026年FISH荧光原位杂交技师继续教育试题附带一、单项选择题（每题2分，共40分）1.荧光原位杂交（FISH）技术的基本原理是？A.抗原抗体特异性结合B.碱基互补配对的核酸分子杂交C.酶与底物的催化反应D.荧光素的自发荧光答案：B解析：FISH以荧光标记的核酸探针与样本中互补靶核酸序列进行碱基配对杂交，通过荧光显微镜检测信号，从而实现基因或染色体的定位与检测。2.FISH探针与靶DNA形成杂合双链前，靶DNA必须经过的处理是？A.乙酰化B.变性C.甲基化D.交联答案：B3.人类间期细胞FISH分析常用于检测下列哪类异常？A.蛋白质表达水平B.基因拷贝数变异与染色体非整倍体C.mRNA剪接位点突变D.线粒体膜电位答案：B4.HER2基因FISH检测中，常用的对照探针是？A.17号染色体着丝粒探针（CEP17）B.1号染色体端粒探针C.X染色体特异性探针D.全基因组涂染探针答案：A5.乳腺癌HER2FISH阳性（扩增）的判定标准（HER2/CEP17比值）为？A.≥1.0B.≥1.5C.≥2.0D.≥3.0答案：C解析：按ASCO/CAP指南，HER2/CEP17比值≥2.0判为扩增阳性；比值<2.0且HER2平均拷贝数≥6.0亦判为阳性，需结合具体拷贝数标准综合判断。6.FISH实验中，探针变性常用的温度范围是？A.25～37℃B.42～50℃C.70～80℃D.95～100℃答案：C7.杂交后为去除非特异性结合的探针，通常进行的步骤是？A.脱水B.严格条件下的洗涤C.封闭D.复染答案：B8.FISH结果观察中，用于核复染的常用荧光染料是？A.DAPIB.PI仅用于RNAC.伊红D.苏木精答案：A9.荧光显微镜观察FISH信号时，激发滤光片的选择依据是？A.载玻片厚度B.荧光染料的激发与发射波长C.物镜的数值孔径D.盖玻片的材质答案：B10.产前诊断中，快速检测21三体的FISH探针类型是？A.端粒探针B.染色体着丝粒特异性探针C.单基因位点探针D.微阵列探针答案：B11.FISH样本（如石蜡切片）进行蛋白酶消化的主要目的是？A.固定组织B.提高探针对靶核酸的可及性C.增强自发荧光D.中和电荷答案：B12.关于直接标记探针与间接标记探针的区别，正确的是？A.直接标记探针需通过免疫反应显色B.间接标记探针带有半抗原，需荧光抗体检测C.间接标记探针信号更弱且不可放大D.两者杂交条件完全不同，不可互换答案：B解析：间接标记常用地高辛或生物素等半抗原，杂交后需荧光标记的抗体或亲和素检测，信号可放大；直接标记探针直接偶联荧光素，操作简便但放大能力有限。13.慢性髓系白血病（CML）FISH检测的经典靶标是？A.PML-RARA融合基因B.BCR-ABL1融合基因C.MLL重排D.ETV6-RUNX1融合基因答案：B14.FISH杂交湿盒中加入甲酰胺的主要作用是？A.降低杂交温度要求、提高杂交严格性B.杀灭杂菌C.固定细胞D.增强荧光强度答案：A15.FISH图像分析时，随机计数细胞数一般应不少于多少个（间期核计数）？A.20个B.50个C.100～200个D.1000个答案：C16.下列哪项不是导致FISH信号弱的常见原因？A.探针浓度过低B.变性不充分C.杂交时间过短D.防淬灭封片剂使用得当答案：D17.组织切片FISH实验中设置的正常对照组织出现异常信号模式，应如何处理？A.照常报告样本结果B.判定样本为阳性C.查找实验失败原因，重新实验D.只报告阳性细胞百分比答案：C18.检测染色体易位常用的融合探针（双融合探针）在正常细胞中显示的信号模式为？A.1红1绿1黄B.2黄（融合）C.2红2绿D.3红1绿答案：C解析：正常未发生易位时，两条同源染色体上红、绿探针各自独立，呈2红2绿模式；发生易位后出现黄色融合信号。19.FISH与核型分析（G显带）相比，其突出优势是？A.可检测全基因组点突变B.可对间期细胞进行分析，无需细胞培养分裂中期C.分辨率一定高于核型分析D.成本更低答案：B20.FISH实验室的荧光信号猝灭主要与下列哪种因素有关？A.光漂白（强光长时间照射）B.杂交温度过低C.探针浓度过高D.洗涤温度过高答案：A二、多项选择题（每题3分，共15分）1.FISH技术在临床上可用于检测下列哪些项目？A.染色体微缺失/微重复综合征B.肿瘤相关基因扩增C.单碱基点突变D.染色体易位与融合基因答案：ABD解析：FISH适用于拷贝数异常、结构重排及基因扩增等大片段异常检测；单碱基点突变片段过小，超出常规FISH分辨能力，需用测序或PCR类方法。2.影响石蜡切片FISH成功率的标本相关因素包括？A.组织固定液的种类（应使用10%中性缓冲福尔马林）B.固定时间C.石蜡包埋的温度与时间D.切片储藏时间与条件答案：ABCD3.FISH质量控制措施正确的有？A.每批实验设置阳性和阴性对照B.定期校准荧光显微镜C.探针使用前验证有效期与储存条件D.只要信号可见即可报告，无需对照答案：ABC4.关于FISH探针种类，下列说法正确的有？A.着丝粒探针用于检测染色体数目异常B.位点特异性探针用于检测基因缺失或扩增C.涂染探针可检测染色体易位等结构重排D.端粒探针主要用于检测着丝粒数目答案：ABC解析：端粒探针针对染色体末端端粒序列，用于检测端粒区缺失或重排，与着丝粒数目检测无关。5.FISH技能操作中避免污染与错误的正确做法有？A.变性与杂交操作在适宜的杂交仪中进行并记录温度B.使用防淬灭封片剂封片后及时镜检C.洗涤液pH与温度按试剂盒要求严格控制D.探针加样后可长时间暴露于强光下答案：ABC三、判断题（每题1分，共10分）1.FISH检测中，杂交温度越高，杂交特异性越强，信号必然越好。答案：错误解析：温度过高会破坏碱基配对，导致信号减弱甚至无信号，须按探针与试剂盒优化条件执行。2.间期FISH可以快速获得结果，无需细胞处于分裂中期。答案：正确3.DAPI复染后应在暗处保存切片，以减少荧光淬灭。答案：正确4.FISH可替代所有分子检测方法，包括点突变检测。答案：错误5.石蜡切片FISH实验前需对切片进行脱蜡和水化处理。答案：正确6.荧光显微镜观察时可长时间用高倍物镜连续暴露于激发光下，不影响结果。答案：错误7.HER2FISH结果为扩增阳性时，提示患者可能适合抗HER2靶向治疗。答案：正确8.FISH探针一旦开封应尽量一次用完，反复冻融会影响探针活性。答案：正确9.正常人外周血间期核用21号染色体着丝粒探针检测，多数细胞显示2个信号。答案：正确10.FISH报告中只需描述信号数目，无需注明所用探针及判定标准。答案：错误四、简答题（每题5分，共20分）1.简述FISH实验的主要操作流程。答案：(1)标本制备（染色体/间期核滴片或石蜡切片脱蜡水化）；(2)标本预处理（胃蛋白酶消化、脱水、固定）；(3)探针与标本DNA同时变性；(4)杂交（湿盒中37～42℃过夜孵育）；(5)杂交后严格洗涤去除非特异性结合；(6)信号检测（直接标记可直接镜检，间接标记需荧光抗体孵育）；(7)DAPI复染、封片；(8)荧光显微镜观察、图像采集与结果分析报告。2.简述FISH检测HER2基因扩增的判定要点。答案：(1)在20×物镜下筛查，选取浸润癌区域；(2)至少计数20个有效浸润性肿瘤细胞核中的HER2与CEP17信号；(3)计算HER2/CEP17比值及HER2平均拷贝数；(4)比值≥2.0判为扩增阳性；比值<2.0且平均拷贝数≥6.0判为阳性，2.0～<6.0者需按指南进一步计数或结合IHC综合判断；(5)报告须注明探针名称、计数细胞数、比值与判定结论。3.简述FISH实验中常见的失败原因及相应排除方法。答案：(1)无信号：探针失活或变性不充分，应验证探针效期、更换探针、确认变性温度与时间；(2)信号弱：消化不足、杂交时间短或甲酰胺浓度不当，应优化蛋白酶消化与杂交条件；(3)背景高、非特异信号多：洗涤不严格或探针浓度过高，应调整洗涤温度/严格度、降低探针浓度；(4)核形态差、细胞丢失：消化过度或固定不当，应调整酶浓度与消化时间、规范固定；(5)荧光淬灭快：应避免强光照射，使用防淬灭封片剂并及时镜检。4.简述FISH检测的室内质量控制要点。答案：(1)每批检测设置已知阳性和阴性对照样本；(2)探针、试剂按说明书储存并记录效期，使用前平衡至室温；(3)杂交仪温度定期校准并记录运行参数；(4)荧光显微镜定期维护与校准，光源寿命登记；(5)建立标准操作规程（SOP），操作与结果双签复核；(6)定期参加室间质评，开展人员比对与培训；(7)异常结果（如对照失控）须查找原因并纠正后方可发报告。五、案例分析题（每题7.5分，共15分）1.某技师对一例乳腺癌石蜡切片行HER2双色FISH检测，计数20个肿瘤细胞，HER2信号总数为120个，CEP17信号总数为24个。(1)计算HER2/CEP17比值及HER2平均拷贝数；(2)判定结果并说明依据；(3)若IHC结果为3+，应如何处理？答案：(1)HER2平均拷贝数=120/20=6.0解析：本题考查FISH数据处理与ISH/IHC结果一致性判断。注意CEP17平均拷贝数异常（1.2，提示17单体）不影响比值≥2.0时的阳性判定，但应在报告中说明。2.某实验室对一组骨髓标本行BCR-ABL1双色双融合探针FISH检测，正常对照信号模式为2红2绿，阳性对照出现1红1绿2黄融合信号。患者样本计数200个间期核，其中60个细胞显示1红1绿2黄，140